寧泌泰膠囊對大鼠的長期毒性研究

陸泉，蔣麗平，張飛，李定祥，竇圣姍，張杰

（1.上海海天醫藥科技開發有限公司，上海200023；2.上海理工大學，上海200093；3.上海交通大學，上海200240；4.上海中醫藥大學，上海201203；5.中國人民解放軍第二軍醫大學，上海200433）

寧泌泰膠囊對大鼠的長期毒性研究

陸泉1，蔣麗平2，張飛3，李定祥4，竇圣姍5，張杰4

（1.上海海天醫藥科技開發有限公司，上海200023；2.上海理工大學，上海200093；3.上海交通大學，上海200240；4.上海中醫藥大學，上海201203；5.中國人民解放軍第二軍醫大學，上海200433）

目的研究寧泌泰膠囊連續灌胃給藥35 d對大鼠的毒性。方法將60只大鼠隨機分為3組，藥物組大鼠分別灌胃寧泌泰膠囊4.0 g/kg和1.5 g/kg，對照組大鼠灌胃相同體積的蒸餾水。給藥（或蒸餾水）35 d后，每組處死動物數的1/2（n=10），并對其進行血液生化檢測和病理解剖。停藥14 d后，剩余的動物（n=10）進行恢復性實驗檢測。結果寧泌泰膠囊對大鼠的生長發育、造血功能和血液生化學指標均無明顯的毒性，對大鼠的心、肝、脾、肺、腎、睪丸、子宮等組織的形態學檢查亦未發現有明顯損傷性毒性變化。結論寧泌泰膠囊長期服用毒性低，臨床用藥量安全。

寧泌泰膠囊；大鼠；長期毒性；恢復性實驗；安全性評價

近年來，隨著中藥產品品種的增加、應用范圍的日漸擴大以及中藥現代化的客觀現實，加強中藥毒理學的研究，用準確可靠、科學客觀的數據闡述中藥的毒副作用，是中藥研究、開發和應用的重要內容［1］。為評價寧泌泰膠囊長期應用的安全性，本研究中觀察寧泌泰膠囊長期給藥后大鼠的體重、主要器官變化、臟器系數、造血功能、各種血液生化指標等方面的改變，為臨床安全使用寧泌泰膠囊提供實驗室依據。現報道如下。

1　材料與方法

1.1試藥

寧泌泰膠囊（貴陽新天藥業股份有限公司，批號為9504212）。

1.2動物

SD大鼠60只，SPF級，雌雄各半，體重110～130 g，由貴陽醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號京動管質（94）072號。

1.3方法［2］

參照《中藥新藥研究指南》《中藥新藥臨床研究指導原則》，按動物體重及性別隨機分3組，每組20只，高、低劑量組大鼠分別灌胃寧泌泰膠囊4.0 g/kg和 1.5 g/kg。對照組大鼠灌胃相同體積的蒸餾水，每天給藥1次，連續35 d，每周稱重1次，根據體重變化調整給藥量，并觀察飲食、活動、大小便、毛發光澤等。試驗35 d后，將各組1/2動物（n=10）處死。

對處死的動物進行血常規分析、血液生化指標檢測和病理解剖。血常規包括：紅細胞、白細胞、血紅蛋白、血小板、白細胞分類（包括淋巴細胞、中性粒細胞和單核細胞）。血液生化指標檢測包括：天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（TBIL）、總膽固醇（TCHO）、血糖（GLU）、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea）、總蛋白（TP）及白蛋白（ALB）等。

對處死的動物取臟器和組織進行肉眼觀察、稱重，并進行病理組織學檢查。送檢樣本包括：心、肝、脾、腎、肺、睪丸和子宮。

對每組剩余的動物（n=10）進行恢復性檢查，即停藥后每天給水、喂食，直到停藥14 d處死。對處死的動物進行血常規分析、血液生化指標檢測、病理解剖和病理組織學檢查。

1.4統計學處理

2　結果

2.1對大鼠生長發育的影響

結果表明，大鼠連續灌胃給予寧泌泰膠囊35 d后，高、低劑量組和對照組大鼠的飲食、活動及大小便均正常，毛發有光澤。期間各組大鼠體重均持續增長，經統計學處理，未見顯著性差異（P＞0.05）。見表1。

2.2對大鼠血常規的影響

大鼠連續灌胃給予寧泌泰膠囊35 d后，高、低劑量組和對照組大鼠的血常規指標無顯著性差異（P＞0.05）。紅細胞、白細胞、血紅蛋白、血小板、白細胞分類（包括淋巴細胞、中性粒細胞和單核細胞），均在正常生理值范圍內。結果見表2。

2.3對大鼠血液生化指標的影響

大鼠連續灌胃給予寧泌泰膠囊35 d后，高、低劑量組和對照組大鼠的血液生化指標均在正常生理值范圍內，組間比較無顯著性差異（P＞0.05）。見表3。

2.4對大鼠主要臟器系數的影響

結果表明，大鼠連續灌胃給予寧泌泰膠囊35 d后，對大鼠主要臟器系數無明顯影響（P＞0.05）。見表4。

表1　連續給藥35 d對大鼠體重的影響（±s，g，n=10）

表1　連續給藥35 d對大鼠體重的影響（±s，g，n=10）

組別雄性對照組高劑量組低劑量組雌性對照組高劑量組低劑量組給藥前體重1 2 2 . 6 0 ± 6 . 6 9 1 2 2 . 3 0 ± 6 . 8 4 1 2 2 . 3 0 ± 6 . 4 6 1 2 4 . 5 0 ± 4 . 7 7 1 2 3 . 7 0 ± 4 . 9 2 1 2 4 . 3 0 ± 4 . 8 3給藥后體重7 d 1 5 4 . 0 0 ± 7 . 7 0 1 5 5 . 1 0 ± 9 . 6 9 1 5 3 . 4 0 ± 9 . 0 7 1 4 7 . 5 0 ± 7 . 8 6 1 4 6 . 3 0 ± 5 . 9 6 1 4 6 . 7 0 ± 8 . 7 9 1 4 d 1 8 4 . 7 0 ± 1 2 . 4 8 1 8 4 . 1 0 ± 1 1 . 9 0 1 8 7 . 0 0 ± 9 . 6 5 1 6 7 . 9 0 ± 7 . 1 1 1 7 0 . 7 0 ± 1 1 . 0 8 1 7 0 . 0 0 ± 9 . 6 6 2 1 d 2 0 2 . 1 0 ± 1 5 . 3 1 2 0 3 . 0 0 ± 1 3 . 4 0 2 0 6 . 4 0 ± 9 . 9 6 1 8 2 . 9 0 ± 1 1 . 0 8 1 8 8 . 2 0 ± 1 4 . 2 1 1 8 4 . 9 0 ± 1 3 . 1 6 2 8 d 2 3 2 . 5 0 ± 1 3 . 4 5 2 3 6 . 3 0 ± 1 3 . 2 1 2 3 5 . 5 0 ± 1 1 . 8 6 1 9 9 . 5 0 ± 6 . 9 5 2 0 2 . 7 8 ± 1 6 . 9 1 2 0 1 . 4 0 ± 2 0 . 3 8 3 5 d 2 5 4 . 9 0 ± 1 8 . 2 3 2 6 4 . 0 0 ± 1 0 . 3 7 2 5 6 . 1 0 ± 1 7 . 0 8 2 1 0 . 9 0 ± 1 0 . 9 2 2 1 4 . 8 0 ± 1 6 . 4 6 2 1 1 . 5 0 ± 1 8 . 1 4

表2　連續給藥35 d對大鼠血常規的影響（±s，n=10）

表2　連續給藥35 d對大鼠血常規的影響（±s，n=10）

白細胞分類（%）組別對照組高劑量組低劑量組紅細胞（× 1 012/ L）5 . 2 7 ± 0 . 4 4 5 . 2 7 ± 0 . 4 4 5 . 2 1 ± 0 . 6 1白細胞（× 1 09/ L）1 2 . 4 7 ± 2 . 7 2 1 2 . 2 5 ± 2 . 8 1 1 2 . 2 1 ± 3 . 5 0血紅蛋白（g / L）1 3 5 . 6 1 ± 2 . 8 2 1 3 6 . 1 7 ± 5 . 0 6 1 3 7 . 1 5 ± 3 . 6 1血小板（× 1 09/ L）6 5 8 . 6 0 ± 4 7 . 9 9 6 5 7 . 6 4 ± 5 1 . 2 8 6 6 7 . 5 0 ± 5 2 . 9 3淋巴細胞7 2 . 5 0 ± 5 . 4 6 7 0 . 7 0 ± 2 . 5 8 7 1 . 8 0 ± 4 . 1 8中性粒細胞2 4 . 0 ± 5 . 0 5 2 5 . 7 0 ± 2 . 6 3 2 4 . 6 0 ± 4 . 0 3單核細胞3 . 2 0 ± 1 . 1 5 3 . 6 0 ± 0 . 9 7 3 . 6 0 ± 0 . 8 4

表3　連續給藥35 d對大鼠血液生化指標的影響（±s，n=10）

表3　連續給藥35 d對大鼠血液生化指標的影響（±s，n=10）

組別對照組高劑量組低劑量組A S T（卡門氏單位）3 9 . 3 9 ± 6 . 5 2 3 3 . 1 4 ± 8 . 4 4 3 3 . 3 0 ± 7 . 4 0 A L T（卡門氏單位）2 9 . 3 8 ± 5 . 4 5 2 8 . 9 4 ± 5 . 8 6 2 9 . 8 9 ± 4 . 2 7 A L P（金氏單位）3 5 . 7 2 ± 6 . 8 4 3 5 . 4 0 ± 8 . 3 5 3 5 . 3 0 ± 6 . 6 8 T B I L（ m o l / L）8 . 2 7 ± 1 . 1 2 8 . 8 3 ± 1 . 8 5 8 . 9 8 ± 1 . 3 6 T C H O（m m o l / L）0 . 8 4 ± 0 . 1 7 0 . 8 2 ± 0 . 1 2 0 . 8 5 ± 0 . 1 5 G L U（m m o l / L）4 . 4 4 ± 0 . 6 9 4 . 5 2 ± 0 . 6 3 4 . 4 2 ± 0 . 7 1 B U N（m m o l / L）5 . 8 7 ± 1 . 0 1 6 . 4 7 ± 0 . 7 2 5 . 9 6 ± 1 . 2 6 C r e a（ m o l / L）5 1 . 1 5 ± 1 0 . 8 0 5 0 . 8 8 ± 7 . 3 6 5 1 . 9 0 ± 9 . 0 8 T P（g / L）7 3 . 0 6 ± 4 . 7 6 7 5 . 2 0 ± 3 . 9 4 7 4 . 4 0 ± 4 . 1 2 A L B（g / L）2 4 . 2 1 ± 3 . 0 3 2 4 . 2 6 ± 2 . 9 2 2 4 . 2 9 ± 3 . 8 2

表4　連續給藥35 d對大鼠各臟器系數的影響（±s，g/100 g）

表4　連續給藥35 d對大鼠各臟器系數的影響（±s，g/100 g）

組別臟器（除生殖系統外，n = 1 0）生殖系統（n = 5）心肝脾肺腎對照組高劑量組低劑量組0 . 3 4 ± 0 . 0 3 0 . 3 5 ± 0 . 0 3 0 . 3 5 ± 0 . 0 3 3 . 5 9 ± 0 . 3 4 3 . 6 4 ± 0 . 2 6 3 . 6 3 ± 0 . 4 1 0 . 3 2 ± 0 . 0 6 0 . 3 2 ± 0 . 0 4 0 . 3 3 ± 0 . 0 5 0 . 8 2 ± 0 . 1 0 0 . 7 9 ± 0 . 1 4 0 . 8 1 ± 0 . 1 2 0 . 7 0 ± 0 . 0 7 0 . 7 2 ± 0 . 1 6 0 . 7 1 ± 0 . 0 9睪丸0 . 9 9 ± 0 . 0 9 0 . 9 9 ± 0 . 0 4 1 . 0 0 ± 0 . 0 7子宮0 . 1 4 ± 0 . 0 3 0 . 1 4 ± 0 . 0 4 0 . 1 5 ± 0 . 0 3

2.5對大鼠主要臟器組織形態學的影響

結果表明，大鼠連續灌胃給予寧泌泰膠囊35 d后，大體檢查高、低劑量藥物組和對照組大鼠器官，無異常發現。病理組織學檢查，高、低劑量藥物組與對照組比較，未見與藥物有關的病理改變，說明寧泌泰膠囊毒性較低。

2.6恢復性實驗結果

停藥14 d后，高、低劑量藥物組和對照組大鼠血常規、血液生化指標以及主要臟器系數均未見異常，結果見表5至表7。另外，藥物組和對照組大鼠的主要臟器結構清楚，主要臟器的組織形態學檢查，未見與藥物有關的病理改變。

3　討論

寧泌泰膠囊來源于貴州苗族民間驗方［2］，是治療泌尿、生殖系感染的經典專利苗藥，以四季紅、白茅根、大風藤、三顆針、仙鶴草、芙蓉葉和連翹等7味中藥組方，具有清熱解毒、利濕通淋等功效，用于濕熱蘊結所致淋證，癥見小便不利、淋漓澀痛、尿血，以及下尿路感染、慢性前列腺炎見上述證候者。寧泌泰膠囊治療泌尿、生殖系感染等疾病的療效良好，同時，文獻［4-13］均表明寧泌泰膠囊的臨床不良反應發生率低，無明顯毒副作用。

表5　連續給藥35 d停藥14 d后對大鼠血常規的影響（±s，n=10）

表5　連續給藥35 d停藥14 d后對大鼠血常規的影響（±s，n=10）

白細胞分類（%）組別對照組高劑量組低劑量組紅細胞（× 1 012/ L）5 . 2 7 ± 0 . 5 2 5 . 1 2 ± 0 . 6 2 5 . 2 1 ± 0 . 4 7白細胞（× 1 09/ L）1 2 . 5 2 ± 1 . 9 9 1 2 . 3 2 ± 2 . 5 0 1 2 . 9 3 ± 2 . 1 2血紅蛋白（g / L）1 3 6 . 8 1 ± 4 . 2 1 1 3 6 . 6 0 ± 5 . 7 9 1 3 5 . 9 3 ± 4 . 8 5血小板（× 1 09/ L）6 5 7 . 7 0 ± 4 7 . 9 9 6 6 2 . 9 0 ± 6 2 . 5 9 6 5 5 . 7 0 ± 6 8 . 0 1淋巴細胞7 1 . 5 0 ± 4 . 0 6 7 1 . 7 0 ± 3 . 6 5 7 2 . 1 0 ± 4 . 7 9中性粒細胞2 4 . 8 0 ± 4 . 0 8 2 4 . 6 0 ± 3 . 8 3 2 4 . 3 0 ± 4 . 7 1單核細胞3 . 6 0 ± 0 . 8 4 3 . 7 0 ± 1 . 0 5 3 . 5 0 ± 0 . 9 7

表6　停藥14 d后對大鼠血液生化指標的影響（±s，n=10）

表6　停藥14 d后對大鼠血液生化指標的影響（±s，n=10）

組別對照組高劑量組低劑量組A S T（卡門氏單位）3 3 . 8 0 ± 5 . 5 9 3 3 . 4 6 ± 5 . 3 8 3 3 . 9 0 ± 5 . 5 7 A L T（卡門氏單位）2 8 . 8 9 ± 5 . 1 7 2 8 . 5 4 ± 5 . 4 4 2 8 . 7 0 ± 5 . 1 9 A L P（金氏單位）3 5 . 5 7 ± 5 . 7 1 3 5 . 8 0 ± 5 . 1 3 3 5 . 6 8 ± 5 . 4 5 T B I L（ m o l / L）8 . 8 5 ± 1 . 2 3 8 . 6 5 ± 1 . 7 2 9 . 0 7 ± 1 . 2 6 T C H O（m m o l / L）0 . 8 6 ± 0 . 1 2 0 . 8 5 ± 0 . 1 3 0 . 8 5 ± 0 . 1 1 G L U（m m o l / L）4 . 4 7 ± 0 . 5 8 4 . 3 9 ± 0 . 7 2 4 . 3 5 ± 0 . 6 2 B U N（m m o l / L）6 . 2 0 ± 0 . 7 1 6 . 4 0 ± 0 . 7 4 6 . 2 1 ± 0 . 8 9 C r e a（ m o l / L）4 8 . 9 6 ± 7 . 1 9 5 0 . 1 6 ± 7 . 6 9 4 9 . 5 5 ± 7 . 1 7 T P（g / L）7 4 . 3 0 ± 3 . 3 7 7 4 . 3 0 ± 4 . 4 2 7 3 . 7 0 ± 3 . 5 9 A L B（g / L）2 4 . 7 6 ± 3 . 5 1 2 4 . 4 2 ± 3 . 3 8 2 5 . 0 9 ± 3 . 5 4

表7　停藥14 d后對大鼠各臟器系數的影響（±s，g/100 g）

表7　停藥14 d后對大鼠各臟器系數的影響（±s，g/100 g）

組別臟器（除生殖系統外，n = 1 0）生殖系統（n = 5）心肝脾肺腎對照組高劑量組低劑量組0 . 3 5 ± 0 . 0 3 0 . 3 5 ± 0 . 0 3 0 . 3 5 ± 0 . 0 3 3 . 5 3 ± 0 . 3 4 3 . 6 4 ± 0 . 2 6 3 . 5 7 ± 0 . 2 7 0 . 3 3 ± 0 . 0 3 0 . 3 2 ± 0 . 0 4 0 . 3 3 ± 0 . 0 3 0 . 7 4 ± 0 . 0 3 0 . 7 6 ± 0 . 0 5 0 . 7 5 ± 0 . 0 5 0 . 7 0 ± 0 . 0 4 0 . 7 1 ± 0 . 0 5 0 . 7 0 ± 0 . 0 6睪丸0 . 9 8 ± 0 . 0 3 1 . 0 0 ± 0 . 0 5 1 . 0 0 ± 0 . 0 4子宮0 . 1 5 ± 0 . 0 2 0 . 1 4 ± 0 . 0 1 0 . 1 5 ± 0 . 0 2

本研究結果表明，寧泌泰膠囊高、低劑量組和對照組的血常規、血液生化學等指標均在正常生理值范圍內，對主要臟器的形態學觀察未見與藥物有關的病理改變。本研究中經過動物長期毒性試驗表明，以寧泌泰膠囊4.0 g/kg，1.5 g/kg（分別相當于臨床日劑量的42倍和15.6倍）對大鼠連續灌胃給藥35 d，對大鼠的生長發育、造血功能、血液生化學均無明顯的毒性影響，對大鼠的主要臟器均無明顯的毒性影響，寧泌泰膠囊長期服用毒性較低，臨床用量安全。

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Study on Long-Term Toxicity of Extracts from Ningmitai Capsules on Rats

Lu Quan1，Jiang Liping2，Zhang Fei3，Li Dingxiang4，Dou Shengshan5，Zhang Jie4
（1.Shanghai Haitian Pharmaceutical Development Co.，Ltd.，Shanghai，China200023；2.University of Shanghai for Science and Technology，Shanghai，China200093；3.Shanghai Jiao Tong University，Shanghai，China200240；4.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai，China201203；5.PLA Second Military Medical University，Shanghai，China200433）

ObjectiveTo observe the property and degree of long-term toxicity of Ningmitai and evaluate whether the toxic injure can beprevented or recovered，so as to provide the reference for clinical safe use.M ethods60 rats were randomlydivided into three groups，Ningmitai（4.0，1.5 g/kg）groups and control（ig same volume of distilled water）group for all being treated for 35 d，respectively.Then the rats were sacrificed 1/2（n=10）in each group and the anatomy and pathological biochemical detection were carried on.The remaining（n=10）were sacrificed after 14 d of withdrawal drug to use for the reversible experiment.ResultsThere was no significance of the extract from Ningmitai Capsules on the growth/hematopoietic function/biochemical criterion of serum or the pathological feature，i.e.toxicity changes with obvious injury in heart，liver，spleen，lung，kidney，testes，and uterus.ConclusionThere is very low toxicity of the extract from Ningmitai Capsule for the long-term safe use which is safe to be used in clinic.

Ningmitai Capsules；rats；long-term toxicity；withdrawal drug；safety evaluation

R285.5；R286

A

1006-4931（2016）15-0046-03

陸泉（1983-），男，安徽無為人，碩士研究生，工程師，研究方向為中藥臨床研究，（電子信箱）luquan5918@126.com；張杰，男，博士研究生，研究方向為中藥臨床研究，本文通訊作者，（電話）021-64222293（電子信箱）guide.zhang@163.com。

（2016-04-22）