老年腮腺病變性質鑒別診斷及COX-2、cyclinD1的表達

王　斌

(海口市第三人民醫院放射影像科，海南　海口　570208)

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老年腮腺病變性質鑒別診斷及COX-2、cyclinD1的表達

王斌

(海口市第三人民醫院放射影像科，海南海口570208)

目的采用MR敏感加權成像(SWI)鑒別診斷老年腮腺良、惡性病變，分析COX-2、cyclinD1在腮腺惡性病變腫瘤組織中的表達情況。方法首診未接受任何治療和病理檢查的腮腺疾病老年患者行MR-SWI掃描，比較良、惡性病變各MR-SWI掃描觀察指標；以病理為診斷金標準，受試者工作特征(ROC)曲線分析MR-SWI鑒別診斷老年腮腺病變性的效能。采用免疫組化S-P法檢測腮腺惡性病變腫瘤組織、預留的正常腮腺組織(源于腮腺外傷老年患者)中環氧合酶(COX)-2、細胞周期蛋白(cyclin)D1表達情況。結果老年腮腺良性病變以周邊分布為主，占89.47%(17/19)，惡性病變以靜脈中央分布為主，占84.62%(11/13)，兩者差異顯著(χ2=19.771，P<0.01)；將靜脈中央分布為診斷惡性病變標準，診斷惡性病變的敏感性為84.61%，特異度89.47%，準確度87.50%。最大靜脈直徑(dmax)診斷惡性病變的敏感性為84.61%，特異度94.74%，準確度90.63%；磁敏感信號強度(ITSS)分級診斷惡性病變的敏感性為84.61%，特異度84.21%，準確度84.38%。腺泡細胞癌中COX-2、cyclinD1陽性表達率分別為54.55%、63.64%；低分化鱗癌中COX-2、cyclinD1陽性表達率分別為62.50%、50.00%；多形性腺瘤中COX-2、cyclinD1陽性表達率均為71.43%；COX-2、cyclinD1在腮腺惡性病變組織中陽性表達率均明顯高于腮腺正常組織(P<0.01)。結論MR-SWI提供的腫瘤內組織靜脈分布、dmax、ITSS分級可用于老年腮腺良惡性病變的鑒別診斷，其中dmax的應用價值最高；COX-2、cyclinD1在老年腮腺惡性病變組織中高表達，與腫瘤的發生、發展可能有關。

敏感加權成像；環氧合酶-2；細胞周期蛋白1

目前，僅憑MRI動態增強和多層CT(MSCT)掃描在鑒別診斷腮腺腫瘤方面仍存在較大難度〔1〕。MR敏感加權成像(SWI)對腫瘤組織內的靜脈血管結構和血液代謝物有較強的敏感性，有利于腫瘤性質的鑒別診斷。環氧合酶(COX)-2是一種誘導酶，可促進腫瘤血管生成和細胞增殖，在腫瘤形成、侵襲、轉移中發揮重要作用。細胞周期蛋白(cyclin)D1是一種細胞周期調控蛋白，在細胞周期G1～S期轉變中發揮關鍵作用，cyclinD1表達異常多出現在腫瘤細胞中，可促進細胞增殖〔2〕。本研究分析腮腺惡性病變患者腫瘤組織中COX-2、cyclinD1表達情況，為老年腮腺疾病的臨床診治提供參考。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年10月至2015年10月本院收治的經手術病理證實的腮腺疾病老年患者64例。入組條件：①首診為腮腺病，未接受過任何相關治療；②來本院就診前未接受穿刺活檢等病理檢查；③自愿參與本次研究并簽署知情同意書。術前均行CT和MRI常規序列掃描以及SWI序列掃描，其中男17例，女15例；年齡60～87〔平均(72.15±12.08)〕歲。

1.2影像學檢查采用德國西門子NOVUS 1.5T 超導MRI儀，行腮腺區和上頸部橫斷面T1WI、T2WI平掃及T1W動態增強、SWI掃描。對各序列圖像進行分析，內容包括：病灶內靜脈分布情況，最大靜脈直徑(dmax)，靜脈數量，腫瘤磁敏感信號強度(ITSS)；本次研究依據Kim等標準將ITSS分為四級：0級：瘤體組織內無低信號；1級：1～5個點狀樣或細線樣低信號；2級：6～10個點狀樣、細線樣低信號；3級：11個及以上點狀樣或細線樣低信號。SWI圖：瘤內靜脈表現為粗細不均，直線或迂曲走行的管狀結構，或連續層面能夠追蹤的低信號點，邊界清晰。

1.3病理檢查入選患者均手術切除患側腮腺病灶腫物，10%甲醛溶液固定過夜，常規行石蠟包埋，0.4 μm連續切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，光學顯微鏡下觀察病變組織中血管大小、分布和形態。

1.4COX-2、cyclinD1水平檢測采用免疫組化染色(S-P法)檢測，取腮腺惡性病變患者病灶組織石蠟切片和預留的20個正常腮腺組織石蠟切片(源于腮腺外傷老年患者)，常規脫蠟、水化，高壓熱修復抗原，3%小牛血清封閉，滴加兔抗人COX-2多克隆抗體(1∶200)、兔抗人cyclinD1單克隆抗體(1∶200)，滴加辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉卵白素，SP復合物、二氨基聯苯胺(DAB)顯色、復染，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對照，已知腮腺惡性病變組織切片為陽性對照。染色結果采用Image Pro Plus 6.0軟件分析。每張切片200倍放大下觀察5個視野，計算陽性細胞占總細胞數的比值，分級標準：陰性為<10%，弱陽性為≥10%、陽性為≥30%、強陽性為≥50%。

1.5統計學方法應用SPSS15.0軟件，計量資料行兩組間的t檢驗；計數資料進行χ2檢驗；MR-SWI鑒別診斷的效能采用受試者工作特征(ROC)曲線分析。

2　結　果

2.1MR-SWI與病理檢查情況32例患者經病理證實良性病變38例，其中多形性腺瘤26例、腺淋巴瘤6例，結核、肉芽腫性炎、木村病各2例。其中比例最高的多形性腺瘤SWI圖像，可見低信號走行于瘤體周圍，與小動脈伴行。病理圖片可觀察到腫瘤細胞呈條索狀排列，周邊肌上皮細胞呈梭形，排列成一層，可見小靜脈，腫瘤中央無粗大脈管。經病理證實惡性病變26例，其中腺泡細胞癌11例、低分化鱗癌8例、多形性腺瘤7例。其中腺泡細胞癌SWI圖像可見瘤體中央區域有低信號靜脈，直徑約為3.8 mm；病理圖片可見導管樣排列的腫瘤細胞，細胞質偏酸性，瘤體中央區域存在大小不一的靜脈和最大靜脈。低分化鱗癌SWI圖像可見瘤體中央區域有低信號靜脈；病理圖片中癌細胞成團排列，可見癌珠、細胞間橋，瘤體中央有較大靜脈。多形性腺瘤SWI圖像可見瘤體邊緣有低信號靜脈走行，直徑約1.0 mm；病理圖片中腫瘤細胞排列成管狀或腺樣，可見其周圍有肌上皮細胞圍繞，瘤體邊緣有較大靜脈，為多形性腺瘤改變。

2.2腮腺良惡性病變影像學指標比較腮腺惡性病變靜脈直徑明顯大于良性靜脈直徑(P<0.01)；腮腺惡性病變ITSS分級多為2～3級，良性病變ITSS分級多為1級，良惡性病變ITSS分級之間差異有顯著統計學意義(P<0.01)；良、惡性病變單位面積內靜脈數量之間差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　腮腺良惡性病變影像學指標比較±s)

2.3MR-SWI鑒別診斷腮腺良惡性病變效能腮腺良性病變中，靜脈中央分布4例，周邊分布34例；惡性病變中，靜脈中央分布22例，周邊分布4例；兩者有統計學差異(χ2=19.771，P<0.01)；將腮腺病灶靜脈中央分布為診斷惡性病變標準，診斷惡性病變的敏感性為84.61%(22/26)，特異度為89.47%(34/38)，準確度為87.50%(56/64)。

以病理為診斷金標準，繪制dmax、ITSS分級的ROC曲線，見圖1，得到dmax、ITSS的最佳臨界值為1.75 mm、1.5級，鑒別診斷效能見表2。以約登指數最大作為標準，其鑒別診斷腮腺病變性質的ROC曲線下面積(AUC)值分別為0.935、0.867。

圖1　腮腺惡性病變最大靜脈內徑、ITSS鑒別診斷的ROC曲線分析

檢測指標靈敏度特異性準確度dmax84.61%(22/26)94.74%(36/38)90.63%(58/64)ITSS分級84.61%(22/26)84.21%(32/38)84.38%(54/64)

2.4COX-2在腮腺惡性病變組織中的表達情況見圖2。COX-2陽性切片中，可見呈棕黃色的陽性顆粒，多分布于胞質。10例正常腮腺組織標本中僅1例(10.00%)存在部分上皮細胞胞質中COX-2陽性表達。腺泡細胞癌中COX-2陽性表達率54.55%(6/11)，低分化鱗癌中COX-2陽性表達率62.50%(5/8)，多形性腺瘤中COX-2陽性表達率71.43%(5/7)。COX-2在腮腺惡性病變組織中陽性表達率明顯高于腮腺正常組織(P<0.01)。

A.正常腮腺組織陰性表達；B.腺泡細胞癌中陽性表達；C.低分化鱗癌中陽性表達；D.多形性腺瘤中陽性表達；下圖同圖2　COX-2在正常腮腺組織及惡性病變組織中表達(DAB，×400)

2.5cyclinD1在腮腺惡性病變組織中的表達情況cyclinD1陽性切片中可見呈棕褐色的陽性顆粒，主要分布于胞核中，少數分布于胞質中。正常腮腺組織中基本無cyclinD1表達，腺泡細胞癌中cyclinD1陽性表達率63.64%(7/11)，低分化鱗癌中cyclinD1陽性表達率50.00%(4/8)，多形性腺瘤中cyclinD1陽性表達率71.43%(5/7)。cyclinD1腮腺惡性病變組織中陽性表達率明顯高于腮腺正常組織(P<0.01)。見圖3。

圖3　cyclinD1在正常腮腺組織及惡性病變組織中表達(DAB，×400)

3　討　論

SWI與傳統MRI成像不同，主要運用分別收集強度和相位數據的方式，通過后期處理將相位信息與強度信息相互疊加，可更加突出病灶組織間的磁敏感性差異。因此，SWI能夠較好地反映出腫瘤組織中的引流靜脈、微血管生成、并發微出血等情況，有助于對瘤體性質的鑒別診斷〔3〕。COX-2是一種可誘導型酶，體內多數組織在正常生理情況下檢測不到其存在，在細胞外多種刺激因子作用下才可誘發表達。相關研究顯示，多種癌前病變和惡性腫瘤中存在COX-2高表達，而COX-2可促進腫瘤組織內血管生存，刺激腫瘤細胞增殖，抑制凋亡，提升腫瘤細胞轉移風險〔4〕。cyclinD1在具有增殖活性的正常細胞中呈周期性表達，而其過度表達會引發多種細胞周期相關因子表達紊亂，誘導細胞過度增殖產生腫瘤〔5〕。

本次研究顯示，老年腮腺良性病變的靜脈分布以周邊為主，惡性病變以中央為主，且SWI檢查與病理結果一致。主要與腫瘤生長、增殖方式有關，良性腫瘤生長緩慢且病程長，以膨脹性方式生長，病灶對周圍組織表現為推壓、移位，因此靜脈可隨機分布在腫瘤組織邊緣；惡性腫瘤多為浸潤性生長，增殖速度快，對周圍組織和血管多表現為包埋、破壞，因此靜脈多分布于腫瘤中央〔6〕。本次研究中SWI檢查顯示，老年腮腺良性病變的dmax明顯小于惡性病變，與病理表現一致。ITSS能夠較為直觀地反映出瘤體中靜脈或微出血，本次研究中老年腮腺良惡性病變的ITSS分級之間有明顯差異，良性病變的ITSS分級以1級為主，惡性病變以2～3級為主。ITSS分級直接反映出瘤體內靜脈和微血管病灶的分布數量。

在鑒別診斷老年腮腺良惡性病變效能方面，ITSS分級鑒別診斷敏感性、特異性和準確度與病理診斷基本相當，而dmax指標在鑒別診斷效能要優于靜脈分布和ITSS分級。因此MR-SWI提供的腫瘤內組織靜脈分布、dmax、ITSS分級可用于老年腮腺良惡性病變的鑒別診斷，其中以dmax的應用價值最高。

本次研究中COX-2與cyclinD1表達率總體上呈正相關，惡性腫瘤組織中COX-2表達率上升時，cyclinD1表達率也跟著增加，提示COX-2可能誘導cyclinD的協同表達，進而促進腮腺組織細胞異常增殖、分化、癌變，但其機制仍需要深入研究。

1Kashiwagi N，Murakami T，Chikugo T，etal.Carcinoma ex pleomorphic adenoma of the parotid gland〔J〕.Acta Radiol，2012，53(3)：303-6.

2Goyauit L，Riehm S，Neuville A，etal.Interest of diffusion-weighted and gadolinium-enhanced dynamic MR sequences for the diagnosis of parotid gland tumors〔J〕.J Neuroradiol，2011；38(2)：77-89.

3Yeung DK，Bhatia KS，Lee YY，etal.MR elastography of the head and neck：Driver design and initial results〔J〕.Magn Reson Imag，2013；31(4)：624-9.

4Ishibashi M，Fujii S，Kawamoto K，etal.The ability to identify the intraparotid facial nerve for locating parotid gland lesions in comparison to other indirect landmark methods：evaluation by 3.0 T MR imaging with surface coils〔J〕.Neuroradiology，2010；52(11)：1037-45.

5Lee FK，King AD，Kam MK，etal.Radiation injury of the parotid glands during treatment for head and neck cancer：assessment using dynamic contrast-enhanced MR imaging〔J〕.Radiat Res,2011；175(3)：291-6.

6Zhu L，Wang P，Yang J，etal.Non-Hodgkin lymphoma involving the parotid gland：CT and MR imaging findings〔J〕.Dentomaxillofaci Radiol，2013；42(9)：150-62.

〔2015-12-17修回〕

(編輯袁左鳴)

王斌(1975-)，男，主治醫師，主要從事放射影像方面研究。

R455

A

1005-9202(2016)18-4564-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.18.081