急性髓細胞白血病免疫分型及骨髓、血常規(guī)綜合研究

郭　斌，謝　寧，劉　文，李　英，李君安

(川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科，四川南充 637000)

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·論著·

急性髓細胞白血病免疫分型及骨髓、血常規(guī)綜合研究

郭斌，謝寧△，劉文，李英，李君安

(川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科，四川南充 637000)

目的探討骨髓細胞形態(tài)學、外周血液學和免疫分型對急性髓細胞白血病診療的臨床意義。方法顯微鏡檢查骨髓細胞形態(tài)學，全自動血細胞分析儀檢測外周血相關參數(shù)，流式細胞計數(shù)儀分析白血病細胞免疫標志物，并對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。結果外周血細胞約85%的患者提示異常或幼稚細胞的存在，不同類型白血病其白細胞總數(shù)變化差異明顯(M1～2、M5以增高為主，M3以減低為主)；多數(shù)患者是貧血和血小板減少，但程度不同；白細胞分類中，儀器無法分類鑒別急性粒細胞和急性單核細胞，淋巴系統(tǒng)免疫標志物CD7、CD10和CD2可交叉表達于髓系白血病，對治療和預后有臨床作用。結論外周血相關參數(shù)的檢測對白血病的早期篩查、鑒別診斷、預后判斷均有臨床意義，而免疫標志物檢測是骨髓細胞形態(tài)學診斷和分型的補充和支持，且異常敏感標志物的差異表達跟預后密切相關，可顯著提高白血病的診治率。

急性髓細胞白血病；骨髓細胞形態(tài)；外周血；免疫分型

白血病由于原始細胞形態(tài)學上的相似性，單一的骨髓細胞顯微鏡檢查的診斷率約為80%，且無法進行早期篩查和預后判斷。全自動血液分析儀和流式技術擴大了其對細胞所屬種類的識別能力，特別是對異常及原幼細胞的早期篩查具有良好的預見作用[1]。隨著單克隆抗體技術及流式細胞術的發(fā)展應用，能更準確地鑒別白血病細胞所屬系別來源并判斷分化程度，對臨床治療及預后有重要的臨床意義[2]。為探討綜合分析骨髓細胞形態(tài)學、外周血液學和免疫標志物對白血病診療的臨床價值，現(xiàn)對72例急性白血病進行檢測分析和數(shù)據(jù)統(tǒng)計，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料檢測2014年1月至2015年6月該院初診的72例患者的骨髓及外周血標本，男41例，女31例，年齡2～84歲。所有患者均經(jīng)外周血常規(guī)、骨髓形態(tài)學、細胞組織化學染色及免疫分型確診為急性白血病，其中急性粒細胞白血病(M1～2) 100 例，急性早幼粒細胞白血病(M3) 55例，急性單細胞白血病(M5) 105例。

1.2方法

1.2.1骨髓細胞形態(tài)學檢驗抽取患者骨髓涂片，采用瑞氏染色，并于油鏡下分類計數(shù)200個細胞，骨髓涂片必要時做過氧化物酶染色(POX)、過碘酸-雪夫染色(PAS)、特異性脂酶染色(AS-DCE)和醋酸萘酚酯酶染色(NAE/NaF)等細胞化學染色。

1.2.2血液常規(guī)檢驗抽取患者外周血液，EDTA-K2抗凝，使用全自動血液分析儀XE-5000(配套試劑)對標本進行檢測，在綜合分析結果數(shù)據(jù)、儀器異常細胞報警提示和白細胞散點圖的基礎上，對外周血推片染色并進行顯微鏡復查異常細胞。

1.2.3白血病細胞免疫表型分析應用FACS-Calibur流式細胞儀(488 nm氬離子為激發(fā)光源)對每一例標本進行直接免疫熒光法檢測，設置對照管和試驗管，分別加入標本100 μL，3種熒光標記抗體各20 μL，室溫避光孵育約15 min，再加入2 mL紅細胞溶解液，震蕩后置室溫10 min，離心后棄上清液，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌2次，加入15 mL PBS，上機待檢。以膜表面抗原大于20%為陽性。所有檢測單克隆抗體、透膜劑、PERM、溶血素等試劑均購自BD公司。

1.3統(tǒng)計學處理應用Microsoft Excel 2007統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以百分比表示。

2　結　　果

2.1外周血細胞檢測結果

2.1.1血常規(guī)檢測結果急性髓細胞白血病(AML)M1～2患者外周血以白細胞增高(75%)、貧血(100%)及血小板減低(75%)為主，少數(shù)患者紅細胞和血小板正常；M3患者外周血以白細胞減低(64%)、貧血(100%)及血小板減低(82%)為主，少數(shù)患者白細胞增高，血小板正常；M5患者外周血以白細胞增高(66%)、貧血(90%)及血小板減低(95%)為主，少數(shù)患者白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(HB)和血小板(PLT)正常。見表1。

2.1.2白細胞分類儀器可提示急性白血病約85%的患者存在異常或幼稚細胞，散點圖也異常，其中M1～2患者有85%粒系比例減低，70%單核比例增高；M3患者中63%粒系比例減低，81%單核比例增高；M5患者中85%粒系比例減低；71%單核比例增高。見表2。

表1　　AML患者血常規(guī)檢測結果(陽性例數(shù)/檢測例數(shù))

表2　　AML患者WBC分類結果(陽性例數(shù)/檢測例數(shù))

2.1.3貧血程度檢測結果M1～2、M3、M5患者中均出現(xiàn)不同程度貧血，且極重度貧血所占比例均較高，其中M1～2極重度貧血為50%，M3為100%,M5為57%。見表3。

2.2免疫分型結果M1～2 主要表達的抗原陽性為CD117、HLA-DR、CD13，M3為CD33、CD15、CD64，M5 為CD13、CD117、CD33、HLA-DR；髓系抗原在淋巴系白血病中可出現(xiàn)交叉表達的是CD13、CD33、CD117，淋巴系抗原在髓系白血病的交叉表達為CD7、CD10、CD2(表達量大于20%為陽性)。見表4。

表3　　AML患者貧血程度檢測結果(陽性例數(shù)/檢測例數(shù)，g/L)

表4　　髓系細胞免疫表型分型結果(陽性例數(shù)/檢測例數(shù))

3　討　　論

骨髓形態(tài)學分型在診斷白血病中具有直觀、快捷性，結合細胞特殊組織化學染色對診斷的準確率可進一步提高，但也存在不足：(1)屬特殊標本，需有嚴格的適應證，不利于早期篩檢。(2)受到檢驗人員的主觀認識和細胞異常表達等影響，約有20%的誤診率。(3)單純的形態(tài)學檢查對臨床用藥和預后評估無指導作用。因此，將外周血液學、形態(tài)學和免疫學相結合成為早期診斷、治療和預后判斷白血病的必然趨勢[3-5]。

外周血分析顯示，無論是AML或急性淋巴細胞白血病，由于細胞對骨髓的侵襲而抑制了紅系和巨核系的增殖，導致患者貧血和血小板減少，2項指標可作為早期疾病提示，但不同類疾病其貧血和血小板減少程度不盡相同，有利于疾病鑒別，AML均以極重度貧血為主，最嚴重的是M3[6]。本組患者均為極重度貧血，但M5患者也有約40%不出現(xiàn)貧血情況，須引起重視。本組全部病例血小板均為減少。

本研究血液分析儀對異常細胞的提示和分類結果表明，儀器對85%的標本有異常報警和提示作用，并可出現(xiàn)散點圖異常。不能提示的病例主要為外周血細胞減少，無或極少量異常細胞髓外浸潤的情況，有助于復核[7]。本組儀器研究界面的分類統(tǒng)計結果顯示，AML的儀器均分類為中性粒細胞減少和單核細胞增高，這可能是由于原始或幼稚細胞核體積較大，側向熒光強度高，故被分類為單核細胞，因此這對鑒別急性粒細胞和急性單核細胞無指導意義。

本研究免疫分型結果表明，AML的MPO、CD33是主要的普遍表達標志物，在髓系特異性分型中起重要作用，且MPO表達越高說明細胞分化越好，預后較好，當然部分MPO和CD33表達缺失的標本須與其他免疫標志物綜合分析。CD34、CD13、CD117和HLA-DR在不同類髓系白血病的表達不同，對比急性粒細胞(M1～2)和急性單核細胞(M5)，CD13、CD117和HLA-DR均高表達，但M5的CD34表達率較低，而單核系CD14、15表達率增高，這可能與細胞分化較成熟而少表達干細胞有關。M3由于白血病為單一的異常早幼粒細胞，其CD34、CD117、HLA-DR和CD13的表達均較低，但特異性地高表達CD33。約60%的M3標本高表達單核細胞CD15和中性粒細胞CD64，對鑒別診斷疾病起到積極作用，其原因有待于進一步研究[8]。本研究對免疫表型交叉表達結果顯示，交叉表達是細胞出現(xiàn)的某些抗原缺失、過表達、系列交叉和跨階段表達等免疫分子異常表達現(xiàn)象，除髓系抗原表達外伴有淋巴細胞抗原表達或淋巴細胞伴髓系抗原表達[9]。這種異質性表現(xiàn)有利于白血病免疫分型的診斷及預后，在微量殘留白血病檢測中也有較大的臨床價值[10]。本組結果提示，髓系白血病可能出現(xiàn)的淋巴系統(tǒng)表達為CD7、CD10和CD2，以CD7最為常見。患者預后觀察說明，CD7表達的M1～2患者4個療程后，無1例達完全緩解，且CD7表達的 AML 13 例患者中7例發(fā)病時 WBC>50×109/L，完全緩解率較無交叉表達的患者也明顯減低，提示 CD7+AML 預后較差。表達CD7的7例都伴有 CD34表達，提示CD7+AML 細胞可能起源于 CD7+/CD34+多能干細胞或更早期造血階段的多能干細胞，且對化療不敏感。

綜上所述，白血病具有高度異質性和形態(tài)多樣性，結合外周血液學、骨髓形態(tài)學和流式細胞術免疫分型診斷已成為白血病綜合分析的重要手段，可輔助確診部分特殊類型，提高白血病診斷和分型的準確性，且對初發(fā)患者的相關免疫表型，特別是交叉表達情況進行監(jiān)測，對治療指導和預后判斷均具重要的臨床價值。

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Immunophenotyping and bone marrow hematology analysis in acute myelocytic leukemia

GUOBin,XIENing△,LIUWen,LIYing,LIJunan

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedHospitalofNorthSichuanMedicalCollege,Nanchong，Sichuan637000,China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance in diagnosis and prognostic judgments of acute myelocytic leukemia with combined detection of morphology,peripheral blood and immune typing of bone marrow cells.MethodsMicroscopic examination of bone marrow cell morphology,automatic blood cell analyzer detection of peripheral blood parameter and flow cytometry analysis of immune markers of leukemia cells,all these datas were analyzed statistically.ResultsPeripheral blood cell analysis showed that instruments may indicate the presence of abnormal or naive cells in about 85% patients,different kinds of leukemia had significant difference in total leukocyte count (majority higher in M1-2,M5; majority lower in M3); while anemia and thrombocytopenia were observed in most patients,but the degree was different; M1-2 and M5 can not be identified by classification of leukocyte by automatic blood cell analyzer,CD7,CD10 and CD2 can cross express in myeloid leukemia,which have a prompt effect with treatment and prognosis.ConclusionDetection of peripheral blood parameters has an important role in early screening,differential diagnosis and prognosis judgment of leukemia,immunological markers detection is the powerful supplement and support for leukemia diagnosis and typing,sensitive markers have close contact with prognosis,which significantly improves the effect of the diagnosis and treatment of leukemia.

acute myelocytic；bone marrow cell morphology;peripheral blood;immune typing

郭斌，男，主管技師，主要從事實驗診斷學研究。

，E-mail:xiening19840820@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.020

A

1673-4130(2016)19-2710-03

2016-02-23

2016-04-18)