超高效液相色譜法同時檢測抗風濕類保健品及中成藥非法添加的解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥和激素類成分

莊航，葛雪松，卓靜，張新勇，孫桐

（江蘇省宿遷市食品藥品檢驗所，江蘇宿遷223800）

超高效液相色譜法同時檢測抗風濕類保健品及中成藥非法添加的解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥和激素類成分

莊航，葛雪松，卓靜，張新勇，孫桐

（江蘇省宿遷市食品藥品檢驗所，江蘇宿遷223800）

目的建立同時檢測抗風濕類保健品及中成藥中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類及激素類化學(xué)藥物的超高效液相色譜法。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18柱（75 mm×2.1 mm，1.7 m）為色譜柱，流動相為水（36%醋酸調(diào)節(jié)pH至4.5）-甲醇，梯度洗脫，流速為0.2 mL/min，DAD檢測器（210～400 nm），檢測波長230 nm，柱溫35℃，進樣量1 L。結(jié)果13種化學(xué)藥物得到良好分離，在測定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r 0.999 0），檢測限為0.024～0.420 ng，定量限為0.078～1.399 ng，平均回收率大于96%。結(jié)論該方法專屬性好，操作簡便，快速準確，可用于抗風濕類保健品及中成藥中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類和激素類藥物的同時檢測。

超高效液相色譜法；保健品；中成藥；解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥；激素

解熱鎮(zhèn)痛藥為一類具有解熱、鎮(zhèn)痛藥理作用，同時還有顯著抗炎、抗風濕作用的藥物，因此又稱為解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥。鑒于其抗炎作用與糖皮質(zhì)激素不同，國際上自1974年起將其歸入非甾體類抗炎藥類。解熱鎮(zhèn)痛藥是臨床常用藥物，然而其濫用或加大劑量應(yīng)用，可產(chǎn)生顯著的毒副作用和不良反應(yīng)。非甾體消炎鎮(zhèn)痛藥可加強糖皮質(zhì)激素的致潰瘍作用。近幾年來，一些不法分子在抗風濕鎮(zhèn)痛類假冒偽劣保健品中非法添加化學(xué)藥物［1-12］，給消費者生命安全造成嚴重危害［13-15］。筆者從缺乏液質(zhì)聯(lián)用儀器的基層藥檢所實際工作需要出發(fā)，建立了同時篩查測定保健品中非法添加解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥和種激素類成分的方法，現(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Waters H-class型超高效液相色譜儀（DAD檢測器，美國沃特斯公司）；Mettler XP205型電子天平（瑞士梅特勒-托利多集團），PHS-3C型酸度計（上海雷磁精密儀器廠）。

1.2試藥

甲醇（色譜純，德國默克公司），36%醋酸為分析純，超純水由默克密理博（Merck Millipore）Milli-Q Advantage A10超純水系統(tǒng)制得。

對照品均來源于中國食品藥品檢定研究院。對乙酰氨基酚（1，批號10018-200408），吡羅昔康（2，批號100177-200603），潑尼松（3，批號100199-201002），美洛昔康（4，批號100679-200401），氫化可的松（5，批號100152-200206），地塞米松（6，批號100129-201105），醋酸潑尼松（7，批號100012-200706），萘普生（8，批號100330-200101），醋酸地塞米松（9，批號100122-201206），保泰松（10，批號100481-200601），雙氯芬酸鈉（11，批號100334-200302），吲哚美辛（12，批號100258-200403），布洛芬（13，批號100179-201406）。抗風濕鎮(zhèn)痛類保健品由宿遷市及轄區(qū)內(nèi)各縣食品藥品監(jiān)督管理局提供，烏蛇枸杞丸（批號為20130801，標示產(chǎn)地為河南省），雙蛇全蝎膠囊（批號為20120805，標示產(chǎn)地為河南省），痛風靈膠囊（批號為120820，標示產(chǎn)地為浙江省），神緣通絡(luò)丹（批號為20150720，標示產(chǎn)地為西藏自治區(qū)），絡(luò)痛康膠囊（批號為20140226，標示產(chǎn)地為江西省），百草骨康靈（無批號，標示產(chǎn)地為海南省），鹿骨全蝎膠囊（批號為20131117，標示產(chǎn)地為河南省），風痛安膠囊（批號為20150202，標示產(chǎn)地為吉林）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱（75 mm× 2.1 mm，1.7 μm）；流動相：水（36%醋酸調(diào)節(jié)pH至4.5，A）-甲醇（B），梯度洗脫，梯度洗脫程序見表1；流速：0.2 mL/min；檢測波長：230 nm；柱溫：35℃；進樣量：1 μL。擬訂色譜條件下，色譜圖見圖1。

表1　流動相梯度洗脫程序

2.2溶液制備

對照品溶液：分別精密稱取對乙酰氨基酚30 mg，吡羅昔康15 mg，潑尼松25 mg，美洛昔康25 mg，氫化可的松25 mg，地塞米松25 mg，醋酸潑尼松25 mg，萘普生25 mg，醋酸地塞米松25 mg，保泰松25 mg，雙氯芬酸鈉25 mg，吲哚美辛25 mg，布洛芬55 mg，置500 mL容量瓶中，加甲醇350 mL，超聲處理使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。再精密量取上述對照品貯備液各1，2，5，10，20 mL，分別置20 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

供試品溶液：膠囊取內(nèi)容物混勻；片劑、丸劑，研細。精密稱取上述樣品適量（相當于1次服用量），置100 mL容量瓶中，加甲醇70 mL超聲約30 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，得供試品溶液。

2.3方法學(xué)考察

干擾試驗：選擇不含上述解熱鎮(zhèn)痛抗炎類及激素類化學(xué)藥物的制劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液，按上述色譜條件進行測定。結(jié)果表明，陰性對照品溶液對測定無干擾。

線性關(guān)系考察：取上述對照品溶液，按擬訂色譜條件分別進樣1 μL，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸。結(jié)果在線性范圍內(nèi)13種成分的質(zhì)量濃度與峰面積均呈良好的線性關(guān)系，見表2。

圖1　超高效液相色譜圖

檢測限與定量限確定：取對照品貯備液，通過一系列倍比稀釋，依法測定得到其檢測限（S/N=3）與定量限（S/N=10）。見表2。

精密度試驗：取對照品貯備液，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果13種成分峰面積的RSD均小于0.9%（n=6），表明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h時進樣。結(jié)果各組分峰面積的RSD均小于0.9%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

重復(fù)性試驗：取同一批供試品，精密稱取5份，按2.3項下方法制備供試品溶液，依法測定。結(jié)果各成分含量的RSD均小于1.0%（n=5），表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗：取陰性樣品風痛安膠囊（每次口服量4粒），置100 mL容量瓶中，共9份，3份為1組，分別加入上述對照品貯備液8，10，12 mL，再按供試品溶液的制備方法制得續(xù)濾液，即得。按擬訂色譜條件進樣測定，并計算回收率。結(jié)果見表3。

2.4樣品含量測定

取對照品溶液及8批樣品依法處理而得的供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣。結(jié)果表明，有7批樣品具有與對照品溶液相同保留時間的色譜峰，且其紫外吸收光譜圖譜一致，疑似非法添加有解熱鎮(zhèn)痛類成分和激素類成分。后期經(jīng)取得中國計劑認證（CMA）資質(zhì)單位檢驗并出具高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）法定檢驗報告，驗證了上述結(jié)果。

表2　線性方程與范圍、檢測限及定量限

表3　各組分加樣回收試驗結(jié)果（%，n=9）

3　討論

3.1流動相選擇

以水（36%醋酸調(diào)節(jié)pH至4.5）-乙腈作為流動相進行梯度洗脫，因壓力變化較大，導(dǎo)致基線不平穩(wěn)，在低濃度測定時，影響測定結(jié)果。以水（36%醋酸調(diào)節(jié)pH值）-甲醇為流動相進行梯度洗脫，隨著pH值調(diào)低，對乙酰氨基酚保留時間縮短，有干擾。經(jīng)過試驗確定了以水（36%醋酸調(diào)節(jié)pH至4.5）-甲醇作為流動相，并解決雙氯芬酸鈉、吲哚美辛、布洛芬3種成分分離度的問題［16］。

3.2溫度選擇

由于同時測定化學(xué)成分多，為了提高各個成分之間的分離度，采用40℃的柱溫，試驗時發(fā)現(xiàn)對乙酰氨基酚與吡羅昔康的峰形較差，則改用30℃的柱溫，但部分成分不能有效分離，最終確定35℃作為最佳柱溫。

3.3波長選擇

采用水（36%醋酸調(diào)節(jié)pH至4.5）-甲醇作為流動相，選擇波長在263 nm處測定，布洛芬響應(yīng)值較小；選擇低于230 nm的波長測定，基線影響低濃度檢測。因此，選擇230 nm［17］波長處測定。

3.4樣品處理

美洛昔康在甲醇中溶解度小，需要進行超聲處理，因樣品添加的劑量不確定性，有必要對樣品再稀釋進行測定。

綜上所述，超高效液相色譜法比高效液相色譜法增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量，在樣品非法添加篩查中，建立標準色譜圖庫和光譜圖庫，為后期篩查工作提供了方便性。

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Simultaneous Determination of Antipyretic Analgesic and Anti-inflammatory，and Hormone Components Illegally Added in Anti-Rheumatism Health Products and Chinese Patent M edicine by UPLC

Zhuang Hang，Ge Xuesong，Zhuo Jing，Zhang Xinyong，Sun Tong
（Suqian Institute for Drug and Food Control，Suqian，Jiangsu，China223800）

ObjectiveTo establish an UPLC method for the determination of antipyretic analgesic and hormone components illegally added in anti-rheumatism health products and Chinese patent medicine.M ethodsThe UPLC analysis conditions were an Acquity UPLC BEH C18Column（75 mm×2.1 mm，1.7 μm），the mobile phase consisted of water（adjusting pH to 4.5 with 36%acetic acid）-methanol（gradient elution），the flow rate 0.2 mL/min，DAD detector（210-400 nm），the detection wavelength 230 nm，the column temperature 35℃，and the injection volume 1 μL.ResultsThe 13 kinds of chemical compositions were well separated.There was a good linear relationship within determination range（r≥0.999 0）.The detection limit was 0.024-0.420 ng and the limit of quantification was 0.078-1.399 ng.The average recovery was more than 96%.ConclusionThe method is sensitive，simple and accurate，and can be used in the determination of the antipyretic analgesic and hormone components illegally added in anti-rheumatism health products and Chinese patent medicine.

UPLC；health products；Chinese patent medicine；antipyretic analgesic and anti-inflammatory drug；hormone

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）17-0071-04

莊航（1979-），男，漢族，江蘇泗陽人，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事藥品檢驗及藥品質(zhì)量標準研究工作，（電話）0527-84355878（電子信箱）zhuanghang826@sohu.com。

（2016-03-22；

2016-05-14）