兩種方法檢測超敏C反應蛋白診斷2型糖尿病患者頸動脈內中膜厚度的價值

李娟紅，趙子賢，曾鳳群，利雯秀，陳世豪，葉青云，李敬紅(南方醫科大學附屬新會醫院檢驗科、輸血科、內分泌科，廣東江門5900)

·論著·

兩種方法檢測超敏C反應蛋白診斷2型糖尿病患者頸動脈內中膜厚度的價值

李娟紅1，趙子賢2，曾鳳群1，利雯秀1，陳世豪1，葉青云1，李敬紅3
(南方醫科大學附屬新會醫院檢驗科1、輸血科2、內分泌科3，廣東江門529100)

目的探討兩種方法檢測超敏C反應蛋白(hs-CRP)對2型糖尿病(T2DM)患者頸動脈內中膜厚度（IMT）增加的診斷價值。方法選擇2013年4月至2015年4月我院收治的84例T2DM患者，以彩色多普勒超聲診斷儀檢查患者頸動脈的結果為標準，按IMT＜0.9mm和IMT≥0.9mm分成頸動脈正常組40例和頸動脈增厚組44例。同期另選42例健康查體者為正常對照組，分別采用乳膠增強免疫散射比濁法和顆粒增強免疫透射比濁法檢測所有受檢者的全血hs-CRP和血清hs-CRP的水平，用受試者工作特征(ROC)曲線評價兩種方法檢測hs-CRP對T2DM患者IMT增加的診斷效能。另用總膽固醇(TC)聯合全血hs-CRP檢測評價對T2DM患者IMT增加的診斷效能。結果兩種方法顯示IMT增厚組的全血[(4.78±1.04)mg/L]和血清hs-CRP水平[(4.43±0.95)mg/L]均高于IMT正常組[(1.85±0.78)mg/L和(1.70±0.89)mg/L]和正常對照組[(0.98±0.67)mg/L和(0.87±0.59)mg/L]，差異均有統計學意義(P＜0.05)。用ROC曲線分析得全血hs-CRP的診斷靈敏度(76.2%)較高，而特異性(47.1%)較低，曲線下面積為0.612，而顆粒增強免疫透射比濁法檢測血清hs-CRP的診斷靈敏度(69.0%)較低，特異性(52.9%)較高，曲線下面積為0.596；全血hs-CRP聯合總膽固醇(TC)診斷的靈敏度(83.3%)和特異性(64.7%)，曲線下面積為0.732，均高于hs-CRP單項指標診斷效能。結論T2DM患者IMT增加時，血液中hs-CRP水平升高；乳膠增強免疫散射比濁法檢測hs-CRP對T2DM患者IMT增加的診斷效能優于顆粒增強免疫透射比濁法；全血hs-CRP聯合TC檢測能提高對T2DM患者IMT增加的診斷靈敏度和特異性。

乳膠增強免疫散射比濁法；顆粒增強免疫透射比濁法；2型糖尿??；超敏C反應蛋白；頸動脈內中膜厚度；總膽固醇；診斷

隨著人們生活條件和環境的改善，2型糖尿病(type 2 diabetesmellitus，T2DM)的發病率呈逐年上升趨勢，而糖尿病大血管病變是T2DM患者的主要死因。它發病機制復雜，目前認為動脈粥樣硬化和慢性炎癥是其病理基礎，用超聲診斷技術檢查頸動脈內中膜厚度(IMT)增厚是反映T2DM患者頸動脈粥樣硬化的重要指標。超敏C反應蛋白(hs-CRP)是常見炎癥標志物之一，有研究表明hs-CRP水平的升高能反映頸動脈粥樣硬化的形成[1-2]。然而hs-CRP檢測方法較多，乳膠增強免疫散射比濁法和顆粒增強免疫透射比濁法因存在不同的影響因素從而導致檢測結果存在差異。本文旨在比較該兩種方法檢測患者血液中的hs-CRP水平，評價其檢驗hs-CRP對T2DM患者IMT增加的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取本院內分泌科2013年4月至2015年4月收治的T2DM患者84例，所有患者均符合1999年世界衛生組織2型糖尿病的診斷標準。根據病史排除惡性腫瘤患者、免疫系統疾病、感染性疾病、結締組織疾病。其中男性49例，女性35例，平均病程(4.90±5.23)年。以彩色多普勒超聲診斷儀檢測所有患者雙側頸動脈，并根據IMT大小分為頸動脈正常組(IMT＜0.9 mm)40例和頸動脈增厚組(IMT≥0.9mm)44例，另選擇42例年齡、性別、體質量相符的健康查體者為正常對照組進行比較。

1.2 觀察指標與檢測方法采集受試者早晨空腹肘靜脈血，EDTA-K2抗凝管分別用于全血hs-CRP和糖化血紅蛋白(HbA1c)測試，促凝管分離獲取血清，分別檢測血清hs-CRP、空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。全血hs-CRP采用乳膠增強免疫散射比濁法檢測(禾柏生物技術公司生產的HP-083/4型檢測儀)，HbA1c采用親和層析-高效液相色譜法檢測(美國Primus PDQ PLUS全自動糖化血紅蛋白分析儀)，用全自動生化分析儀COBAS 6000(德國Roche公司生產)檢測血清hs-CRP(采用顆粒增強免疫透射比濁法)、TC、TG。各儀器使用對應配套的試劑、校準品和質控品，各項目符合室內質控和室間質控要求。用彩色多普勒超聲診斷儀(GE LOQIG 500)以6.0～11.0MHz的探頭頻率，測量受試者IMT，即頸總動脈后壁內膜表面與外膜分界線的距離，以IMT＜0.9mm歸入頸動脈厚度正常組，IMT≥0.9mm歸入頸動脈增厚度。

1.3 統計學方法應用SPSS17.0統計軟件包進行數據分析，計量資料均數±標準差±s)表示，多組間均數比較采用單因素方差分析，兩兩差異比較采用NK法，以P＜0.05為檢驗水平。制作ROC曲線，分別計算曲線下面積AUC(area under ROC curve)，探討最佳診斷點即約登指數最大時的Cut-off值及相應的靈敏度和特異性，對兩種方法檢測hs-CRP在2型糖尿病患者頸動脈內中膜厚度增加的診斷效能進行評價。

2 結果

2.1 三組受檢者一般臨床資料及血液學指標比較T2DM患者IMT正常組和IMT增厚組血液學指標中，FPG、HbA1c、TG與正常對照組比較，均明顯升高，差異均有統計學意義(P＜0.05)。IMT正常組與正常對照組比較，TC、IMT、全血hs-CRP、血清hs-CRP水平差異均無統計學意義(P＞0.05)。IMT增厚組與正常對照組比較，TC、IMT、全血hs-CRP、血清hs-CRP水平均明顯升高，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 三組患者的一般臨床資料及血液學指標比較(±s)

表1 三組患者的一般臨床資料及血液學指標比較(±s)

注：與正常對照組比較，a P＜0.05；與IMT正常組比較，b P＜0.05；“-”表示無此數據。

項目F/χ2值P值男性(%)病程(年) BM I(kg/m2) FPG(mmol/L) HbA1c(%) TG(mmol/L) TC(mmol/L) IMT(mm)全血hS-CRP(mg/L)血清hS-CRP(mg/L) IMT正常組(n=40) 54.41 4.92±5.35 24.37±1.80 9.51±2.98a 8.59±2.14a 2.30±2.11a 4.35±1.01 0.67±0.13 1.85±0.78 1.70±0.89 IMT增厚組(n=44) 55.18 4.87±5.11 23.84±1.79 9.72±4.12a 8.91±2.61a 2.58±2.09a 5.13±1.11ab 1.34±0.35ab 4.78±1.04ab 4.43±0.95ab正常對照組(n=42) 53.21 -24.12±1.83 5.12±0.34 5.28±0.47 1.49±0.51 4.18±0.48 0.62±0.12 0.98±0.67 0.87±0.59 0.512 0.852 0.813 4.385 5.863 4.452 4.012 4.526 10.211 8.514 0.731 0.462 0.485 0.027 0.019 0.026 0.033 0.025 0.011 0.018

2.2 ROC曲線下兩種方法檢測hs-CRP對T2DM患者IMT增加的診斷效能比較在ROC曲線下得到的面積(AUC)是反映診斷效能的指標，AUC越靠近1，表明診斷效能越好。乳膠增強免疫散射比濁法檢測全血hs-CRP的AUC為0.612(見圖1)，大于顆粒增強免疫透射比濁法檢測血清hs-CRP的AUC(0.596)(見圖2)。當約登指數為最大值時所對應的hs-CRP水平作為最佳診斷點，乳膠增強免疫散射比濁法檢測全血hs-CRP的最佳診斷點為4.78，敏感度為76.2%，特異度為47.1%，而顆粒增強免疫透射比濁法檢測血清hs-CRP的最佳診斷點為4.43，敏感度為69.0%，特異度為52.9%。結果顯示，乳膠增強免疫散射比濁法檢測全血hs-CRP對T2DM患者IMT增加的診斷效能優于顆粒增強免疫透射比濁法，見表2。

圖1 乳膠增強免疫散射比濁法檢測全血hs-CRP對T2DM患者頸動脈內中膜厚度增加診斷的ROC曲線

圖2 顆粒增強免疫透射比濁法檢測血清hs-CRP對T2DM患者頸動脈內中膜厚度增加診斷的ROC曲線

表2 兩種方法檢測hs-CRP對T2DM患者頸動脈內中膜厚度增加診斷的效能比較

2.3 ROC曲線下全血hs-CRP聯合TC檢測對T2DM患者IMT增加的診斷效能評價全血hs-CRP聯合TC檢測對T2DM患者IMT增加診斷的ROC曲線AUC為0.732(見圖3)，敏感度為83.3%，特異度為64.7%，95%可信區間為0.582～0.883，均高于hs-CRP單項檢測指標的診斷效能。

圖3 全血hs-CRP聯合TC用于T2DM患者頸動脈內中膜厚度增加診斷的ROC曲線

3 討論

目前研究認為T2DM和動脈粥樣硬化屬于系統性慢性炎癥反應[3]。炎癥反應介質在介導糖脂蛋白質代謝和胰島素抵抗中起到至關重要的作用。超敏C反應蛋白是反映炎癥最為敏感的指標蛋白之一，它可激活補體途徑等多種免疫或炎癥反應機理從而損害動脈內膜，促進動脈粥樣硬化的形成[4]；頸動脈內中膜厚度(IMT)增加是公認反映體內動脈粥樣硬化程度的指標[5]。本文分析T2DM患者IMT正常組、IMT增厚組和正常對照組血液中hs-CRP水平結果顯示，IMT增厚組血液中hs-CRP水平均高于IMT正常組和正常對照組，差異有統計學意義，提示hs-CRP水平可反映T2DM患者IMT的變化情況。李宗鋒等[6]研究發現，老年T2DM患者頸動脈斑塊組中hs-CRP水平高于正常對照組和內膜增厚組，hs-CRP和IMT呈正相關。我們可通過檢測T2DM患者體內hs-CRP水平來預測和評估IMT增加的情況，本研究利用在ROC曲線下，評價乳膠增強免疫散射比濁法和顆粒增強免疫透射比濁法檢測hs-CRP對T2DM患者IMT增加的診斷效能。

結果顯示，乳膠增強免疫散射比濁法稍優于顆粒增強免疫透射比濁法。從方法學原理上分析兩者有所不同：hs-CRP的檢測是用CRP抗體連接微小(約1μL)的乳膠或顆粒后，在液相介質中與相應抗原(CRP)結合，產生濁度或散射光的變化從而檢測抗原含量[7]；散射比濁法是某固定波長的光束沿水平方向照射，通過液體遇到抗原抗體復合物顆粒時，光線被其顆粒折射發生偏轉，偏轉的角度變化和發射光的波長與抗原抗體復合物的顆粒大小與數量成正比；透射比濁法是檢測光束通過液體中抗原抗體復合物顆粒后到達探測器而未被吸收或散射的光束量，光通量與抗原含量成反比[8]。在低濃度時其濁度的變化對光束通量的透過影響不足夠大，從而相對降低顆粒增強免疫透射比濁法的靈敏度，這與文獻[9-10]報道相符。在抗原高濃度時，顆粒增強免疫透射比濁法存在鉤狀效應使結果偏低。乳膠增強免疫散射比濁法檢測時，儀器上有探測抗原是否過量的檢測系統，更能提高對樣本檢測的準確性和重復性。但剛等[11]認為，在抗原低濃度和高濃度時，免疫散射比濁法比免疫透射比濁法更能獲得較為準確的結果。

兩種方法的ROC曲線下AUC均小于0.8，說明單項檢測hs-CRP對T2DM患者IMT增加的診斷效能不理想，可能與T2DM患者IMT增加的復雜致病機制有關。全血hs-CRP聯合TC檢測對T2DM患者IMT增加診斷的ROC曲線AUC為0.732，敏感性為83.3%，特異度為64.7%，均高于hs-CRP單項檢測指標的診斷效能。大量研究表明，血液中TC水平與心肌梗死、腦梗死等大動脈血管事件密切相關[12-13]，且TC是導致動脈粥樣硬化的重要因素。hs-CRP聯合TC檢測更有利于對T2DM患者IMT增加的預測和診斷。

綜上所述，T2DM患者IMT增厚時血液中hs-CRP水平升高，用乳膠增強免疫散射比濁法檢測hs-CRP比用顆粒增強免疫透射比濁法有更高的診斷效能；全血hs-CRP聯合TC檢測對診斷T2DM患者IMT增厚有更好的靈敏度和特異性，能增強臨床對患者病情發展的預測和診斷能力。

[1]盧薇,王青,李海英.2型糖尿病患者血清胱抑素-C、超敏C反應蛋白與頸動脈內中膜厚度的相關性[J].重慶醫學,2014,43(24)∶3160-3162.

[2]黃漓莉,蘇珂,于健,等.2型糖尿病患者大血管病變與Hcy、CysC、hs-CRP的關系[J].廣東醫學,2015,36(10)∶1518-1520.

[3]Gach O,Pierard L,Leqrand V.Inflammation and atherosclerosis∶state of the art in 2004-2005[J].Rev Med Liege,2005,60(4)∶235-241.

[4]Bovet P,Rossi I.Serum C-reactive protein and carotid intimamedia thickness[J].Int JCardiol,2012,157(1)∶143-144.

[5]譚安雋,李天榮,李紅.老年2型糖尿病、糖耐量減低患者CRP、TNF-α與頸動脈粥樣硬化及胰島素抵抗的相關性[J].中國老年學雜志,2015,37(14)∶3878-3880.

[6]李宗鋒,張晶.老年2型糖尿病患者血漿NGAL、Hcy及hs-CRP與頸動脈內中膜厚度的相關性[J].山東醫藥,2015,55(26)∶60-61.

[7]焦瑞寶,唐吉斌,陳然,等.全血超敏C反應蛋白與血清C反應蛋白的相關性分析[J].國際檢驗醫學雜志,2011,32(4)∶528.

[8]張倩,周敬靜,徐華.免疫透射比濁法與免疫散射比濁法檢測特定蛋白的比較[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(20)∶2530-2531.

[9]陳世佳.透射比濁法和散射比濁法檢測RF的結果比較[J].淮海醫藥,2009,27(6)∶484-485.

[10]段玉東,?？≤?閆海鵬,等.散射比濁法和透射比濁法測定血漿免疫蛋白的比較[J].中國醫藥導報,2008,5(2)∶97.

[11]但剛,胡宗海,李同心.免疫透射和免疫散射比濁法測定血清免疫球蛋白及補體的比較[J].西南國防醫藥,2008,18(5)∶659-661.

[12]Okamura T,Tanaka H,M iyamatsu N,etal.The relationship between serum total cholesterol and all-cause or cause-specificmortality in a 17.3-year study of a Japanese cohort[J].Atherosclerosis,2007,190 (1)∶216-223.

[13]Cui R,Iso H,Toyoshima H,et al.Serum total cholesterol levels and risk ofmortality from stroke and coronary heart disease in Japanese∶the JACC study[J].Atherosclerosis,2007,194(2)∶415-420.

Diagnostic value of hs-CRP detected by two assays in determ ining carotid intima-media thickness of patients w ith type 2 diabetesmellitus.

LIJuan-hong1,ZHAO Zi-xian2,ZENGFeng-qun1,LIWen-xiu1,CHEN Shi-hao1,YE Qing-yun1,LIJing-hong3.Departmentof Laboratory1,Departmentof Blood Transfusion2,Departmentof Endocrinology3, XinhuiHospital Afiliated to Southern MedicalUniversity,Jiangmen 529100,Guangdong,CHINA

Objective To evaluate the value of hypersensitive C-reaction protein(hs-CRP)detected by two assays in diagnosing increased carotid intima-media thickness(IMT)of patientsw ith type2 diabetesmellitus.M ethods With the findingsof cervical vascular color Doppler ultrasound exam ination as standard,84 patientsw ith T2DM,who adm itted to ourhospital from April2013 to April2015,were chosen and divided into thenormal IMT group(n=40,IMT＜0.9mm)and the IMT increased group(n=44,IMT≥0.9mm)according to the IMT level.At the same time,42 healthy peoplewere chosen as the control group.Thewhole blood and serum concentration of hs-CRP in the patients of normal IMT group,IMT increased group and control group were detected by latex-enhanced immunonephelometry method and partied-enhanced turbidimetric immunoassay respectively.The application value of the two assays in the diagnosisof patientsof type 2 diabetesmellitusw ith increased carotid intima-media thicknesswas evaluated by the receiver operating characteristic(ROC) curve.In addition,the total cholesterol combined w ith hs-CRPwere detected to evaluate the application value of the diagnosis of patients of type 2 diabetesmellitus w ith increased carotid intima-media thickness.Results The two assays showed that the levelof hs-CRP in whole blood and serum of IMT increased group[(4.78±1.04)mg/L,(4.43±0.95)mg/L, respectively]were significantly higher than those of thenormal IMT group[(1.85±0.78)mg/L,(1.70±0.89)mg/L,respectively]and the healthy control[(0.98±0.67)mg/L and(0.87±0.59)mg/L](P＜0.05).The ROC curve analysis showed that the latex-enhanced immunonephelometrymethod had higher sensitivity(76.2%)and lower specificity(47.1%),w ith the areas under ROC curve for 0.612;the partied-enhanced turbidmetric method had lower sensitivity(69.0%)and higher specificity(52.9%),w ith the areas under ROC curve for 0.596.Compared to the single index test,the sensitivity of hs-CRP and total cholesterol combination detection had higher sensitivity(83.3%)and higher specificity(64.7%),w ith the areas under ROC curve for 0.732.Conclusion The blood hs-CRP level rises w ith the increase of IMT in the patients w ith T2DM.The latex-enhanced immunonephelometry method is better than the partied-enhanced turbidimetric immunoassaymethod in the diagnostic performance of increased carotid intima-media thickness of T2DM.The combination detection of hs-CRPand total cholesterolcan improve the diagnostic sensitivity and specificity.

Latex-enhanced immunonephelometrymethod;Partied-enhanced turbidimetric immunoassay;Type 2 diabetesmellitus(T2DM);Hypersensitive C-reaction protein(hs-CRP);Carotid intima-media thickness;Total cholesterol;Diagnosis

R587.1

A

1003—6350（2016）16—2615—04

2016-01-27)

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2016.16.012

李娟紅。E-mail：224047632@qq.com