高效液相色譜法同時測定痔清舒洗劑中大黃素和大黃酚含量

譚本仁，鄭錦坤，徐曉梅，柯治平

（1.汕頭大學醫學院附屬粵北人民醫院，廣東韶關512026；2.廣東食品藥品職業學院，廣東廣州518172）

高效液相色譜法同時測定痔清舒洗劑中大黃素和大黃酚含量

譚本仁1，鄭錦坤1，徐曉梅1，柯治平2

（1.汕頭大學醫學院附屬粵北人民醫院，廣東韶關512026；2.廣東食品藥品職業學院，廣東廣州518172）

目的建立痔清舒洗劑中同時測定大黃素和大黃酚含量的方法。方法色譜柱采用Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），檢測波長254 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30℃；進樣量10 L。結果大黃素和大黃酚質量濃度分別在2.70～32.34 g/mL和6.37～76.49 g/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系，平均回收率分別為97.40%（RSD= 0.56%，n=6）和98.59%（RSD=0.26%，n=6）。結論該法快速簡單，方法可靠，專屬性強，可作為痔清舒洗劑的質量控制方法。

痔清舒洗劑；大黃素；大黃酚；高效液相色譜法

痔清舒洗劑為醫院基于傳統中醫理論研制的中藥復方洗劑，由大黃、蒲公英、黃柏、沒藥等多味中藥組方，具有清熱解毒、燥濕止癢、行氣活血、消腫止痛的功效，主治炎性外痔、痔嵌頓，術后肛緣水腫等癥。方中大黃的主要活性成分為大黃素和大黃酚，為有效控制產品質量，本試驗中采用高效液相色譜法，建立了該復方洗劑中大黃素和大黃酚的含量測定方法，可用于痔清舒洗劑的質量控制。現報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

AG-135型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；UV-2450型紫外分光光度儀（日本島津公司）；LC-2010C型高效液相色譜儀（日本島津公司）。

1.2試藥

大黃素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110756-200110）；大黃酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110796-201319，99.6%）；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。痔清舒洗劑（醫院制劑室，批號為141230，150212，150407，粵藥制Z20071536）。

2　方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；檢測波長：254 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。2.2溶液制備

供試品溶液：精密吸取樣品30 mL，置燒瓶中，精密加入乙醇30 mL，稱定質量，置水浴中加熱回流1 h，放冷，用乙醇補足減失質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，置燒瓶中蒸干，用三氯甲烷強力振搖提取4次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣用無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）的混合溶液溶解，轉移至25 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

對照品溶液：精密稱取大黃素和大黃酚適量，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）溶液制成每1 mL分別含大黃素10.78 μg和大黃酚25.50 μg的溶液，即得對照品溶液。

陰性對照品溶液：按痔清舒洗劑工藝制成缺大黃的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3方法學考察

干擾試驗：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算。色譜見圖1。結果表明，痔清舒洗劑中其他成分對大黃素和大黃酚的測定無干擾。

圖1　高效液相色譜圖

線性關系考察：精密稱取大黃素對照品10.78 mg和大黃酚對照品12.80 mg，分別置100 mL容量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為大黃素母液和大黃酚母液，備用。精密量取大黃素母液3.00，2.00，1.00，0.50，0.25 mL和大黃酚母液6.0，4.0，2.0，1.0，0.5 mL，分別置20 mL容量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）溶液，稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下試驗，進樣10 μL，記錄色譜圖，測定峰面積。分別以大黃素和大黃酚對照品溶液質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸。得大黃素線性方程：Y=39 748 X+5 398.4（r=0.999 9），線性范圍為2.70～32.34 μg/mL；大黃酚線性方程：Y= 51 553 X+13 753（r=0.999 9），線性范圍為6.37～76.49 μg/mL。

精密度試驗：分別精密吸取對照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件連續進樣5次，測定含量。結果大黃素的RSD為0.13%（n=5），大黃酚的RSD為0.31%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取痔清舒洗劑（批號為141230），按2.2項下方法制備供試品溶液，室溫下分別于放置0，2，4，8，12，24 h時進樣，記錄的峰面積。結果大黃素及大黃酚的RSD分別為0.12%和0.34%（n=6），表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗：取6瓶痔清舒洗劑，按2.2項下方法制備供試品溶液及進樣測定含量。結果大黃素及大黃酚的平均含量分別為7.90 μg/mL和20.79 μg/mL，RSD分別為0.38%和0.74%（n=5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取供試品溶液15 mL，共6份，分別精密加入大黃素對照品母液（質量濃度為215.6 μg/mL）0.4，0.6，0.8 mL，大黃酚對照品母液（質量濃度為255.0 μg/mL）0.8，1.2，1.6 mL，按擬訂色譜條件進行測定，按外標法以峰面積計算回收率，結果見表1。

2.4含量測定

取3批樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進行測定。結果見表2。

表1　加樣回收試驗結果（n=6）

表2　含量測定結果

3　討論

肛腸疾病是臨床常見、多發病。祖國醫學認為，痔是由于體內生濕積熱，濕熱下注肛門，阻滯氣機，氣滯血淤，濕熱、瘀血壅阻肛門而引發，故治療以清熱祛濕、消腫止痛為主。中藥熏洗坐浴治療是傳統外治法之一［1］。

痔清舒洗劑在粵北人民醫院痔瘡患者中使用了十幾年，取得了較好療效。其主藥大黃性寒、味苦，具瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經、利濕退黃的作用，蒲公英和黃柏能清熱解毒，利尿散結、清熱燥濕，沒藥則可散瘀定痛、消腫生肌，諸藥合用，共奏清熱祛濕解毒、消腫止痛之功效。臨床使用顯示，痔清舒洗劑能有效地改善炎性痔引起的腫痛癥狀及術后肛門痔水腫、疼痛等癥狀。

現代藥理學試驗證明，大黃的藥理活性成分為蒽醌類衍生物［2］，主要包括蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚及大黃酸等。參考《中華人民共和國藥典（一部）》［3］和痔清舒洗劑的方解及對本品藥效物質的定位和含量測定方法可行性的分析，選擇大黃中的大黃素和大黃酚作為本品含量測定的指標性成分。經反復試驗，流動相選用甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）時［4-6］，兩種成分的色譜峰峰形、分離度最好，且方法學考察結果顯示該測定方法專屬性強、重復性、準確度與精密度良好，陰性對照無干擾，系統適用性良好。采用本試驗所建立的HPLC含量測定方法，對3批次痔清舒洗劑進行含量測定，結果顯示簡便可行，重復性良好，可用于痔清舒洗劑的質量控制及質量標準完善。

［1］李偉，盧興華，過石勝.中藥熏洗坐浴改善肛腸科術后疼痛水腫的療效觀察［J］.中成藥，2014，36（2）：435-437.

［2］熊興富.中藥大黃主要有效成分藥理學研究進展［J］.中醫臨床研究，2014，6（10）：143-146.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：20.

［4］閆冰，陸曉和，魏群利，等.HPLC法測定復腎康膠囊中大黃酸的含量［J］.中國藥房，2007，18（30）：2 367-2 368.

［5］張勇鋼.效液相法測定復方大黃痔瘡栓中大黃素大黃酚的含量［J］.時珍國醫國藥，2008，19（2）：465-466.

［6］葉秀金，宋粉云.HPLC法測定清肺抑火丸中大黃的四種成分的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2010，21（6）：646-648.

Simultaneous Content Determination of Emodin and Chrysophanol in Zhiqingshu Lotion by HPLC

Tan Benren1，Zheng Jinkun1，Xu Xiaomei1，Ke Zhiping2
（1.The Affiliated Yuebei People′s Hospital of Shantou University Medical College，Shaoguan，Guangdong，China512026；2.Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou，Guangdong，China518172）

ObjectiveTo establish a simultaneous content determination method of emodin and chrysophanol in Zhiqingshu Lotion. M ethodsSamples were analyzed on Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）.Methanol-0.1%phosphoric acid solution（85∶15）served as the mobile phase.The wavelength of detection was at 254 nm.The flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was set at 30℃and the injection volume was 10 μL.ResultsEmodin and chrysophanol showed good linearity in the range of 2.70-32.34 μg/mL and 6.37-76.49 μg/mL，and the average recovery rate of were 97.40%（RSD=0.56%，n=6）and 98.59%（RSD=0.26%，n=6）respectively.ConclusionThe method is quick，simple，accurate and reliable with good reproducibility，which can be used for the quality control of Zhiqingshu Lotion.

Zhiqingshu Lotion；emodin；chrysophanol；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）17-0074-04

譚本仁（1973-），男，大學本科，主要從事醫院藥學工作，（電子信箱）1114335322@qq.com。

（2015-09-10；

2016-03-26）