高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定人參養(yǎng)榮丸中芍藥苷、阿魏酸和橙皮苷含量

李鑫，張秀麗

（遼寧省朝陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，遼寧朝陽(yáng)122000）

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定人參養(yǎng)榮丸中芍藥苷、阿魏酸和橙皮苷含量

李鑫，張秀麗

（遼寧省朝陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，遼寧朝陽(yáng)122000）

目的建立同時(shí)測(cè)定人參養(yǎng)榮丸中芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷的高效液相色譜法。方法色譜柱為固定相Agilent C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（等度洗脫），流速1.0 mL/min，柱溫30℃，芍藥苷、阿魏酸和橙皮苷檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。結(jié)果進(jìn)樣量芍藥苷在0.108～2.160 g（r=0.999 6）范圍內(nèi)、阿魏酸在0.014～0.280 g（r=0.999 9）范圍內(nèi)、橙皮苷在0.349～6.980 g（r=0.999 9）范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，加樣回收率分別為98.86%，97.35%和98.72%，RSD分別為0.62%，1.16%和1.02%（n=6）。結(jié)論該法簡(jiǎn)便穩(wěn)定，準(zhǔn)確度可靠，可用于人參養(yǎng)榮丸的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；人參養(yǎng)榮丸；芍藥苷；阿魏酸；橙皮苷

人參養(yǎng)榮丸是由人參、土白術(shù)、茯苓、炙甘草、當(dāng)歸、熟地黃、白芍（麩炒）、炙黃芪、陳皮、制遠(yuǎn)志、肉桂、五味子（酒蒸）等12味中藥經(jīng)粉碎成細(xì)粉加煉蜜制得的小蜜丸或大蜜丸，具有溫補(bǔ)氣血的功效，主要用于氣血兩虧、形瘦神疲、食少便溏、病后虛弱等癥。目前市場(chǎng)所售人參養(yǎng)榮丸成方制劑品種規(guī)格多樣，但相關(guān)質(zhì)量控制研究文獻(xiàn)較少，其中多數(shù)只采用了某單味飲片的成分定量測(cè)定作為質(zhì)控指標(biāo)，質(zhì)控指標(biāo)稍顯單一，且2015年版《中國(guó)藥典（一部）》人參養(yǎng)榮丸項(xiàng)下僅進(jìn)行了橙皮苷測(cè)定，專屬性差，難以全面評(píng)估其質(zhì)量?jī)?yōu)劣。本研究中旨在建立能同時(shí)測(cè)定人參養(yǎng)榮丸中多種成分的高效液相色譜法［1-6］，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-2010A HT型高效液相色譜儀（日本島津公司，包括紫外檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、二元泵、島津LCSolution色譜工作站）；CPA225D型分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；BSA224S-CW型分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；9860A型超聲波清洗機(jī)（天津市科貝爾光電技術(shù)有限公司）。

1.2試藥

人參養(yǎng)榮丸（石家莊萬(wàn)和制藥有限公司，批號(hào)為20140301，20140501，20140601）；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)為110736-201438），阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)為110773-201313），橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)為110721-201014）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純，西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易有限公司）；甲醇（色譜純，西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易有限公司）；磷酸（分析純，批號(hào)20110505，天津永大化學(xué)試劑有限公司）；水為重蒸餾水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B，14∶86）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：15 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。在此條件下，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2溶液制備

對(duì)照品溶液：取芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為0.108，0.014，0.349 g/L的混合溶液，即得。

供試品溶液：取樣品適量，剪碎，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

陰性對(duì)照品溶液：按2015年版《中國(guó)藥典（一部）》中人參養(yǎng)榮丸的制法制備缺少白芍、當(dāng)歸、陳皮的大蜜丸，依法制備陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備溶液，即得。

2.3方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對(duì)照品溶液1，2，5，10，15，20 μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程。結(jié)果見(jiàn)表1。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液15 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷色譜峰峰面積的RSD分別為0.1%，0.1%，0.1%（n=6），表明儀器精密度良好。

圖1　高效液相色譜圖

表1　各對(duì)照品回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法平行制備6份溶液，精密吸取15 μL進(jìn)樣2次，測(cè)定峰面積。結(jié)果芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷色譜峰峰面積的RSD分別為1.5%，1.3%，1.6%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)精密吸取15 μL樣進(jìn)，測(cè)定峰面積。芍藥苷，阿魏酸，橙皮苷色譜峰峰面積的RSD分別為0.2%，0.4%，0.2%（n=7），表明供試品溶液室溫放24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的人參養(yǎng)榮丸樣品1 g，精密稱定，共6份。每份樣品分別精密加入質(zhì)量濃度為0.306 g/L的芍藥苷對(duì)照品溶液2 mL，0.085 g/L的阿魏酸對(duì)照品溶液1 mL，0.963 g/L的橙皮苷對(duì)照品溶液2 mL，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取15 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)的樣品，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定本品中芍藥苷、阿魏酸和橙皮苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

3　討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

色譜條件篩選時(shí)曾用雙波長(zhǎng)測(cè)定芍藥苷、橙皮苷、阿魏酸，以230 nm和321 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)阿魏酸在230 nm波長(zhǎng)處與321 nm波長(zhǎng)處峰面積相差不大，分離效果良好，能達(dá)到HPLC法含量測(cè)定要求，而芍藥苷與橙皮苷在230 nm波長(zhǎng)處有最大吸收［7］，故確定230 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2流動(dòng)相選擇

相關(guān)文獻(xiàn)［8-11］多采用梯度洗脫方式，本試驗(yàn)中以乙腈-0.1%磷酸（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸（14∶86）和乙腈-0.1%磷酸（10∶90）為流動(dòng)相等度洗脫，結(jié)果表明所檢測(cè)的色譜峰分離度好，基線穩(wěn)定，出峰時(shí)間較合理，可為部分不具備四元梯度泵檢測(cè)設(shè)備的企業(yè)提供便利，故確定流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（14∶86）。

3.3提取方法及溶劑選擇

考察了浸漬法、回流法和超聲提取法，結(jié)果浸漬法效率低，回流法和超聲法提取效率相差不大，但超聲提取法操作簡(jiǎn)便，故選擇超聲提取方法。考察了60%甲醇、甲醇和乙醇作為提取溶劑，結(jié)果甲醇提取效果好，雜質(zhì)較少；考察了超聲提取30，45，60，90 min，發(fā)現(xiàn)超聲處理60 min與90 min所測(cè)得的峰面積值相差不大，故確定以甲醇為溶劑，超聲處理60 min［12-16］。

表2　加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表3　樣品含量測(cè)定結(jié)果（±s，mg/g，n=3）

表3　樣品含量測(cè)定結(jié)果（±s，mg/g，n=3）

批號(hào)2 0 1 4 0 3 0 1 2 0 1 4 0 5 0 1 2 0 1 4 0 6 0 1芍藥苷1 . 2 2 5 0 ± 0 . 0 0 6 1 . 2 0 9 4 ± 0 . 0 0 4 1 . 1 8 0 9 ± 0 . 0 0 7阿魏酸0 . 1 7 0 2 ± 0 . 0 0 2 0 . 1 7 8 4 ± 0 . 0 0 1 0 . 1 6 9 5 ± 0 . 0 0 1橙皮苷3 . 8 4 9 6 ± 0 . 0 1 2 3 . 7 2 7 1 ± 0 . 0 0 8 3 . 6 6 1 0 ± 0 . 0 1 0

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Simultaneous Content Determination of Paeoniflorin，F(xiàn)erulic Acid and Hesperidin in Renshen YangRong Pills by HPLC

Li Xin，Zhang Xiuli
（Chaoyang Drug Inspection and Testing Institute，Chaoyang，Liaoning，China122000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the simultaneous content determination of paeoniflorin，ferulic acid and hesperidin in Reshen YangRong Pills.MethodsThe chromatographic separation of methanolic extract of ReShen YangRong Pills was performed on Global-C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）in a gradient elution using a mixture of acetonitrile and 0.1%phosphoric as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and the column temperature was maintained at 30℃.The detection wavelength of paeoniflorin，ferulic acid and hesperidin was set up at 230 nm.ResultsThe linear range was 0.108-2.160 μg（r=0.999 6）for paeoniflorin，0.014-0.280 μg（r=0.999 9）for ferulic acid and 0.349-6.980 μg（r=0.999 9）for hesperidin.The average recoveries were 98.86%for paeoniflorin withRSD=0.62%（n=6），97.35%for ferulic acid withRSD=1.16%（n=6），and 98.72%for hesperidin with 1.02%（n=6），respectively.ConclusionThe method is simple and convenient，reliable and accurate，it can be utilized as a quality control method for ReShen YangRong Pills.

HPLC；Renshen YangRong Pills；paeoniflorin；ferulic acid；hesperidin

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）17-0068-03

李鑫（1985-），男，碩士研究生，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴庤b定及檢驗(yàn)，（電子信箱）lixin850801@126.com。

（2016-02-10；

2016-05-14）