白芍配方顆粒質量標準的提高研究*

河北中醫學院河北省中藥配方顆粒工程技術研究中心

曹文利　曹秀蓮　王曉亞　范　帥　康立英　姜　海△　牛麗穎(石家莊 050091)

?

方 藥 研 究

白芍配方顆粒質量標準的提高研究*

河北中醫學院河北省中藥配方顆粒工程技術研究中心

曹文利曹秀蓮王曉亞范帥康立英姜海△牛麗穎(石家莊 050091)

提要目的：通過定性鑒別和定量分析研究，提高白芍配方顆粒質量標準控制。方法：采用薄層色譜方法以白芍對照藥材作為對照，對白芍配方顆粒進行多信息定性鑒別；利用高效液相色譜法同時測定芍藥苷和芍藥內酯苷含量，增加含測控制指標。結果：薄層鑒別中，白芍配方顆粒供試品色譜與白芍對照藥材色譜相應位置顯相同顏色的主斑點；含量測定中，芍藥苷在0.068～0.678 μg范圍內，呈線性關系( r2=0.999 8)；以測定的峰面積為縱坐標，芍藥內酯苷在0.068～0.676 μg范圍內，呈線性關系(r2=0.999 8)，線性關系良好；平均回收率分別為99.35%和101.53%(n=6)準確度良好。結論：本方法可行，重復性良好，完善和提高了白芍配方顆粒的質量控制。

白芍配方顆粒；全息薄層色譜；芍藥苷；芍藥內酯苷；高效液相色譜法；質量標準

白芍配方顆粒為符合炮制規范白芍飲片(毛莨科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根)經過提取、濃縮、干燥和制粒等現代制藥技術加工所得，作為傳統中藥飲片的有益補充，被應用于臨床。目前在全國范圍內各生產企業皆用其內控標準進行中藥配方顆粒的質量控制，白芍配方顆粒質量標準僅對芍藥苷單一指標進行了鑒別和含量測定。2015年12月食品藥品監管總局發布《中藥配方顆粒管理辦法(征求意見稿)》公告，未來監管部門將逐步放開中藥配方顆粒生產市場，中藥配方顆粒在臨床的應用越來越廣泛?！吨兴幣浞筋w粒管理辦法(征求意見稿)》要求應體現多成份和整體質量控制，因此進一步完善和提高白芍配方顆粒的質量標準很有意義。本研究按照2015版《中國藥典》一部，參考有關的文獻[1-3]，以白芍對照藥材為對照，采用薄層指紋色譜方法對白芍配方顆粒進行多信息的定性鑒別；基于高效液相色譜法同條件同時測定白芍配方顆粒中的芍藥苷和芍藥內酯苷活性成分，保證了配方顆粒對中藥材信息傳承控制，提高了白芍配方顆粒質量控制水平。

1　儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀：島津LC-15C液相色譜儀，SPD-15C 型紫外檢測器，SIL-10AF自動進樣器、CTO-15C柱溫箱、島津高效液相色譜LC工作站；電子分析天平：TB-215、BSA2245-CW(賽多利斯)；硅膠G板(青島海洋化工廠)；乙腈為色譜純、水為純化水，其他試劑均為分析純。

1.2試藥芍藥苷購自中國藥品生物制品檢定所(批號：110736-201438)；芍藥內酯苷購自上海源葉生物科技有限公司(批號：20120816)；白芍對照藥材(批號：120905-201109)購自中國食品藥品檢定研究院；白芍配方顆粒(批號：14070911、14081921、14101511)由石家莊神威藥業集團有限公司提供。

2　方法與結果

2.1定性鑒別實驗

2.1.1供試品溶液的制備：取白芍配方顆粒粉末適量，稱定0.5 g，加甲醇溶液3 mL溶解，超聲處理10 min，濾過，即得供試品溶液。

2.1.2對照藥材溶液的制備：取白芍對照藥材適量，稱定0.3 g，加甲醇3 mL，超聲處理10 min，濾過，作為對照藥材溶液。

2.1.3薄層色譜鑒別：按照《中國藥典》2015年版薄層色譜法(附錄IV B)試驗方法，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各5 μL，點于同一硅膠G 薄層板上，將三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸試液(40︰5︰10︰0.2)作為展開劑，展開8 cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱105℃至薄層板上斑點顯色清晰。

2.1.4鑒別結果：白芍配方顆粒供試品與白芍對照藥材在色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。見圖1。

圖1薄層色譜鑒別結果

2.2含量測定

2.2.1對照品溶液的制備：取在80℃條件下干燥至恒重的對照品芍藥苷和芍藥內酯苷約10 mg，精密稱定，分別放置于10 mL容量瓶中，分別加甲醇溶解至刻度，搖勻，得芍藥苷和芍藥內酯苷對照品母液；精密量取芍藥苷和芍藥內酯苷對照品母液0.3 mL，放置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含30 μg的芍藥苷和芍藥內酯苷混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液制備：取供試品白芍配方顆粒粉末約0.1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶，精密加入稀乙醇溶液50 mL，稱定重量，超聲30 min，取出，放冷；再次稱定重量，補足減失的重量，搖勻，過濾，即得。

2.2.3色譜條件：色譜柱, Diamosil C18柱(4.6×150 mm，5 μm)；流動相, 乙腈-0.1%磷酸溶液(15︰85)；流速,1 mL/min；檢測波長，230 nm；柱溫, 40℃；理論板數按芍藥苷和芍藥內酯苷峰計算應不低于3 000。

2.2.4專屬性試驗：分別取供試品溶液、混合對照品溶液和空白溶劑，按照“2.2.3”項色譜條件進樣采集。結果表明，混合對照品溶液和供試品溶液色譜中芍藥內酯苷和芍藥苷保留時間一致，且陰性對照無干擾峰, 如圖2。

圖2白芍配方顆粒、混合對照品和空白試劑HPLC圖

2.2.5線性關系：精密吸取混合對照品溶液2、4、8、12、20 μL按“2.2.3”項色譜條件測定。測定的峰面積作為縱坐標，以芍藥苷的進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，在0.068～0.678 μg范圍內，呈線性關系，回歸方程為：Y=174 336X-119 111，r2=0.999 8；以測定的峰面積為縱坐標，芍藥內酯苷的進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，在0.068～0.676 μg范圍內，呈線性關系，回歸方程為：Y=145 830X-107 146，r2=0.999 8，標準曲線見圖3，芍藥苷和芍藥內酯苷線性關系良好。

2.2.6精密度：精密吸取芍藥苷和芍藥內酯苷混合對照品溶液10 μL，依照“2.2.3”項所述色譜條件連續進樣6次，芍藥苷和芍藥內酯苷色譜峰面積RSD分別為0.40%和0.36%，小于2%，說明儀器精密度良好。

圖3對照品芍藥苷和芍藥內酯苷的標準曲線圖

2.2.7穩定性試驗：精密稱取供試品白芍配方顆粒(批號：14101511)約0.1 g，按上述供試品溶液制備方法制備。精密吸取白芍配方顆粒供試品溶液10 μL，分別在0、2、4、8、12、18 h進樣，按“2.2.3”項所述色譜條件分別進樣測定，計算芍藥苷和芍藥內酯苷峰面積RSD分別為1.88%和1.53%(n=6)，小于2%，結果表明白芍配方顆粒供試品溶液在18 h內穩定。

2.2.8重復性考察：精密稱取同一批供試品樣品(批號：14101511)6份，每份約0.1 g，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取10 μL，依照“2.2.3”項所述色譜條件進樣，計算得供試品溶液芍藥苷和芍藥內酯苷含量RSD分別為1.76%和1.83%(n=6)，小于2%，結果表明樣品測定重復性良好。

2.2.9準確度考察：采用加樣回收法，按照對照品溶液制備方法分別得含芍藥苷和芍藥內酯苷80%、100%和120%的樣品3份；按照供試品制備方法得同一批(批號：14101511)樣品9份，每份約0.1 g，精密稱定，精密加入一定量混合對照品，依照供試品溶液制備方法制備。依照“2.2.3”項所述色譜方法測定，芍藥苷和芍藥內酯苷平均回收率分別為99.35%和101.53%(n=6)，RSD分別為1.09%和1.36%，小于2%，符合規定，方法準確度良好。

2.2.103批樣品含量測定：采用上述色譜方法，對本品3批樣品芍藥苷含量為17.21、17.18、17.32 mg/mL，RSD值分別為1.79%、0.25%和0.18%；芍藥內酯苷含量為26.68、26.48、26.91 mg/mL，RSD值分別為0.19%、1.38%和1.87%。3批配方顆粒芍藥苷和芍藥內酯苷含量RSD值均小于2%，符合規定，含量測定結果可靠，本方法適用于芍藥苷和芍藥內酯苷兩指標同時測定。

3　討論

本研究依據《中國藥典》2015版一部中白芍的薄層鑒別方法，并參考有關文獻，[2]以白芍對照藥材代替芍藥苷對照品作為對照，更能體現和控制配方顆粒對白芍藥材的信息傳承；改進展開條件，采用了白芍總苷有效部位指紋薄層色譜方法，不僅有芍藥苷紫色斑點，同時還有其他苷類信息，體現信息更加豐富；供試品色譜斑點清晰、分離度佳，重現性亦良好。本方法更好控制了白芍配方顆粒鑒別信息，進一步保證了配方顆粒與藥材的一致性。

近期有關白芍現代研究表明，[4-6]芍藥苷和芍藥內酯苷均為白芍的入血成分，是白芍發揮藥效的活性成分。同時，白芍總苷體內代謝研究[6]表明芍藥苷在體內可能部分轉化為芍藥內酯苷。因此，芍藥內酯苷也是白芍的重要活性成分，將芍藥內酯苷和芍藥苷同時作為白芍配方顆粒的質量控制指標具有重要意義。本研究以藥典方法為基準，采用液相色譜方法同條件同時測定了芍藥苷和芍藥內酯苷兩個成份含量，將芍藥苷和芍藥內酯苷同時作為含測指標，加強了白芍配方顆粒的質量控制。

本方法簡便、快捷、有效，很好體現目前質量控制的新要求，從整體方面和多成份方面控制質量，能夠提升白芍配方顆粒的質量控制水平，保障配方顆粒白芍藥材信息的傳承。

[1]中國藥典委員會. 中華人民共和國藥典[S]. 北京: 化學工業出版社, 2010. 68-69

[2]謝培山, 林巧玲. 白芍總苷薄層指紋圖譜實驗研究[J]. 中藥新藥與臨床藥理研究, 2004, 15(3): 171-172

[3]姜弘，孟舒,陳再興. 白芍配方顆粒制備工藝和質量標準研究[S]. 中藥材, 2008, 31(4): 605-607

[4]王巧,郭洪祝,霍長虹,等. 白芍化學成分研究[J].中草藥,2007,38(7):972-976

[5]張玲非,劉敏彥,潘會敏,等. 白芍總苷在免疫性肝損傷大鼠的藥代動力學研究[J].中國藥理學通報, 2011,27(10):1 462-1 466

[6]Cao W, Wang X, Niu L, et al. Studies on metabolism of total glucosides of paeony from Paeoniae Radix Alba in rats by UPLC-Q-TOF-MS/MS[J]. Biomed Chromatogr, 2015,29(11): 1 769-1 779

(2016-06-12收稿)

牛麗穎，女，教授，碩士研究生導師。

R284.2

A

1007-5615(2016)03-0046-03

*河北省高等學?？茖W技術研究項目：No.ZD2015001；河北省中醫藥管理局資助項目：No.2015006；河北中醫學院青年基金項目：No.QN2015030

△石家莊神威藥業集團有限公司