慢性自發性蕁麻疹患者血清維生素D與基質金屬蛋白酶9的檢測

尹嘉文 楊文林

510260廣州醫科大學附屬第二醫院皮膚科

慢性自發性蕁麻疹患者血清維生素D與基質金屬蛋白酶9的檢測

尹嘉文 楊文林

510260廣州醫科大學附屬第二醫院皮膚科

目的探討慢性自發性蕁麻疹患者血清25羥維生素D［25（OH）D］與基質金屬蛋白酶9（MMP?9）的水平及意義。方法用高效液相色譜?串聯質譜法檢測56例慢性自發性蕁麻疹患者和25例健康對照血清25（OH）D水平，用酶聯免疫吸附試驗檢測血清MMP?9水平。采用獨立樣本t檢驗或秩和檢驗分析兩組間指標水平的差異，Spearman秩相關分析評估各檢測指標之間的相關性及其與病情的關系。結果患者組中輕度19例，中度26例，重度11例?；颊呓M血清25（OH）D水平為（21.74±6.04）μg/L，健康對照組為（30.17±2.21）μg/L；患者組MMP?9水平中位數（P25～P75）為291.55（166.18，594.46）μg/L，健康對照組為138.46（94.27，233.12）μg/L，兩組間25（OH）D、MMP?9水平差異均有統計學意義（P＜0.05）?；颊呓M血清25（OH）D與MMP?9水平呈負相關（rs=-0.26，P＜0.05），MMP?9水平與癥狀嚴重程度呈正相關（rs=0.27，P＜0.05），25（OH）D水平與癥狀嚴重程度無明顯相關關系（rs=-0.20，P＞0.05）。結論維生素D、MMP?9在慢性自發性蕁麻疹的發病過程中起一定作用。

蕁麻疹；25?羥維生素D2；基質金屬蛋白酶9；炎癥；免疫

慢性蕁麻疹（CU）的病因復雜，發病機制仍未完全闡明。慢性自發性蕁麻疹（chronic spontaneous urticaria，CSU）是CU分類中不能找出明顯原因或誘因的一種亞型，約占CU的80%［1］。有文獻［2?4］報道，CU患者體內維生素D水平降低。有學者［4］嘗試添加維生素D治療，對部分CU患者有一定療效。目前關于CU患者維生素D下降的原因尚不清楚，我們同時檢測CSU患者血清25羥維生素D［25?hydroxyvitamin D，25（OH）D］與基質金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9，MMP?9）水平，試圖從炎癥反應的角度探討維生素D在CSU中的作用。

一、對象與方法

1.對象：收集2014年8-12月在廣州醫科大學附屬第二醫院皮膚科門診就診的CSU患者56例，男20例，女36例；年齡18～60（34.04±10.87）歲；病程2個月至10年［（17.77±28.15）個月］。健康對照組來自本院體檢中心的健康人，共25例，男12例，女13例，年齡26～56（37.65±9.45）歲。兩組間性別、年齡差異均無統計學意義。本研究通過本院醫學倫理委員會批準，入選者簽署知情同意書。

入選標準：性別不限，年齡18～60歲，符合CSU診斷［1］；無重大器官疾??；無糖尿病等代謝性疾??；未合并哮喘、變應性鼻炎。排除標準：特殊類型蕁麻疹；1個月內服糖皮質激素或免疫抑制劑；1個月內有手術外傷史；3 d內服抗組胺藥物；孕婦、哺乳期、絕經期女性；素食者。

2.CSU癥狀嚴重程度評估［5］：①風團數目：0分為無風團；1分為風團數＜20個/24 h；2分為風團數20～50個/24 h；3分為風團數＞50個，或有大面積風團；②風團大小（最大直徑）：0分為無風團，1分為直徑＜0.5 cm，2分為直徑0.5～2 cm，3分為＞2 cm；③瘙癢程度：0分為無瘙癢；1分為輕度，有瘙癢，不明顯；2分為中度，有明顯瘙癢，但不影響日常生活和睡眠；3分為重度，重度瘙癢，不能忍受，嚴重困擾日常生活和睡眠。所有積分之和為總積分；56例患者按照癥狀積分將病情分為輕度（＜4分）19例，中度（4～6分）26例，重度（＞7分）11例。

3.標本收集：采集CSU患者靜脈血4m l，以4℃、4 000×g離心5min，取血清置-80℃保存待測。

4.CSU患者25（OH）D水平測定：采用高效液相色譜?串聯質譜（LC?MS/MS）法（API3200型液相色譜串聯質譜儀，美國AB公司）檢測血清25（OH）D，試劑盒為美國Sigma公司產品，將試劑與標本于室溫（25℃）下緩慢溶解，配制標準溶液，制備標準曲線。將待測血清放置于室溫下溶解，取400μl血清加入400μl甲醇，充分反應，加入正己烷400μl萃取，轉入進樣瓶，每次進樣量為5μl，記錄檢測結果。

5.CSU患者MMP?9水平測定：用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）（MK3型酶標儀Thermo，上海賽默飛世爾公司）檢測MMP?9水平，試劑盒為美國USCN公司產品，7μl血清用1 400μl PBS作201倍稀釋，每孔加入100μl稀釋好的血清，37℃溫育2 h，甩掉板內液體，每孔加100μl已配好的分析A液，37℃溫育1 h，洗板4次，每孔加100μl已配好的分析B液，37℃30min，洗板5次，拍干，加100μl顯色劑，37℃顯色25min，加50μl終止液，450/630 nm讀取吸光度值。

6.統計學分析：用SPSS 21.0軟件包進行數據統計，計量資料結果符合正態分布時以±s表示，不符合時以M（P25，P75）表示；符合正態分布時兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，不符合時采用秩和檢驗；數據相關性采用Spearman秩相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

二、結果

1.CSU患者25（OH）D、MMP?9水平：CSU患者血清25（OH）D水平明顯低于對照組，MMP?9水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.相關性分析：經Spearman秩相關檢驗，CSU患者25（OH）D水平與MMP?9水平呈負相關（rs=-0.26，P＜0.05），與癥狀嚴重程度無明顯相關（rs=-0.20，P＞0.05）；MMP?9水平與癥狀嚴重程度呈正相關（rs=0.27，P＜0.05）。

三、討論

維生素D的生物活性形式是25（OH）D和1，25（OH）2D［6］。由于25（OH）D是維生素D在體內的主要代謝物，在血循環中含量相對較高，且半衰期較長，一般為3周，因此臨床上可以通過測定25（OH）D的含量來反映維生素D在體內的水平［6］。

本研究結果顯示，CSU患者血清25（OH）D水平明顯下降，與國外報道［2?4］相符；而且，CSU患者MMP?9水平明顯升高，25（OH）D與MMP?9水平呈負相關。我們還發現，CSU患者MMP?9水平與癥狀嚴重程度呈正相關。我們的前期研究［7］發現，CU患者存在低水平炎癥和凝血功能改變，抗凝治療對部分患者有改善癥狀的效果［8］。本研究初步證實，CSU患者維生素D與MMP?9存在相關，提示CU患者使用維生素D治療獲益可能與維生素D影響凝血功能和炎癥反應有關，但需進一步研究。

維生素D在CSU等變態反應性疾病中的作用近幾年才逐漸被人們認識，其作用機制目前仍不明確。Devereux等［9］發現，婦女妊娠期間添加維生素D可降低兒童患哮喘的發病率，維生素D缺乏可以誘發哮喘發作；研究提示，哮喘患者低水平維生素D含量與氣道高反應性、糖皮質激素低反應有關。CSU患者維生素D水平下降可能是一種誘因，其水平改變是否也通過影響機體免疫炎癥反應而導致發病，目前尚缺乏大樣本的隊列研究證實。

表1 慢性自發性蕁麻疹患者血清25羥維生素D［25（OH）D］與基質金屬蛋白酶9（MMP?9）水平μg/L

［1］中華醫學會皮膚性病學分會免疫學組.中國蕁麻疹診療指南（2014版）［J］.中華皮膚科雜志,2014,47（7）:514?516.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2014.07.019.Immunology Group of Chinese Society of Dermatology.Guidelines for the diagnosis and treatment of urticaria in China（2014）［J］.Chin JDermatol,2014,47（7）:514?516.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2014.07.019.

［2］Grzanka A,Machura E,Mazur B,et al.Relationship between vitamin D status and the inflammatory state in patients with chronic spontaneousurticaria［J］.JInflamm（Lond）,2014,11（1）:2.DOI:10.1186/1476?9255?11?2.

［3］Woo YR,Jung KE,Koo DW,et al.Vitamin D as a marker for disease severity in chronic urticaria and its possible role in pathogenesis［J］.Ann Dermatol,2015,27（4）:423?430.DOI:10.5021/ad.2015.27.4.423.

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［5］Zuberbier T,Aberer W,Asero R,et al.Methods report on the development of the 2013 revision and update of the EAACI/GA2 LEN/EDF/WAO guideline for the definition,classification,diagnosis,and managementof urticaria［J］.Allergy,2014,69（7）:e1?29.DOI:10.1111/all.12370.

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［8］劉小明,盛晚香,宋繼權,等.慢性蕁麻疹患者血漿凝血酶原片段F1+2水平的研究［J］.中國麻風皮膚病雜志,2008,24（2）:105?107.DOI:10.3969/j.issn.1009?1157.2008.02.007.Liu XM,Sheng WX,Song JQ,et al.The levels of plasma prothrombin fragment 1+2 in chronic urticariapatients［J］.Chin J Lepr Skin Dis,2008,24（2）:105?107.DOI:10.3969/j.issn.1009?1157.2008.02.007.

［9］Devereux G,Litonjua AA,Turner SW,et al.Maternal vitamin D intake during pregnancy and early childhood wheezing［J］.Am J ClinNutr,2007,85（3）:853?859.

Detection of serum levels of vitam in D and matrix metalloproteinase 9 in patientsw ith chronic spontaneous urticaria

Yin Jiawen,YangWenlin

DepartmentofDermatology,The Second Affiliated HospitalofGuangzhou MedicalUniversity,Guangzhou 510260,China

YangWenlin,Email:yangwenlin@21cn.com

Objective To detect serum levels of 25?hydroxyvitamin D（25［OH］D）and matrix metalloproteinase 9（MMP?9）in patientswith chronic spontaneous urticaria（CSU）,and to explore their significance.M ethods Totally,56 patients with CSU and 25 healthy controls were enrolled into this study.High?performance liquid chromatography tandem?mass spectrometry（LC?MS/MS）and enzyme?linked immunosorbent assay（ELISA）were performed tomeasure serum levels of 25（OH）D and MMP?9 respectively in these subjects.Statistical analysis was carried out by two independent samplest?test orWilcoxon rank sum test for comparisons of the above indexes between the two groups,and by Spearman rank correlation analysis for assessmentof relationships between the serum levels of 25（OH）D and MMP?9 aswellas between the two indexes and disease severity.Results Of the 56 patients,19 were diagnosed withmild CSU,26 withmoderate CSU and 11 with severe CSU.Compared with the control group,the patientgroup showed significantly lower serum levelsof 25（OH）D（21.74±6.04vs.30.17±2.21μg/L,P＜0.05）,but significantly higher serum levels of MMP?9（Median［P25-P75］:291.55［166.18-594.46］vs.138.46［94.27-233.12］μg/L,P＜0.05）.In the patientgroup,the serum levelof25（OH）Dwasnegatively correlated with thatofMMP?9（rs=－0.26,P＜0.05）,butuncorrelated with the severity of CSU（rs=－0.20,P＞0.05）;the serum levelofMMP?9 was positively correlated with the severity ofCSU（rs=0.27,P＜0.05）.Conclusion Vitamin D and MMP?9may play a role in theoccurrenceofCSU.

Urticaria;25?Hydroxyvitamin D 2;Matrixmetalloproteinase 9;Inflammation;Immunity

楊文林，Email：yangwenlin@21cn.com

10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2016.11.014

2016?02?22）

（本文編輯：吳曉初）