淺談離子色譜法檢測生鮮乳中硫氰酸根

趙化芳

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆　烏魯木齊　830063）

淺談離子色譜法檢測生鮮乳中硫氰酸根

趙化芳

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆烏魯木齊830063）

應(yīng)用離子色譜法測定生鮮乳中硫氰酸根的檢測方法，用乙腈沉淀蛋白，嘗試?yán)鋬鲭x心法去除脂肪；對比等度淋洗與梯度淋洗檢測效果，尋找最快捷、準(zhǔn)確、使用的檢測方法。

離子色譜法；生鮮乳；硫氰酸根

硫氰酸鈉（NaSCN）是白色斜方晶或粉末，在體內(nèi)釋放的氰根離子可使組織不能利用氧，而出現(xiàn)惡心，嘔吐，抽搐，呼吸衰竭等中毒癥狀，并妨礙機(jī)體對碘的吸收，降低甲狀腺過氧化氫酶的活性，造成碘缺乏進(jìn)而引起甲狀腺腫大［1］。我國于1995，1996年先后發(fā)布了在乳品中的使用規(guī)范和添加劑標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定添加硫氰酸鈉15 mg/kg，利用乳過氧化物酶體系保存生鮮牛奶，防止牛奶腐?。?］。由于硫氰酸鹽的毒性作用及其濫用，我國于2005年和2007年先后取消了在乳品中的使用規(guī)范和添加劑標(biāo)準(zhǔn)，并在2008年12月12日公布了《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑品種名單（第一批）》，明確規(guī)定乳及乳制品中硫氰酸鈉屬于違法添加物質(zhì)［3］。我國指定的硫氰酸根檢測方法為離子色譜法。

1　原理

生鮮乳樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白，經(jīng)冷凍離心法或RP柱法去除脂肪后，過濾，用離子色譜儀外標(biāo)法測定。

2　試劑和材料

（1）水為去離子水，符合GB/T 6682中用水規(guī)定，硫氰酸鈉（NaSCN，純度≥99.99%），乙腈（色譜純），旋渦震蕩儀。

（2）硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：將硫氰酸鈉于101 ℃～103 ℃烘箱內(nèi)烘干2 h，在干燥器內(nèi)冷卻至室溫。準(zhǔn)確稱取干燥后的硫氰酸鈉0.139 57 g于燒杯中，加水溶解，轉(zhuǎn)移定容于1 000 mL容量瓶內(nèi)，混勻。該硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液濃度為100 mg/L。置于4 ℃保存，有效期一個(gè)月。

（3）硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1.2）0、20、50、100、400、800和1 000 μL于7個(gè)100 mL容量瓶內(nèi)，用水定容，混勻，得到濃度分別為0、0.020、0.050、0.100、0.400、0.800和1.000 mg/L的硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。該標(biāo)準(zhǔn)工作溶液現(xiàn)用現(xiàn)配［3］。

3　儀器設(shè)備

離子色譜儀：配淋洗液發(fā)生器和電導(dǎo)檢測器，冷凍離心機(jī)，10 mL注射器，針孔濾頭：0.22 μm（有機(jī)系），分析天平：感量0.000 1 g，烘箱。

4　淺談樣品前處理

用移液槍準(zhǔn)確量取經(jīng)旋渦混勻的樣品4 ml，加入乙腈5 ml沉淀蛋白，取上清液稀釋10倍，過RP柱去脂。由于過RP柱去除脂肪較復(fù)雜，成本較高，影響因素較多，回收率低。在實(shí)驗(yàn)中開始從兩個(gè)方面嘗試?yán)鋬鲭x心的方法去除脂肪。

方法一，溫度均為-4 ℃，轉(zhuǎn)速均為2 000 rmp，離心時(shí)間分別為2 min，5 min，8 min；

方法二，溫度均為-4 ℃，離心時(shí)間均為10 min，轉(zhuǎn)速分別為2 000 rmp，5 000 rmp，8 000 rmp。

經(jīng)過多次試嘗和對比發(fā)現(xiàn)，在溫度為-4 ℃，轉(zhuǎn)速為8 000 rmp，離心時(shí)間為10 min時(shí)，得出的圖譜分離效果較好，且試驗(yàn)操作過程簡捷，成本低，影響因素少，回收率高［4］。

5　色譜條件的選擇

在樣品前處理、儀器型號、色譜柱類型、柱溫、進(jìn)樣量、流速等條件完全相同的情況下，通過梯度洗脫（濃度為40 mmol/L KOH）和等度洗脫（0～13 min和18.1～23 min，氫氧化鉀濃度為45 mmol/L，13.1～18 min，氫氧化鉀濃度為70 mmol/L）兩種色譜條件，測得0.2 mol/l標(biāo)樣峰面積分別為：0.092 8 μS*min，0.091 6 μS*min［5］。其它檢測數(shù)據(jù)如表1：

經(jīng)統(tǒng)計(jì)，等度洗脫與梯度洗脫平均保留時(shí)間相差1.976 min，平均回收率相差0.21%，經(jīng)過計(jì)算，梯度洗脫和等度洗脫的保留時(shí)間、峰面積、回收率的RSD值均小于1，精密度和回收率均符合試驗(yàn)要求，均可用于生鮮乳中硫氰酸根的檢測。但等度洗脫降低了淋洗液氫氧化鉀的濃度，縮短了保留時(shí)間，降低了試驗(yàn)成本，提高了檢測效率。

表1　硫氰酸根0.2 mg/l添加樣品結(jié)果匯總表

在溫度為-4 ℃，轉(zhuǎn)速為8 000 rmp，離心時(shí)間為10 min的樣品前處理下，通過等度洗脫的色譜條件下進(jìn)行試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=0.486X-0.003，R=0.999 9。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)品和樣品色譜圖，分別為圖1和圖2。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)好，基線穩(wěn)定，分離度高，干擾物質(zhì)少，出峰時(shí)間短，是可以應(yīng)用生鮮乳中硫氰酸根的檢測的一種方法。

圖1　標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2　樣品色譜圖

6　注意事項(xiàng)

在取樣和樣品稀釋過程均應(yīng)充分混勻，增加數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度；冷凍離心時(shí)，應(yīng)提前將離心機(jī)的內(nèi)部溫度調(diào)到需要的溫度范圍，因轉(zhuǎn)速和溫度都是影響去脂效果的重要因素；樣品上機(jī)前，先將排除氣泡，平衡離子色譜系統(tǒng)兩個(gè)小時(shí)以上，確?；€穩(wěn)定，減少儀器干擾。

7　淺談小結(jié)

經(jīng)過多次的嘗試和操作得出，在選擇離子色譜法檢測生鮮乳中硫氰酸根含量時(shí)，樣品前處理時(shí)，可采用溫度為-4 ℃，轉(zhuǎn)速為8 000 rmp，離心時(shí)間為10 min的冷凍離心去脂法；色譜條件選擇時(shí)，可采用等度淋洗的方法檢測。

［1］郭棟梁，阮嚴(yán)東，毛江勝.微膜過濾等度離子色譜法測定生鮮乳中硫氰酸根殘留量［J］.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，（12）.

［2］劉全宇.不同地區(qū)生鮮乳中硫氰酸根的監(jiān)測［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2015，（21）.

［3］夏淑鴻，劉偉華，李培根，等.等度離子色譜法測定生鮮乳中硫氰酸根的方法研究［J］.飼料廣角，2013，（1）.

［4］李輝，徐秀玲，穆阿麗.離子色譜法檢測生鮮乳中硫氰酸根改進(jìn)初探［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2014，（3）.

［5］傅徐陽，姜毓君.離子色譜法測定乳及乳制品中的硫氰酸根［J］.中國乳品工業(yè)，2014，（9）.

（編輯：晏兵兵）

TS252.7；O657.75

B

1006-799X（2016）14-0088-02

趙化芳（1987-），女，新疆烏魯木齊人，助理獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)和實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢測工作。