一例豬圓環(huán)病毒病2型和大腸桿菌病混合感染的診斷

杜海燕，陳光麗，荊汝頂，秦保亮，韓俊偉

（1.新鄉(xiāng)市動物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 新鄉(xiāng) 453000）

一例豬圓環(huán)病毒病2型和大腸桿菌病混合感染的診斷

杜海燕1，陳光麗1，荊汝頂1，秦保亮1，韓俊偉2

（1.新鄉(xiāng)市動物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 新鄉(xiāng) 453000）

豬圓環(huán)病毒病是指以圓環(huán)病毒-2型（PCV2）為主要病原，單獨或混合感染。它是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的主要病原，一般于斷奶后2-3天或1周發(fā)病，急性發(fā)病豬群中，病死率可達10%。大腸桿菌主要是一種條件性致病菌，其中以仔豬黃白痢最為常見。2016年3月份，某豬場1月齡仔豬突然發(fā)病，病死率較高，送檢病豬3頭進行病因診斷。為了解該規(guī)模化豬場疫病的感染狀況，通過該豬場豬群發(fā)病情況及剖檢病理觀察，初步判斷該豬場發(fā)病豬疑似為豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2型或細菌感染，通過進一步分子生物學(xué)檢測及細菌分離培養(yǎng)與鑒定，確診該豬場發(fā)病豬為豬圓環(huán)病毒2型和大腸桿菌混合感染。

豬圓環(huán)病毒2型；大腸桿菌；診斷

1　發(fā)病情況

該豬場采取自繁自養(yǎng)方式，共存欄生豬230頭，其中保育豬65頭，病死率達20%左右。主要表現(xiàn)為精神沉郁，體溫升高，被毛蓬亂，呼吸急促，腹瀉，消瘦，體表淋巴結(jié)腫大，病死豬明顯消瘦，貧血、可視粘膜黃疸。

2　剖檢病理變化

對送檢3頭1月齡病死豬進行剖檢，結(jié)果均可見胃腸脹氣，肝臟黃染，且肝臟有明顯壞死灶；脾臟腫大，邊緣有丘狀突起，并有黑色梗死；肺堅硬出現(xiàn)實質(zhì)性病變；腎臟針尖狀出血點；心包心耳出血；腸及腸系膜出血，腸系膜淋巴結(jié)腫大。部分剖檢病理變化見下圖：

3　豬圓環(huán)病毒-2型病毒核酸檢測

3.1DNA提取

分別取病豬病理變化明顯的淋巴結(jié)、脾臟和肺臟組織研磨，反復(fù)凍融3次，8 000 rpm離心10 min，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

3.2豬圓環(huán)病毒熒光PCR擴增

利用豬圓環(huán)病毒-2型病原核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）對待檢病料進行檢測。擴增體系根據(jù)試劑盒說明進行。標(biāo)記熒光基團種類報告基團FAM，淬滅基團TAMRA。擴增反應(yīng)條件：94 ℃：2 min，后94 ℃30 s～55 ℃ 45 s（采集熒光），40個循環(huán)。

3.3結(jié)果分析判定

反應(yīng)結(jié)束后，Ct值在40以上的為陰性，Ct值小于35的為陽性，Ct值在35～40之間，為灰區(qū)，需要進行重復(fù)試驗。重復(fù)試驗后，Ct值仍在35～40之間，判斷為陽性，沒有熒光值增長為陰性。結(jié)果見圖1。

圖1　圓環(huán)病毒-2型病原核酸檢測結(jié)果

根據(jù)熒光PCR擴增結(jié)果可知，陽性對照Ct值18.22，待檢樣品Ct值是26.57，出現(xiàn)特異性熒光曲線，陰性對照未出現(xiàn)特異性熒光曲線。結(jié)果顯示送檢病料檢測到豬圓環(huán)病毒-2型病原核酸，表明病死豬感染豬圓環(huán)病毒-2型。

4　討論

豬圓環(huán)病毒-2型在我國健康豬群中已普遍發(fā)生，表現(xiàn)為流行范圍廣、混合感染嚴重、血清陽性率高、尤其種豬抗體陽性感染率最高，PCV-2的感染會造成動物免疫抑制，再感染其他病原機會增大，豬群易受到豬瘟、偽狂犬病、大腸桿菌病等的侵襲。豬圓環(huán)病毒-2型導(dǎo)致的仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的源頭在種豬上，而發(fā)病的一般是仔豬，母豬通過多種途徑排毒傳染哺乳仔豬，造成仔豬的早期感染。由此表明該豬場可能存在豬圓環(huán)病毒的隱形感染，通過采取綜合性防治措施來預(yù)防本病。

目前疫苗免疫主要依靠進口苗，導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高。因此主要靠加強飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激，控制繼發(fā)感染以降低損失。嚴格采取“全進全出”方式，清除帶毒種豬并凈化，加強引種檢疫，嚴防該病進場，做好消毒措施，尤其保育豬圈清空后，消毒晾曬一周后再引入豬群。一旦發(fā)生豬圓環(huán)病毒感染，易并發(fā)細菌性感染，治療時可配合廣譜抗菌藥物或進行藥敏試驗選擇敏感性抗菌藥物，減少并發(fā)感染。

（編輯：晏兵兵）

S858.28

A

1006-799X（2016）16-0035-01

杜海燕（1983-），女，河南新鄉(xiāng)人，助理獸醫(yī)師，主要從事動物疫病診斷與防治工作。