黏著連接分子A在非小細胞肺癌組織中的表達及其臨床意義

張　珉 　黃　波　邱雪杉

(沈陽醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院病理教研室,遼寧　沈陽　110034)

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黏著連接分子A在非小細胞肺癌組織中的表達及其臨床意義

張珉 黃波1邱雪杉2

(沈陽醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院病理教研室,遼寧沈陽110034)

目的探討?zhàn)ぶB接分子(JAM)-A在非小細胞肺癌(NSCLC)組織中的表達及臨床病理意義。方法采用免疫組織化學 Elivision 法檢測JAM-A蛋白在82例NSCLC及10例癌旁正常肺組織中的表達。 結(jié)果JAM-A主要定位于細胞膜，82例NSCLC組織中，30例(37%)為高表達，在10例癌旁正常肺組織中均為低表達。JAM-A膜高表達同肺癌pTNM分期(P=0.012)，局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.007)，患者不良預后相關(guān)(P=0.02)。 結(jié)論JAM-A的高表達與NSCLC的進展密切相關(guān),檢測JAM-A可為監(jiān)測NSCLC預后及治療提供理論依據(jù)。

黏著連接分子A;非小細胞肺癌;腫瘤標志物

黏著連接分子(JAM)-A,主要表達于上皮或內(nèi)皮細胞的細胞間連接處以及循環(huán)血液的多種細胞表面〔1～5〕，參與維持細胞屏障完整性，調(diào)控上皮細胞及內(nèi)皮細胞運動，白細胞游走，血小板活化，介導病毒感染等多種生物學活動〔6，7〕。目前已發(fā)現(xiàn)JAM-A在乳腺癌等多種腫瘤中存在表達，但是，關(guān)于JAM-A在腫瘤發(fā)展過程中發(fā)揮何種生物學作用尚存在爭議，基于不同實驗條件的研究分別發(fā)現(xiàn)JAM-A可以促進〔8～11〕或抑制腫瘤發(fā)展〔12～14〕。在非小細胞肺癌(NSCLC)組織中，JAM-A的表達及臨床意義尚無報道，本文探討JAM-A在NSCLC發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其對NSCLC患者預后判定的臨床意義。

1　材料與方法

1.1材料來源及處理選取2002年1月至2006年12月經(jīng)病理確診的NSCLC標本82例，其中49例具有完整隨訪資料。隨訪截止時間為2011年12月。生存時間計算為手術(shù)日期到隨訪截止日期，或因復發(fā)轉(zhuǎn)移及其他原因死亡的日期。10例對照標本取自同期距離癌灶邊緣>5 cm以上并經(jīng)HE染色證實的正常肺組織。所有患者術(shù)前均未接受放、化療。82例肺癌標本中，男38例，女44例；年齡40～78歲，中位年齡59歲；肺癌標本根據(jù)世界衛(wèi)生組織2004年的分類標準分為鱗癌36例，腺癌46例；其中高分化11例，中分化27例，低分化44例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例。臨床病理分期根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年修訂的肺癌 pTNM 分期標準，Ⅰ期45例，Ⅱ期30例，Ⅲ期7例。

1.2主要試劑及方法所有切除標本均用10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，制成4 μm切片，經(jīng)脫蠟，脫苯，水化后，采用免疫組織化學法(Elivision法)檢測JAM-A蛋白表達情況。JAM-A單克隆抗體購自美國Abcam公司，Elivision法試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，首先用3%的過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，高溫高壓修復抗原，然后使用JAM-A一抗(1∶100)4℃濕盒內(nèi)孵育過夜，次日按照Elivision試劑盒說明書進行染色，DAB顯色，蘇木素復染。PBS代替一抗。判定標準：JAM-A定位于細胞膜，每張切片在高倍鏡下隨機選取10個視野(×400)，隨機計數(shù)100個細胞，細胞膜染色強度計分標準：0分(陰性染色)，1分(淡黃色染色)，2分(黃棕色染色)，3分(棕褐色染色)；腫瘤細胞染色范圍計分：0分(陰性染色)，1分(陽性細胞數(shù)1%～10%)，2分(陽性細胞數(shù)11%～50%)，3分(陽性細胞數(shù)51%～80%)，4分(陽性細胞數(shù)81%～100%)。兩項計分相乘為最終得分(0～12分)，得分≤4分為低表達，得分>4分為高表達。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗及 Fisher 確切概率法，生存數(shù)據(jù)分析采用Kaplan-Maier 法，采用Log-rank 法判斷差異性。

2　結(jié)　果

2.1免疫組織化學染色結(jié)果表1及圖1可見，JAM-A主要定位于細胞膜，82例NSCLC組織中，30例(37%)為高表達，在10例癌旁正常肺組織中低表達。JAM-A膜高表達同肺癌pTNM分期(P=0.012)，局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.007)相關(guān)，與患者性別(P=0.96)、年齡(P=0.818)、腫瘤組織類型(P=0.818)、腫瘤體積(P=0.105)、腫瘤分化水平(P=0.174)等均無明顯相關(guān)性。

表1　JAM-A蛋白表達與NSCLC臨床病理參數(shù)關(guān)系〔n(%)〕

2.2JAM-A膜表達水平與NSCLC患者預后生存率之間的關(guān)系對49例有完整的術(shù)后隨訪記錄的患者進行Kaplan-Meier生存時間分析顯示:肺癌組織細胞膜JAM-A高表達患者生存時間低于低表達患者〔(50 ± 8.92)個月vs(61± 4.31)個月,Log-rankP=0.02〕。見圖2。

圖1　JAM-A免疫組織化學染色Elivision法結(jié)果(×400)

圖2　NSCLC術(shù)后生存時間

3　討　論

JAM-A蛋白結(jié)構(gòu)由細胞外段，細胞內(nèi)段及跨膜段三部分組成，相鄰蛋白分子間可借細胞外段免疫球蛋白樣環(huán)袢結(jié)構(gòu)介導JAM-A二聚體形成并發(fā)揮調(diào)控作用〔15,16〕；同時，其蛋白細胞內(nèi)段含有PDZ結(jié)構(gòu)域，可與ZO-1，AF-6，PAR-3 等各種細胞內(nèi)支架蛋白結(jié)合并進一步介導信號轉(zhuǎn)導通路活化過程。JAM-A生物學功能較為復雜，可參與維持細胞屏障完整性，調(diào)控上皮細胞及內(nèi)皮細胞運動，白細胞游走，血小板活化，介導病毒感染，調(diào)控腫瘤進展等多種生物學活動〔17～19〕。

然而，關(guān)于JAM-A在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的具體作用仍然是一個富于爭議的話題。Naik 等〔12〕最早對12例乳腺癌和配對的非瘤組織標本以及50例乳腺癌及相應淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病灶標本進行研究，發(fā)現(xiàn)JAM-A的表達與乳腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移呈負相關(guān)。相反，McSherry等〔8,10〕先后對多個含有數(shù)百例乳腺癌病例的組織芯片及基因芯片信息進行研究，發(fā)現(xiàn)JAM-A高表達同乳腺癌進展及患者不良預后相關(guān)。Murakami 等〔9〕通過對包含444例侵襲性乳腺癌病例的組織芯片進行研究分析也得出了與 McSherry 等〔8〕相似的結(jié)論。由于后兩組研究采用的樣本量較大，全面研究分析了JAM-A表達同各種臨床病理因素及患者生存時間的關(guān)系，所得出的結(jié)論較為客觀可信，即JAM-A高表達同侵襲性乳腺癌的進展及患者不良預后相關(guān)。與McSherry等〔8〕及Murakami等〔9〕的研究結(jié)論類似，我們的研究發(fā)現(xiàn)NSCLC組織中JAM-A高表達同腫瘤 pTNM 分期，局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者不良預后相關(guān)，提示JAM-A高表達與NSCLC的進展密切相關(guān)。Lathia等〔11〕對惡性膠質(zhì)細胞瘤的研究也有類似的發(fā)現(xiàn)：JAM-A在腫瘤組織中的表達水平高于正常腦組織，JAM-A高表達同惡性膠質(zhì)瘤患者生存時間負相關(guān)，并參與腫瘤干細胞的干性維持。在癌細胞中JAM-A高表達的機制仍需進一步研究，Gotte 等〔20〕報道了Micro RNA miRNA-145以JAM-A為靶基因并干擾其轉(zhuǎn)錄，導致JAM-A蛋白表達減少，而在在乳腺癌組織中miRNA-145低表達，這也許可以解釋侵襲性乳腺癌組織中JAM-A高表達的成因，在NSCLC及惡性膠質(zhì)瘤組織中miR-145是否也發(fā)揮了同樣功效尚需進一步研究。然而，在腫瘤的進展過程中就此簡單將JAM-A定義為致癌因子是不全面的，Koshiba 等〔13〕對子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)JAM-A表達同腫瘤進展負相關(guān)，JAM-A低表達同患者不良預后相關(guān)。Fong 等〔14〕對于前列腺癌的研究發(fā)現(xiàn)JAM-A低表達同腫瘤侵襲及患者不良預后相關(guān)。上述這些看似矛盾的研究結(jié)果提示JAM-A的功能較為復雜，其所發(fā)揮的具體生物學作用可能具有組織特異性，不同組織內(nèi)由于各種信號蛋白表達及活化水平不同，可經(jīng)JAM-A介導活化不同的信號通路，發(fā)揮不同的生物學作用，這些都需進一步研究，以明確JAM-A調(diào)控各種腫瘤生物學行為的作用機制。

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14Fong D,Spizzo G,Mitterer M,etal. Low expression of junctional adhesion molecule A is associated with metastasis and poor survival in pancreatic cancer〔J〕.Ann Surg Oncol,2012；19(13):4330-6.

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20Gotte M,Mohr C,Koo CY,etal. miR-145-dependent targeting of junctional adhesion molecule A and modulation of fascin expression are associated with reduced breast cancer cell motility and invasiveness〔J〕.Oncogene,2010；29(50):6569-80.

〔2015-02-17修回〕

(編輯苑云杰/曹夢園)

張珉(1976-)，男，博士，講師，主要從事腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機制研究。

R734.2

A

1005-9202(2016)15-3737-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.059

1遼寧省腫瘤醫(yī)院病理科

2中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科中國醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院病理教研室