金黃色葡萄球菌腺苷酰轉移酶耐藥基因的克隆及其原核表達*

陳洪升，周　帥，陳吟霜，謝永強，張詠莉，周珍文△

(1.廣東藥學院，廣州 510224;2.廣東省廣州市婦女兒童醫療中心　510000)

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·論著·

金黃色葡萄球菌腺苷酰轉移酶耐藥基因的克隆及其原核表達*

陳洪升1，周帥2，陳吟霜2，謝永強2，張詠莉1，周珍文2△

(1.廣東藥學院，廣州 510224;2.廣東省廣州市婦女兒童醫療中心510000)

目的在大腸桿菌中克隆表達金黃色葡萄球菌氨基糖苷類耐藥基因，即腺苷酰轉移酶基因，為其功能研究奠定基礎。方法按金黃色葡萄球菌腺苷酰轉移酶蛋白編碼序列設計引物，以金黃色葡萄球菌基因組DNA為模板，擴增腺苷酰轉移酶基因，所得片段與pGEX-4t-1(+)載體連接，轉化至感受態大腸桿菌BL21(DE3)，提取質粒進行雙酶切及測序鑒定，IPTG誘導重組蛋白表達，SDS-PAGE及Western-blot對重組蛋白作鑒定。結果使用金黃色葡萄球菌基因組為模板，成功擴增約800 bp目的片段，重組質粒雙酶切見目的片段，測序顯示腺苷酰轉移酶基因長783 bp,始于ATG，止于TAG，預測的等電點和相對分子質量分別為7.75和29×103，目的基因與Genbank腺苷酰轉移酶同源性為99%，SDS-PAGE及Western-blot顯示在55×103見重組蛋白表達。結論在大腸桿菌中成功克隆表達了金黃色葡萄球菌腺苷酰轉移酶基因。

金黃色葡萄球菌；腺苷酰轉移酶；耐藥基因

金黃色葡萄球菌是機體化膿感染中最常見的病原菌，隨著氨基糖苷類藥物的廣泛應用，耐藥性日益嚴重。腺苷酰轉移酶是一種跨膜多重藥物外排蛋白，介導葡萄球菌對氨基糖苷類藥物及多種結構上近似甚至無關的藥物耐藥[1-2]。本研究對腺苷酰轉移酶基因進行克隆及原核表達，為其功能研究奠定基礎?！?br>