外周血調(diào)節(jié)性T細胞在尿毒癥血液透析前后的變化及臨床意義

張俊濤，周文英，何冬黎，彭蔚芳(.珠海市第二人民醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東珠海5900；.中山大學附屬第五醫(yī)院檢驗科，廣東珠海59000)

·臨床經(jīng)驗·

外周血調(diào)節(jié)性T細胞在尿毒癥血液透析前后的變化及臨床意義

張俊濤1，周文英2，何冬黎1，彭蔚芳1
(1.珠海市第二人民醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東珠海519020；2.中山大學附屬第五醫(yī)院檢驗科，廣東珠海519000)

目的探討尿毒癥患者血液透析前后外周血調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)及其細胞因子轉化生長因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)的變化及臨床意義。方法選擇2014年8月至2016年2月期間我院收治的行血液透析治療的50例尿毒癥患者納入觀察組，50例健康體檢者納入對照組，檢測對照組入組次日及觀察組透析治療前、治療1個月、3個月及6個月時外周血Treg及IL-10、TGF-β1水平，并同時檢測腎功能水平。結果觀察組治療前Treg及其細胞因子TGF-β1、IL-10含量分別為(2.08±0.23)%、(1.78±0.21)%、(1.56±0.19)%，均低于對照組的(7.27±1.02)%、(5.28±0.88)%及(4.79±0.75)%，Scr、BUN分別為(998.47±100.38)μmol/L、(32.19±5.22)mmol/L，均高于對照組的(78.56±30.18)μmol/L、(5.53±3.21)mmol/L，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；透析治療后，觀察組Treg、TGF-β1、IL-10含量在治療1個月、3個月、6個月時間點較治療前逐級上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；但是治療6個月后Treg、TGF-β1、IL-10含量分別為(3.48±0.35)%、(3.19±0.28)%、(2.89±0.26)%，仍然低于對照組含量，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；觀察組Scr、BUN在治療1個月、3個月、6個月時間點較治療前逐級下降，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論尿毒癥患者存在免疫功能紊亂，血液透析有助于改善機體的免疫功能。

血液透析；尿毒癥；免疫功能；調(diào)節(jié)性T細胞

尿毒癥是各種慢性腎臟疾病的最終腎功能衰竭階段，患者普遍存在免疫功能紊亂和低下[1]，是尿毒癥患者容易合并嚴重感染等并發(fā)癥的重要影響因素之一。目前血液透析是尿毒癥治療最常用的腎臟替代治療方法，可有效緩解尿毒癥患者的臨床癥狀、延長患者的生存時間。調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)是具有免疫調(diào)節(jié)功能的一群T淋巴細胞，在機體免疫應答作用中占據(jù)了重要的地位[2]。本研究通過對尿毒癥行血液透析患者的外周血中Treg及其細胞因子轉化生長因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)進行檢測，探討尿毒癥患者血液透析前后外周血Treg及TGF-β1、1IL-10的變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2014年8月至2016年2月期間于珠海市第二人民醫(yī)院腎內(nèi)科收治的50例行血液透析治療的尿毒癥患者，其中男性33例，女性17例；年齡20～75歲，平均(48.6±11.7)歲；慢性腎小球腎炎22例，糖尿病腎病12例，高血壓腎病8例，梗阻性腎病5例，多囊腎3例。排除標準：年齡＜18歲或＞80歲者；活動期的免疫系統(tǒng)疾病或腫瘤患者；近8周內(nèi)服用激素及免疫調(diào)節(jié)劑的患者；近期急性感染性疾病患者；病情危重或存在嚴重心、肝、腦等多臟器功能衰竭患者。選取同期健康體檢者50例作為對照組，其中男性22例，女性18例；年齡21～70歲，平均(45.8±10.4)歲。兩組受檢者在年齡、性別等一般資料方面比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法觀察組患者均接受常規(guī)碳酸氫鹽透析治療，每次4 h，每周3次，使用一次性聚砜膜透析器(Polyflux 17R膜，膜面積1.7m2)，血管通路為動靜脈內(nèi)瘺或帶隧道帶滌綸套導管，普通肝素抗凝，劑量個體化。血流量250～300m L/m in，透析液流量500m L/min。

1.3 觀察指標對照組于入組次日，觀察組分別于首次透析治療前、透析1個月、透析3個月、透析6個月時間點采集當日透析前靜脈血5m L。采用流式細胞流式細胞儀(型號Cell Lab QuantaSC)檢測CD25+CD4+T細胞所占T細胞總數(shù)的百分比，代表CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞百分含量，檢測Treg的(IL-10)及TGF-β1的百分含量。其中CD4-FITC、CD25-PE、TGF-β1及IL-10抗體購自BECTON DICKINSON。同時使用全自動生化分析儀檢測患者血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平。

1.4 統(tǒng)計學方法應用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

觀察組患者治療前的Treg及其細胞因子TGF-β1、IL-10含量均低于對照組，Scr、BUN水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；透析治療后，觀察組患者的Treg、TGF-β1、IL-10含量在治療1個月、3個月、6個月時間點較治療前逐級上升，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；但是治療6個月后，觀察組患者Treg、TGF-β1、IL-10含量仍然低于對照組水平，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；觀察組Scr、BUN水平在治療1個月、3個月、6個月時間點較治療前逐級下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 對照組與觀察組外周血Treg及其細胞因子含量、腎功能水平的比較(±s)

表1 對照組與觀察組外周血Treg及其細胞因子含量、腎功能水平的比較(±s)

注：與對照組比較，a P＜0.05；與治療前比較，b P＜0.05；與治療1個月比較，c P＜0.05；與治療3個月比較，d P＜0.05。

組別對照組觀察組治療前治療1個月治療3個月治療6個月Treg及其細胞因子含量(%)腎功能Treg 7.27±1.02 TGF-β1 5.28±0.88 IL-10 4.79±0.75 Scr(μmol/L) 78.56±30.18 BUN(mmol/L) 5.53±3.21 2.08±0.23a 2.74±0.31b 3.09±0.33c 3.48±0.35da 1.78±0.21a 2.19±0.23b 2.78±0.25c 3.19±0.28da 1.56±0.19a 2.04±0.22b 2.41±0.24c 2.89±0.26da 998.47±100.38 a 889.68±77.54b 856.31±60.22c 789.65±59.39d 32.19±5.22a 27.37±3.21b 24.87±2.98c 21.39±2.79d

3 討論

尿毒癥患者因腎功能衰竭、腎小球濾過功率下降，引起患者體內(nèi)各種尿毒癥毒素潴留、蓄積，加之營養(yǎng)不良、微炎癥狀態(tài)、代謝性酸中毒、繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進等并發(fā)癥的影響，患者常常出現(xiàn)免疫功能紊亂，主要是表現(xiàn)為細胞免疫功能低下[3-4]。血液透析是目前治療尿毒癥的最常用的腎臟替代治療手段，可通過半透膜利用彌散、對流、吸附等原理清除體內(nèi)過多的液體和電解質(zhì)、代謝廢物，糾正代謝性酸中毒。但是對于血液透析對免疫功能的影響目前尚存在不同意見[5]。

T淋巴細胞亞群是由一群具有不同功能的、異質(zhì)性淋巴細胞所組成，根據(jù)細胞表面標志物分子可將其分為不同的功能亞群。CD4+CD25+Treg是一類新近被認識、特殊的調(diào)節(jié)性T淋巴細胞亞群，它以一種主動性的方式調(diào)控機體的免疫應答，具有免疫增強或下調(diào)的雙重作用，因此被稱為調(diào)節(jié)性T細胞[6]。一旦該細胞出現(xiàn)數(shù)量缺乏或功能缺陷則會引起自身免疫功能紊亂，因而Treg的變化可在一定程度上反映機體的細胞免疫功能狀態(tài)[7]。Treg除表達CD4分子和CD25分子以外，其主要特點是以分泌細胞因子IL-10及TGF-β1為主，IL-10及TGF-β1是Treg執(zhí)行免疫調(diào)節(jié)功能的重要物質(zhì)基礎[8]。其中TGF-β1是調(diào)節(jié)細胞增殖生長、分化以及合成和沉淀細胞外基質(zhì)功能的細胞因子。IL-10可起到抑制前炎性細胞因子和趨化因子產(chǎn)生的作用[9]。Treg與慢性腎功能衰竭密切相關，馮曉晨等[10]探索了Treg及TGF-β1在尿毒癥患者免疫機制中的作用，結果發(fā)現(xiàn)患者Treg細胞百分比及TGF-β1水平均顯著低于健康人群。本研究發(fā)現(xiàn)，尿毒癥患者治療前外周血Treg及其細胞因子TGF-β1、IL-10均低于對照組，進一步說明尿毒癥患者存在免疫功能紊亂。隨著血液透析時間的進展，觀察組患者的Treg、TGF-β1及IL-10表達水平均顯著上升，腎功能指標Scr、BUN顯著下降。說明尿毒癥患者通過血液透析治療后，尿毒癥毒素在一定程度上被清除，機體的免疫功能較透析前有所恢復。患者透析治療6個月后外周血Treg、TGF-β1及IL-10依然低于對照組，也說明尿毒癥患者因為腎功能衰竭，血液透析作為腎臟替代治療手段無法完全糾正患者的免疫功能紊亂。

綜上所述，通過流式細胞儀動態(tài)監(jiān)測尿毒癥患者外周血中的Treg及TGF-β1、IL-10含量的變化可反映患者的免疫功能狀態(tài)，血液透析有助于改善部分免疫功能。

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Changes and clinical significance of regulatory T cells in peripheral blood in urem ic patients before and after hemodialysis.

ZHANG Jun-tao1,ZHOUWen-ying2,HEDong-li1,PENGWei-fang1.1.Departmentof InternalMedicine, the Second People's Hospital of Zhuhai,Zhuhai 519020,Guangdong,CHINA;2.Department of Laboratory,the Fifth HospitalAffiliated to Sun Yat-sen University,Zhuhai519000,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the changes and clinical significance of regulatory T cells(Tregs)and IL-10,TGF-β1in peripheral blood in uremic patients before and after hemodialysis.Methods A total of 50 cases of urem ic patients,who treated by hemodialysis in our hospital from Aug.2014 to Feb.2016,were chosen as theobservation group,and 50 casesofhealthy peoplewere included into the controlgroup.The peripheralblood Treg,IL-10,TGF-β1levels and renal function of the control group at the next day,and of the observation group before dialysis,1 month,3 months and 6months after treatment,were detected.Results Before treatment,the Treg and cytokine TGF-β1,IL-10 in the observation group[(2.08±0.23)%,(1.78±0.21)%,(1.56±0.19)%,respectively]were significantly lower than those of the controlgroup[(7.27±1.02)%,(5.28±0.88)%,(4.79±0.75)%,respectively].The Scrand BUN in the observation group[(998.47±100.38)μmol/L,(32.19±5.22)mmol/L]were significantly higher than those of the control group [(78.56±30.18)μmol/L,(5.53±3.21)mmol/L](P＜0.05).Compared w ith before treatment,the Treg,TGF-β1and IL-10 in the observation group at 1month,3months,6months after dialysis treatmentwere gradually increased,and the difference was statistically significant(P＜0.05).But at 6 months,the Treg,TGF-β1,IL-10[(3.48±0.35)%,(3.19±0.28)%, (2.89±0.26)%,respectively]were still significantly lower than those in the control group(P＜0.05).Compared w ith before treatment,the Scr and BUN in observation group 1month,3months,6months after treatmentwere progressively decreased(P＜0.05).Conclusion The urem ic patients has immune function disorder,and hemodialysis is helpful to improve the immune function.

Hemodialysis;Urem ia;Immune function;Regulatory T cell

R692.5

A

1003—6350（2016）16—2684—03

2016-02-21)

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2016.16.036

廣東省2014年度科技計劃項目(編號：A2014684)

張俊濤。E-mail：zhangjt@126.com