寧宮止血膠囊提取工藝研究*

河北省石家莊市第四醫院藥劑科

張紅霞　王朝卿△　馮梅梅　李彩霞(石家莊 050017)

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寧宮止血膠囊提取工藝研究*

河北省石家莊市第四醫院藥劑科

張紅霞王朝卿△馮梅梅李彩霞(石家莊 050017)

提要目的：優選寧宮止血膠囊提取工藝，最大限度提出有效成分，方便服用(減少服用量)。方法：采用正交試驗法，以浸膏得率及黃芪甲苷含量為評價指標，考察乙醇濃度(A)、加醇量(B)、提取次數(C)、提取時間(D)4個因素對提取工藝的影響。根據篩選出的最佳提取工藝條件，做3批驗證試驗。結果：寧宮止血膠囊醇提部分最佳提取工藝為加8倍量90%的乙醇，煎煮3次，每次1 h。結論：根據方差分析及3批驗證試驗結果，考慮到生產實際情況，寧宮止血膠囊醇提部分最佳提取工藝為：加8倍量90%乙醇，提取3次，每次1 h。

寧宮止血膠囊；正交試驗；黃芪甲苷；醇提；HPLC；崩漏；提取工藝；優選

寧宮止血膠囊處方出自長期從事中醫婦科疾病治療的臨床專家，為臨床醫生治療崩漏(功能失調性子宮出血)的應用多年的經驗處方，處方由女貞子、黃芪、墨旱連、白芍、當歸、茜草、三七、海螵蛸、甘草等組成。以湯劑廣泛用于臨床，九十年代后又改為口服液(三七另服)在醫院廣為應用。止血作用快，服藥時間短，療效確切，服用安全，應用前景廣闊。但是口服液口味難矯，易生成沉淀，不太穩定，攜帶、運輸、貯存不方便，且三七粉另外沖服也不便于患者服用。為了使本方推向社會，更好地服務于患者，筆者對其進行了劑型改革，進而對其提取工藝進行了優選研究。

根據方中各藥味文獻資料報道的有效成分的理化性質，并考慮到生產、臨床應用情況，為達到最大限度提出有效成分，方便服用(減少服用量)的目的，提取部分分成兩個工藝路線，即以乙醇為溶媒的醇提工藝路線和以水為溶媒的水提工藝路線。本文僅對寧宮止血膠囊的醇提工藝路線加以研究。

1　儀器與試藥

1.1儀器9FW-320B型粉碎機(丹東市制藥機械廠)；KQ2200E型醫用超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)；日本島津LC-10A系列高效液相色譜儀；BP211D型電子天平(德國賽多利斯股份公司)。

1.2試藥試驗藥材女貞子、黃芪、墨旱連、白芍、當歸、茜草、三七、海螵蛸、甘草等均購自安國藥材市場，并經河北醫科大學藥學院生藥教研室聶鳳禔教授鑒定。試驗所用乙醇、甲醇、正丁醇等試劑均為分析純。

2　方法

2.1提取工藝選擇依據[1-3]女貞子：文獻報道女貞子水煎劑可提高肌體的免疫功能，有扶正固本的作用。而其所含標識性成分，齊墩果酸為廣譜抗菌素，對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌等都有抗菌作用。且齊墩果酸在水中溶解度很小。黃芪：文獻報道，黃芪的化學成分主要有皂苷、多糖、黃酮、氨基酸等，其水煎液有補氣固表，扶正固本之功效。黃芪甲苷作為黃芪主要有效成分之一，具有抗炎、降壓、鎮痛、鎮靜的作用，對免疫器官也有影響，但黃芪甲苷在水中的溶解度小。墨旱蓮：其主要成分為皂苷、煙堿、鞣質、維生素A、鱧腸素、多種噻吩化合物、蟛蜞菊內酯等，在水中有一定的溶解度，采用傳統的水煎煮法提取。白芍主要成分為芍藥苷。有文獻報導，用水提取芍藥苷，效果優于用甲醇、乙醇及丙酮等提取。當歸：主要成分為揮發油及非揮發性成分，在本方中當歸養血和營，臨床上取其補血和血之功效，故不另提揮發油，直接用水煎煮法提取。茜草：主要成分為蒽醌類、萘醌類(茜草酸苷、大葉茜草素、茜草內酯)、萜類等。藥理試驗證明，茜草中含有的水溶性成分具有止血作用，故采用水煎煮法。三七：主要成分為三七總皂苷、揮發油、三七素、氨基酸等。另據報道，三七含有大量淀粉，打粉后可代替輔料使用。海螵蛸：主要成分為碳酸鈣、殼角質、黏液質、大環內酯類物質及氨基酸、無機鹽和多種微量元素。現代藥理研究證明，它具有收斂止血作用，臨床上常用水煎煮法提取。甘草：主要成分為甘草甜素、甘草酸、甘草次酸、甘草萜醇、甘草苷、甘草素、甘草香豆素等，屬于三萜類化合物及黃酮類化合物，基本上能溶解于水，故采用水煎煮法提取。

根據本方的功能主治和方中各味藥的主要化學成分及其藥理作用，確定了方中各藥味的提取方法：女貞子、黃芪采用乙醇提取，藥渣與白芍、墨旱蓮等再用水為溶媒提取。

2.2藥材前處理取方中藥材，分別凈選，分別處理，按處方量稱量。

2.3醇提工藝研究[4-6]女貞子具有滋腎養肝之功，黃芪具有補氣作用，女貞子主要成分為齊墩果酸、多量葡萄糖、女貞子苷，黃芪主要成分為黃芪甲苷、黃芪多糖等，在乙醇中溶解性好。因此，女貞子、黃芪采用乙醇為提取溶媒，以浸膏得率及黃芪甲苷含量為評價指標，采用正交試驗法進行二者提取工藝的考察。

2.4正交試驗設計[7-9]根據預實驗和參考文獻，提取工藝以乙醇為提取溶劑，以影響提取工藝的因素乙醇濃度(A)、加乙醇量(B)、提取次數(C)、提取時間(D)作為考察因素，每個因素取3個水平，按L9(34)表進行正交試驗，以干膏得率、黃芪甲苷含量為評價指標，篩選寧宮止血膠囊的最佳提取工藝，因素水平設計表見表1。

2.4.1各評價指標的測定方法

2.4.1.1出膏率的測定：[6-7]按處方比例稱取女貞子30 g，黃芪藥材45 g，共9份。在平行條件下，按L9(34)正交表提取，濾液于45℃條件下減壓濃縮至流浸膏，置已恒重的蒸發皿中，60℃水浴蒸發近干，減壓干燥至恒重，計算浸膏得率。測定結果見表2，方差分析見表3。

表1　正交試驗因素水平表

2.4.1.2黃芪甲苷含量測定[9]：分別精密稱取各試驗號的干浸膏細粉約1.20 g，置錐形瓶中，加20 mL甲醇超聲處理30 min，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加20 mL水分次溶解，轉移至分液漏斗中，用氯仿提取4次(20、20、20、10 mL)，棄去氯仿層，再用水飽和的正丁醇提取4次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液提取4次(20、20、15、10 mL)，棄水層，正丁醇層用水洗至中性，水浴揮干，殘渣加甲醇5 mL溶解，作為供試品溶液。照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄V ID)測定。測定結果詳見表2，方差分析詳見表4。

色譜條件：色譜柱，Diamonsil(鉆石)C184.6×250 mm 5 μL；流動相︰乙腈︰水=37︰63。

檢測器漂移管溫度：105℃；載氣流速：2.7 L/min；撞擊器：關。

表2　正交試驗安排及結果表

表3　以干膏得率為指標的方差分析表

注：F0.05(2,2)=19.00

表4以黃芪甲苷提取量為指標的方差分析表

來源SSfFSPA4.565722.282816.30B0.776320.38822.77C15.001427.500753.58*D0.279920.14001.00誤差0.279920.1472

注：F0.05(2,2)=19.00

3　結果

3.1以干膏得率為考察指標，極差R值大小顯示，各因素作用的主次為A>C>B>D；由表3得知，A因素、C因素(提取次數)的影響差異具有顯著性(P<0.05), B、D差異無顯著性(P>0.05)，A3B3C3D1為寧宮止血膠囊最佳提取工藝。

3.2以黃芪甲苷提取量為考察指標，極差R值大小顯示，各因素作用的主次為C>A>D>B；由表4得知，C因素(提取次數)的影響差異具有顯著性(P<0.05), B、A、D差異無顯著性(P>0.05)，A1B3C3D3為寧宮止血膠囊最佳提取工藝。

3.3考慮到醇提工藝的目的，黃芪甲苷提取量指標較為重要，A1B3C3D3為最佳工藝。而B、D因素對兩個評價指標均無顯著性意義，極差又小，考慮到生產實際情況，最終確定寧宮止血膠囊最佳提取工藝條件為A1B2C3D2，即：加8倍量90%乙醇，提取3次，每次1 h。據此篩選出的工藝提取條件，做3批驗證實驗。

3.4驗證比較試驗按處方比例稱取女貞子30 g，黃芪藥材45 g，共3份。按寧宮止血膠囊最佳組合試驗條件A1B2C3D2進行3批驗證試驗。試驗結果見表5。

表5　寧宮止血膠囊提取工藝驗證對比試驗結果表

由上表結果可知，選定的寧宮止血膠囊醇提部分提取工藝最佳組合條件與最高實驗結果基本一致，可暫定為寧宮止血膠囊實際生產中醇提部分的生產提取條件。

4　討論

女貞子為方中君藥，文獻報道女貞子水煎劑可提高肌體的免疫功能，有扶正固本的作用。而其所含標識性成分，齊墩果酸為廣譜抗菌素，對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌等都有抗菌作用。且齊墩果酸在水中溶解度很小。黃芪為方中臣藥，文獻報道，黃芪的化學成分主要有皂苷、多糖、黃酮、氨基酸等。其水煎液有補氣固表，扶正固本之功效。黃芪甲苷作為黃芪主要有效成分之一，具有抗炎、降壓、鎮痛、鎮靜的作用，對免疫器官也有影響。但黃芪甲苷在水中的溶解度小。齊墩果酸、黃芪甲苷等易溶于乙醇，為達到最大限度提出有效成分，方便服用(減少服用量)的目的，因此確定女貞子、黃芪二者用乙醇提取。

由正交試驗結果及方差分析，結合3批驗證試驗結果，最終確定寧宮止血膠囊醇提部分最佳提取工藝條件為A1B2C3D2，即：加8倍量90%乙醇，提取3次，每次1 h。

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(2016-06-02收稿)

R284.2

A

1007-5615(2016)03-0049-03

*河北省石家莊市科技局資助項目：No.14163073

△河北省人民醫院藥學部(石家莊 050051)