正交設計優選皂礬洗劑的水提工藝

陳　珂，黃　銳，任桂林，趙　劍，明俊男，楊文信，楊春艷，蒲清榮

（1.四川省瀘州市食品藥品檢驗所，四川瀘州646000;2.西南醫科大學附屬中醫醫院，四川瀘州646000）

正交設計優選皂礬洗劑的水提工藝

陳珂1，黃銳2，任桂林2，趙劍2，明俊男2，楊文信2，楊春艷2，蒲清榮2

（1.四川省瀘州市食品藥品檢驗所，四川瀘州646000;2.西南醫科大學附屬中醫醫院，四川瀘州646000）

目的優選皂礬洗劑的提取工藝。方法以苦參堿為指標，對加水量、浸泡時間、提取時間、提取次數4個影響因素進行考察，采用正交試驗法優選皂礬洗劑的提取工藝。結果皂礬洗劑的最佳水提工藝是，按處方比例稱取藥材，加入10倍量水，浸泡1.5 h，提取3次，每次1 h。結論優選的水提工藝簡單可行，穩定可靠，具可操作性和重復性。

皂礬洗劑;水提工藝;正交設計;苦參堿

皂礬洗劑來源于西南醫科大學附屬中醫醫院皮膚科楊文信教授的多年臨床經驗總結，由苦參Radix Sophorae Flavescentis、皂角Gleditsia Sinensis、白礬Alum等7味中藥組成，可殺菌止癢、清熱燥濕，可用于脂溢性皮炎，或其他可能引起油脂分泌異常的疾病，如銀屑病、濕疹、頭癬等的輔助治療，且具有一定的抑菌功能［1］。苦參中含苦參堿，具有抗菌作用［2-3］。因此本試驗中選用苦參堿作為指標成分，采用正交試驗法對皂礬洗劑的提取工藝進行了篩選。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津);AUW120D型電子天平(日本島津);JP型全數字超聲波發生器(武漢嘉鵬電子有限公司);DB211型電熱鼓風干燥箱(成都電烘箱廠);BO-200T型多功能粉碎機(永康鉑歐五金廠); HH型數顯電熱恒溫水浴箱(江蘇國勝實驗儀器廠)。

1.2試藥

苦參堿對照品(批號為110805-200508)，購自中國食品藥品檢定研究院;甲醇，乙腈(色譜純)，水為哇哈哈純凈水，其余試劑均為分析純;處方中藥材均購自瀘州百草堂中藥飲片有限公司，經西南醫科大學附屬中醫醫院趙劍主任中藥師鑒定，均符合2015版《中國藥典（一部）》相關項下規定。

2　方法與結果

2.1正交試驗設計及因素水平

取苦參、皂角、白礬等7味中藥，采用加水煎煮法提取有效成分，以加水量（因素A）、浸泡時間（因素B）、提取時間（因素C）、提取次數（因素D）為因素，采用正交試驗法安排試驗，以干浸膏收率、提取物中有效成分苦參堿相對含量作為評價指標，優選皂礬洗劑的最佳水提取工藝。因素水平見表1。按處方比例稱取適量藥材9份，每份275 g，按表1中9種工藝條件組合加水提取，提取液濃縮成稠浸膏，備用。

表1　L9(34)正交試驗因素水平表

2.2干浸膏收率測定

取2.1項下得到的稠浸膏，置已烘干至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于80℃烘至恒重，計算干浸膏收率［(干浸膏重/總藥材重)×100%］。

2.3苦參堿含量測定

2.3.1色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱:Inertsil ODS-SP C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(15∶85，用三乙胺調節pH為6.5)，二元高壓梯度;流速:1 mL/min;柱溫:40℃;檢測波長:205 nm;進樣量: 10 μL。理論板數按苦參堿峰計算應不低于4 000［4-6］。在此條件下的色譜圖見圖1。

2.3.2溶液制備

精密稱取減壓干燥至恒重的苦參堿對照品適量，置20 mL容量瓶中，用適量蒸餾水溶解后，再用流動相稀釋得苦參堿質量濃度為0.575 g/L的對照品貯備液。

圖1　高效液相色譜圖

精密吸取對照品貯備液4.0 mL至10 mL容量瓶中，以流動相定容至刻度，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得對照品溶液。

分別取2.2項下干浸膏，研細，精密稱取0.2 g，置100 mL錐形瓶中，超聲提取2次，每次加氯仿20 mL，1 mL氨水，每次30 min，濾過，合并提取液，蒸干，用流動相溶解并定容至10 mL，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

按處方比例，稱取苦參以外的中藥材適量，模擬水提工藝制成不含苦參的陰性對照樣品，按供試品制備方法制備不含苦參藥材的陰性對照品溶液。

2.3.3方法學考察

線性關系考察:取2.3.2項下對照品貯備液0.4，0.8，1.0，2.0，4.0 mL分別置10 mL棕色容量瓶中，流動相定容至刻度，搖勻，取10 μL注入液相色譜儀，按擬定色譜條件進行試驗，記錄峰面積。以苦參堿峰面積積分值（Y）為縱坐標、進樣質量濃度（X，g/L)為橫坐標繪制標準曲線，得苦參堿的回歸方程為Y=8 421X-273.613，R2=0.999 6(n=5)。結果表明苦參堿進樣質量濃度在0.023～0.23 mg/mL與峰面積積分值呈良好的線性關系。

精密度試驗:取2.3.2項下同一對照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件測定，連續進樣6次。結果苦參堿峰面積的RSD為0.52%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，6，8，12 h時進樣10 μL注入液相色譜儀，測定苦參堿峰面積。結果的RSD為1.21%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內基本穩定。

重復性試驗:取同一樣品制備的供試品溶液6份，按2.3.1項下色譜條件測定苦參堿面積，結果的RSD為1.51%(n=6)，表明方法的重復性良好。

加樣回收試驗:取2.1項下已知含量的正交試驗5號的供試品溶液，加入2.3.2項下苦參堿對照品溶液1 mL，按擬訂色譜條件進行測定，計算加樣回收率。結果見表2。

表2　苦參堿加樣回收試驗結果（n=6）

2.4正交試驗結果及方差分析

取2.1項下9份稠浸膏，按2.3.2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進行測定，結果見表3，方差分析結果見表4。由方差分析結果可知，因素C提取時間對于指標具有顯著影響。經直觀分析，因素影響大小的順序為提取時間＞提取次數＞加水量＞浸泡時間。綜合考慮，得優化處方條件為A3B3C2D3，即皂礬洗劑原藥材加入10倍量水，浸泡1.5 h，提取1 h，共提取3次。

2.5工藝驗證

精密稱取3份處方中所含的藥材，照上述確定的最佳工藝條件制成皂礬洗劑，烘成干浸膏，再按2.3.2項下方法制備供試品溶液，按擬定色譜條件進行測定。結果3批樣品浸膏收率平均值為14.85%，RSD為0.48%;所含苦參堿的平均含量為11.84 mg/g，RSD為1.35%。結果表明，該優選工藝穩定可行。

3　討論

預試驗曾考察藥材粗細度、吸水率、加水量、浸泡時間、煎煮時間、提取次數對苦參堿相對含量的影響［7-9］，最終選取對提取效果相對影響較大的4個因素（加水量、浸泡時間、提取時間、提取次數）作為本試驗的考察因素。結果表明，L9(34)正交試驗所優選的水提工藝穩定可行。

表3　L9(34)正交試驗結果

表4　方差分析結果表

皂礬洗劑以苦參為君藥，水提工藝以苦參堿作為質量控制指標。苦參堿含量測定方法參考了2015年版《中國藥典（一部）》苦參藥材的液相色譜條件［10］及0.05mol/L磷酸二氫銨水溶液(H3PO4調節pH為2.5)-甲醇-乙腈-高氯酸鈉(900 mL∶20 mL∶80 mL∶6 g)［11-12］，結果分離效果不好且峰形不對稱，后改用以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用三乙胺調節pH為6.5)流動相并分別以不同比例測定，確定以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(15∶85，用三乙胺調節pH為6.5)為流動相時能較好地將苦參堿分離。參考文獻［13-15］，考察了C18色譜柱和氨基色譜柱下苦參堿的色譜峰形、分離度，發現采用適宜的流動相比例均可達到苦參堿分離度的要求;C18色譜柱下無法檢測出氧化苦參堿，有待于進一步驗證。C18色譜柱較氨基色譜柱耐用，氨基色譜柱維護保養較復雜，故本試驗采用C18色譜柱，這有別于藥典中采用氨基柱來測定苦參堿相對含量，可作為高效液相色譜法測定苦參堿的一種方法參考。

本試驗中以苦參堿相對含量為指標，通過正交試驗法優選水提工藝，簡單可行，穩定可靠，具可操作性和重復性，可為大規模生產提供理論依據。

綜上所述，苦參中苦參堿可作為提取工藝的篩選指標，有利于提高該洗劑的質量標準。所建立的HPLC法快速、準確、靈敏度高，可作為皂礬洗劑生產過程中的質量控制方法。

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Optimization of Water-Extraction Technology of Melanterite Lotion by Orthogonal Design

Chen Ke1，Huang Rui2，Ren Guilin2，Zhao Jian2，Ming Junnan2，Yang Wenxin2，Yang Chunyan2，Pu Qingrong2
（1.Luzhou Institute For Drug Control，Luzhou，Sichuan，China 646000；2.The Affiliated TCM Hospital of Southwest Medical University，Luzhou，Sichuan，China646000）

ObjectiveTo optimize the preparation technology of melanterite lotion.MethodsThe contents of matrine was taken as the indexes，the factors of the amount of water，time of soaking and extraction，and extraction times were investigated.Orthogonal design was used to optimize the prepartion technology for extrating melanterite lotion.ResultsThe optimal preparation technology was as follows：adding 10 folds of water，soaking for 1.5 h，extracting 3 times，1 h/time.ConclusionThe optimized preparation technology for melanterite lotion is reasonable，feasible，stable，reliable and has good reproducibility.

melanterite lotion；water-extraction technology；orthogonal design；matrine

TQ461;R286.0

A

1006-4931（2016）13-0037-03

陳珂(1970-)，女，大學本科，副主任藥師，研究方向為藥物分析，(電話)0830-3162253(電子信箱)365369747@qq.com;蒲清榮，大學本科，主任藥師，研究方向為中藥制劑，本文通訊作者，(電話)0830-3162253(電子信箱)365369747@qq.com。

2016-02-10;

2016-03-20）