慢性自發(fā)性蕁麻疹患者血清維生素D與基質(zhì)金屬蛋白酶9的檢測(cè)

尹嘉文 楊文林

510260廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院皮膚科

慢性自發(fā)性蕁麻疹患者血清維生素D與基質(zhì)金屬蛋白酶9的檢測(cè)

尹嘉文 楊文林

510260廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院皮膚科

目的探討慢性自發(fā)性蕁麻疹患者血清25羥維生素D［25（OH）D］與基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP?9）的水平及意義。方法用高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)56例慢性自發(fā)性蕁麻疹患者和25例健康對(duì)照血清25（OH）D水平，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清MMP?9水平。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)分析兩組間指標(biāo)水平的差異，Spearman秩相關(guān)分析評(píng)估各檢測(cè)指標(biāo)之間的相關(guān)性及其與病情的關(guān)系。結(jié)果患者組中輕度19例，中度26例，重度11例。患者組血清25（OH）D水平為（21.74±6.04）μg/L，健康對(duì)照組為（30.17±2.21）μg/L；患者組MMP?9水平中位數(shù)（P25～P75）為291.55（166.18，594.46）μg/L，健康對(duì)照組為138.46（94.27，233.12）μg/L，兩組間25（OH）D、MMP?9水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。患者組血清25（OH）D與MMP?9水平呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.26，P＜0.05），MMP?9水平與癥狀嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（rs=0.27，P＜0.05），25（OH）D水平與癥狀嚴(yán)重程度無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系（rs=-0.20，P＞0.05）。結(jié)論維生素D、MMP?9在慢性自發(fā)性蕁麻疹的發(fā)病過(guò)程中起一定作用。

蕁麻疹；25?羥維生素D2；基質(zhì)金屬蛋白酶9；炎癥；免疫

慢性蕁麻疹（CU）的病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明。慢性自發(fā)性蕁麻疹（chronic spontaneous urticaria，CSU）是CU分類(lèi)中不能找出明顯原因或誘因的一種亞型，約占CU的80%［1］。有文獻(xiàn)［2?4］報(bào)道，CU患者體內(nèi)維生素D水平降低。有學(xué)者［4］嘗試添加維生素D治療，對(duì)部分CU患者有一定療效。目前關(guān)于CU患者維生素D下降的原因尚不清楚，我們同時(shí)檢測(cè)CSU患者血清25羥維生素D［25?hydroxyvitamin D，25（OH）D］與基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9，MMP?9）水平，試圖從炎癥反應(yīng)的角度探討維生素D在CSU中的作用。

一、對(duì)象與方法

1.對(duì)象：收集2014年8-12月在廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院皮膚科門(mén)診就診的CSU患者56例，男20例，女36例；年齡18～60（34.04±10.87）歲；病程2個(gè)月至10年［（17.77±28.15）個(gè)月］。健康對(duì)照組來(lái)自本院體檢中心的健康人，共25例，男12例，女13例，年齡26～56（37.65±9.45）歲。兩組間性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究通過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入選者簽署知情同意書(shū)。

入選標(biāo)準(zhǔn)：性別不限，年齡18～60歲，符合CSU診斷［1］；無(wú)重大器官疾病；無(wú)糖尿病等代謝性疾病；未合并哮喘、變應(yīng)性鼻炎。排除標(biāo)準(zhǔn)：特殊類(lèi)型蕁麻疹；1個(gè)月內(nèi)服糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑；1個(gè)月內(nèi)有手術(shù)外傷史；3 d內(nèi)服抗組胺藥物；孕婦、哺乳期、絕經(jīng)期女性；素食者。

2.CSU癥狀嚴(yán)重程度評(píng)估［5］：①風(fēng)團(tuán)數(shù)目：0分為無(wú)風(fēng)團(tuán)；1分為風(fēng)團(tuán)數(shù)＜20個(gè)/24 h；2分為風(fēng)團(tuán)數(shù)20～50個(gè)/24 h；3分為風(fēng)團(tuán)數(shù)＞50個(gè)，或有大面積風(fēng)團(tuán)；②風(fēng)團(tuán)大小（最大直徑）：0分為無(wú)風(fēng)團(tuán)，1分為直徑＜0.5 cm，2分為直徑0.5～2 cm，3分為＞2 cm；③瘙癢程度：0分為無(wú)瘙癢；1分為輕度，有瘙癢，不明顯；2分為中度，有明顯瘙癢，但不影響日常生活和睡眠；3分為重度，重度瘙癢，不能忍受，嚴(yán)重困擾日常生活和睡眠。所有積分之和為總積分；56例患者按照癥狀積分將病情分為輕度（＜4分）19例，中度（4～6分）26例，重度（＞7分）11例。

3.標(biāo)本收集：采集CSU患者靜脈血4m l，以4℃、4 000×g離心5min，取血清置-80℃保存待測(cè)。

4.CSU患者25（OH）D水平測(cè)定：采用高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜（LC?MS/MS）法（API3200型液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó)AB公司）檢測(cè)血清25（OH）D，試劑盒為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，將試劑與標(biāo)本于室溫（25℃）下緩慢溶解，配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。將待測(cè)血清放置于室溫下溶解，取400μl血清加入400μl甲醇，充分反應(yīng)，加入正己烷400μl萃取，轉(zhuǎn)入進(jìn)樣瓶，每次進(jìn)樣量為5μl，記錄檢測(cè)結(jié)果。

5.CSU患者M(jìn)MP?9水平測(cè)定：用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）（MK3型酶標(biāo)儀Thermo，上海賽默飛世爾公司）檢測(cè)MMP?9水平，試劑盒為美國(guó)USCN公司產(chǎn)品，7μl血清用1 400μl PBS作201倍稀釋?zhuān)靠准尤?00μl稀釋好的血清，37℃溫育2 h，甩掉板內(nèi)液體，每孔加100μl已配好的分析A液，37℃溫育1 h，洗板4次，每孔加100μl已配好的分析B液，37℃30min，洗板5次，拍干，加100μl顯色劑，37℃顯色25min，加50μl終止液，450/630 nm讀取吸光度值。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS 21.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料結(jié)果符合正態(tài)分布時(shí)以±s表示，不符合時(shí)以M（P25，P75）表示；符合正態(tài)分布時(shí)兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，不符合時(shí)采用秩和檢驗(yàn)；數(shù)據(jù)相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1.CSU患者25（OH）D、MMP?9水平：CSU患者血清25（OH）D水平明顯低于對(duì)照組，MMP?9水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.相關(guān)性分析：經(jīng)Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)，CSU患者25（OH）D水平與MMP?9水平呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.26，P＜0.05），與癥狀嚴(yán)重程度無(wú)明顯相關(guān)（rs=-0.20，P＞0.05）；MMP?9水平與癥狀嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（rs=0.27，P＜0.05）。

三、討論

維生素D的生物活性形式是25（OH）D和1，25（OH）2D［6］。由于25（OH）D是維生素D在體內(nèi)的主要代謝物，在血循環(huán)中含量相對(duì)較高，且半衰期較長(zhǎng)，一般為3周，因此臨床上可以通過(guò)測(cè)定25（OH）D的含量來(lái)反映維生素D在體內(nèi)的水平［6］。

本研究結(jié)果顯示，CSU患者血清25（OH）D水平明顯下降，與國(guó)外報(bào)道［2?4］相符；而且，CSU患者M(jìn)MP?9水平明顯升高，25（OH）D與MMP?9水平呈負(fù)相關(guān)。我們還發(fā)現(xiàn)，CSU患者M(jìn)MP?9水平與癥狀嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。我們的前期研究［7］發(fā)現(xiàn)，CU患者存在低水平炎癥和凝血功能改變，抗凝治療對(duì)部分患者有改善癥狀的效果［8］。本研究初步證實(shí)，CSU患者維生素D與MMP?9存在相關(guān)，提示CU患者使用維生素D治療獲益可能與維生素D影響凝血功能和炎癥反應(yīng)有關(guān)，但需進(jìn)一步研究。

維生素D在CSU等變態(tài)反應(yīng)性疾病中的作用近幾年才逐漸被人們認(rèn)識(shí)，其作用機(jī)制目前仍不明確。Devereux等［9］發(fā)現(xiàn)，婦女妊娠期間添加維生素D可降低兒童患哮喘的發(fā)病率，維生素D缺乏可以誘發(fā)哮喘發(fā)作；研究提示，哮喘患者低水平維生素D含量與氣道高反應(yīng)性、糖皮質(zhì)激素低反應(yīng)有關(guān)。CSU患者維生素D水平下降可能是一種誘因，其水平改變是否也通過(guò)影響機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)而導(dǎo)致發(fā)病，目前尚缺乏大樣本的隊(duì)列研究證實(shí)。

表1 慢性自發(fā)性蕁麻疹患者血清25羥維生素D［25（OH）D］與基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP?9）水平μg/L

［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)皮膚性病學(xué)分會(huì)免疫學(xué)組.中國(guó)蕁麻疹診療指南（2014版）［J］.中華皮膚科雜志,2014,47（7）:514?516.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2014.07.019.Immunology Group of Chinese Society of Dermatology.Guidelines for the diagnosis and treatment of urticaria in China（2014）［J］.Chin JDermatol,2014,47（7）:514?516.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2014.07.019.

［2］Grzanka A,Machura E,Mazur B,et al.Relationship between vitamin D status and the inflammatory state in patients with chronic spontaneousurticaria［J］.JInflamm（Lond）,2014,11（1）:2.DOI:10.1186/1476?9255?11?2.

［3］Woo YR,Jung KE,Koo DW,et al.Vitamin D as a marker for disease severity in chronic urticaria and its possible role in pathogenesis［J］.Ann Dermatol,2015,27（4）:423?430.DOI:10.5021/ad.2015.27.4.423.

［4］Rorie A,Goldner WS,Lyden E,et al.Beneficial role for supplemental vitamin D3 treatment in chronic urticaria:a rando?mized study［J］.Ann Allergy Asthma Immunol,2014,112（4）:376?382.DOI:10.1016/j.anai.2014.01.010.

［5］Zuberbier T,Aberer W,Asero R,et al.Methods report on the development of the 2013 revision and update of the EAACI/GA2 LEN/EDF/WAO guideline for the definition,classification,diagnosis,and managementof urticaria［J］.Allergy,2014,69（7）:e1?29.DOI:10.1111/all.12370.

［6］Benson AA,Toh JA,Vernon N,etal.The role of vitamin D in the immunopathogenesisofallergic skin diseases［J］.Allergy,2012,67（3）:296?301.DOI:10.1111/j.1398?9995.2011.02755.x.

［7］黃桃源,楊文林,尹嘉文,等.急性時(shí)相反應(yīng)標(biāo)志物及凝血、纖溶標(biāo)志物與慢性蕁麻疹的相關(guān)性研究［J］.中華皮膚科雜志,2014,47（7）:473?476.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2014.07.006.Huang TY,Yang WL,Yin JW,et al.Biomarkers for acute?phase response and coagulation/fibrinolysis in patients with chronic urticaria:a correlation study［J］.Chin JDermatol,2014,47（7）:473?476.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2014.07.006.

［8］劉小明,盛晚香,宋繼權(quán),等.慢性蕁麻疹患者血漿凝血酶原片段F1+2水平的研究［J］.中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志,2008,24（2）:105?107.DOI:10.3969/j.issn.1009?1157.2008.02.007.Liu XM,Sheng WX,Song JQ,et al.The levels of plasma prothrombin fragment 1+2 in chronic urticariapatients［J］.Chin J Lepr Skin Dis,2008,24（2）:105?107.DOI:10.3969/j.issn.1009?1157.2008.02.007.

［9］Devereux G,Litonjua AA,Turner SW,et al.Maternal vitamin D intake during pregnancy and early childhood wheezing［J］.Am J ClinNutr,2007,85（3）:853?859.

Detection of serum levels of vitam in D and matrix metalloproteinase 9 in patientsw ith chronic spontaneous urticaria

Yin Jiawen,YangWenlin

DepartmentofDermatology,The Second Affiliated HospitalofGuangzhou MedicalUniversity,Guangzhou 510260,China

YangWenlin,Email:yangwenlin@21cn.com

Objective To detect serum levels of 25?hydroxyvitamin D（25［OH］D）and matrix metalloproteinase 9（MMP?9）in patientswith chronic spontaneous urticaria（CSU）,and to explore their significance.M ethods Totally,56 patients with CSU and 25 healthy controls were enrolled into this study.High?performance liquid chromatography tandem?mass spectrometry（LC?MS/MS）and enzyme?linked immunosorbent assay（ELISA）were performed tomeasure serum levels of 25（OH）D and MMP?9 respectively in these subjects.Statistical analysis was carried out by two independent samplest?test orWilcoxon rank sum test for comparisons of the above indexes between the two groups,and by Spearman rank correlation analysis for assessmentof relationships between the serum levels of 25（OH）D and MMP?9 aswellas between the two indexes and disease severity.Results Of the 56 patients,19 were diagnosed withmild CSU,26 withmoderate CSU and 11 with severe CSU.Compared with the control group,the patientgroup showed significantly lower serum levelsof 25（OH）D（21.74±6.04vs.30.17±2.21μg/L,P＜0.05）,but significantly higher serum levels of MMP?9（Median［P25-P75］:291.55［166.18-594.46］vs.138.46［94.27-233.12］μg/L,P＜0.05）.In the patientgroup,the serum levelof25（OH）Dwasnegatively correlated with thatofMMP?9（rs=－0.26,P＜0.05）,butuncorrelated with the severity of CSU（rs=－0.20,P＞0.05）;the serum levelofMMP?9 was positively correlated with the severity ofCSU（rs=0.27,P＜0.05）.Conclusion Vitamin D and MMP?9may play a role in theoccurrenceofCSU.

Urticaria;25?Hydroxyvitamin D 2;Matrixmetalloproteinase 9;Inflammation;Immunity

楊文林，Email：yangwenlin@21cn.com

10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2016.11.014

2016?02?22）

（本文編輯：吳曉初）