響應面試驗優化高溫高壓制備玉米環（組氨酸-脯氨酸）二肽關鍵工藝

樊紅秀，劉婷婷，劉鴻鋮，任華華，張艷榮

（吉林農業大學食品科學與工程學院，吉林 長春 130118）

響應面試驗優化高溫高壓制備玉米環（組氨酸-脯氨酸）二肽關鍵工藝

樊紅秀，劉婷婷，劉鴻鋮，任華華，張艷榮*

（吉林農業大學食品科學與工程學院，吉林 長春 130118）

將高溫高壓技術應用于玉米環（組氨酸-脯氨酸）二肽（cyclo（His-Pro），CHP）的制備，以玉米蛋白水解物為原料，在水相溶液中采用高溫高壓法對其進行環化，合成CHP。通過單因素試驗考察反應溫度、底物質量濃度、反應時間和KHCO3濃度對CHP提取量的影響，應用響應面試驗設計對高溫高壓環化反應條件進行優化。結果表明最佳反應條件為反應溫度125.9 ℃、反應壓力0.25 MPa、底物質量濃度20.5 mg/mL、KHCO3濃度0.16 mol/L、反應時間5.3 h，此條件下CHP提取量可達6.58 mg/g。采用超高效液相色譜-串聯質譜法對水解物中的CHP進行進一步鑒定，結果表明制備的玉米CHP與預期結構相符。

玉米蛋白；環（組氨酸-脯氨酸）二肽；高溫高壓法；環化反應

環（組氨酸-脯氨酸）二肽（cyclo（His-Pro），CHP）是一種內源性環二肽，廣泛分布于人和動物的組織和體液中［1］，在哺乳動物體內表現出多種生理活性，例如緩解酒精的麻醉作用［2］、避免自由基和外傷誘發的神經元死亡［3］、降低食欲［4］、調節血糖代謝［5］等。CHP是促甲狀腺素釋放激素的代謝產物，相關研究過程中大量的CHP從某些食物蛋白水解物中被分離出來，如酪蛋白、魚、蝦以及大豆蛋白等［6-7］，這些CHP被認為是由蛋白質通過熱處理或酶解作用釋放出的組氨酸-脯氨酸（His-Pro）或脯氨酸-組氨酸（Pro-His）二肽發生非酶促環化而形成的［8］。食物蛋白源CHP因其安全性高、來源廣泛、成本低廉以及較強的生理活性而受到研究者們的關注，已成為生物活性肽領域的研究熱點。

玉米是三大糧食作物之一，我國玉米年產量正常年產量為2.12億 t左右，約占世界總產量的四分之一［9］。玉米蛋白粉是玉米淀粉加工中的副產物，其蛋白含量高達50%～60%。玉米蛋白粉水溶性差，缺乏色氨酸、賴氨酸等人體必需的氨基酸，嚴重限制其在食品工業中的應用。目前在國內玉米蛋白粉主要作為低價飼料蛋白出售，未充分發揮玉米蛋白的糧食屬性，造成人類食物資源的浪費［10-11］。利用GenBank數據庫對已收錄的玉米蛋白進行氨基酸序列分析，發現玉米γ-醇溶蛋白、谷蛋白以及球蛋白的一級結構中富含His-Pro和Pro-His序列［12］，是制備高附加值CHP的良好來源。環二肽的傳統合成方法主要有固相法和溶劑回流法［13］，存在產率低、反應時間長、有機溶劑消耗量大等缺點。近年來出現了利用高溫高壓法、微波輻射法等新技術合成環二肽的文獻報道［14-15］，取得了令人滿意的結果。高溫高壓技術具有高效、廉價、操作簡單、綠色環保等特點，可大幅度提高反應速度和產率。本研究將高溫高壓技術應用于玉米CHP的合成中，以玉米黃粉為起始原料，經蛋白酶水解得到富含His-Pro和Pro-His二肽的玉米蛋白水解物后，在高溫高壓條件下直接對其進行環化，制備CHP。重點考察了高溫高壓環化反應條件，并采用超高效液相色譜-串聯質譜儀對產物中CHP的結構進行鑒定，旨在促進CHP活性肽的開發與應用、提高玉米蛋白的附加值、促進玉米精深加工業良性發展。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

玉米黃粉（蛋白含量55.76%） 黃龍食品工業有限公司；堿性蛋白酶（酶活286 000 U/mL）、風味蛋白酶（酶活247 000 U/g）（均為食品級） 丹麥諾維信公司；耐高溫α-淀粉酶（酶活20 000 U/g）、葡萄糖苷酶（酶活120 000 U/g）（均為食品級） 無錫杰能科生物工程有限公司；CHP標準品（純度98%） 上海吉爾生化有限公司；乙腈（色譜純） 美國Fisher公司；三氟乙酸（trifl uoroacetic acid，TFA，純度98%） 美國Sigma Aldrich公司；屈臣氏蒸餾水 廣州屈臣氏有限公司；KHCO3（分析純） 北京化工廠。

1.2儀器與設備

LDZM-80KCS-Ⅱ立式壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫療器械廠；Acquity H-Class超高效液相色譜儀 美國Waters公司；超高效液相色譜-質譜聯用儀（Accela UPLC色譜系統和LTQ XL線性離子阱質譜儀，配有電噴霧電離源和Xcalibur工作站） 美國Thermo Fisher公司；HA121-50-02超臨界萃取裝置 江蘇南通華安超臨界萃取有限公司；PHS-3BW電腦數顯酸度計 上海理達儀器廠；DZKW-4電子恒溫水浴鍋 北京市中興偉業儀器有限公司；Alpha 1-4 LDplus凍干機 德國Marin Christ公司；KDC-1402低速離心機 安徽中科中佳科學儀器有限公司；HYP-1004消化爐 上海纖檢儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1玉米γ-醇溶蛋白和谷蛋白的同時提取

稱取1 kg玉米黃粉粉碎，過40 目篩，超臨界CO2萃取法脫脂脫色后用去離子水配制成質量濃度為0.1 g/mL的玉米黃粉懸浮液，調節pH 6.5，于90 ℃條件下按40 U/g底物加入耐高溫α-淀粉酶，繼續攪拌反應1 h，降溫至55 ℃，調節pH 4.5，按280 U/g底物加入葡萄糖苷酶繼續水解1 h，在沸水浴中滅酶30 min，離心（3 800 r/min，15 min）去除上清液，沉淀物用等量蒸餾水洗滌3 次，徹底去除淀粉及其水解產物，60 ℃干燥箱中烘干。將脫淀粉玉米黃粉按料液比1∶10（g/mL）加入體積分數70%的乙醇溶液，60 ℃水浴提取60 min后，離心（3 800 r/min，15 min）分離收集上清液和沉淀。如此重復2 次。上清液即為α-醇溶蛋白和β-醇溶蛋白，可用于制備醇溶蛋白膜、緩釋性壁材等［16］；沉淀于60 ℃烘箱中烘干后，得到玉米γ-醇溶蛋白和谷蛋白（580 g），作為蛋白酶酶解實驗的原料，經凱氏定氮法測定其蛋白含量為83.14%。

1.3.2 γ-醇溶蛋白和谷蛋白水解液的制備

采用堿性蛋白酶和風味蛋白酶分步水解玉米γ-醇溶蛋白和谷蛋白，得到富含His-Pro和Pro-His二肽的玉米蛋白水解物。將玉米γ-醇溶蛋白和谷蛋白按照料液比1∶20（g/mL）加水混合于55℃條件下預熱，調節溶液pH 8.0，按12 100 U/g底物加入堿性蛋白酶，攪拌水解6.5 h，調節pH 7.5，溫度保持不變，按17 000 U/g底物加入風味蛋白酶繼續水解6 h，反應結束后在95 ℃條件下滅酶15 min，酶解液離心分離（3 800 r/min，15 min）收集上清液。向上清液中加入3 倍體積無水乙醇，于4 ℃條件下靜置4 h，離心脫除蛋白，收集上清液，旋轉蒸發除去乙醇后冷凍干燥，得到玉米蛋白水解物（232 g）。

1.3.3高溫高壓法合成玉米CHP

稱取10.00 g水解物凍干粉置于500 mL錐形瓶中，按一定底物質量濃度加入蒸餾水配制成多肽溶液，同時加入一定量的KHCO3調節溶液pH值為弱堿性，用紗布封口，放入壓力蒸汽滅菌器中進行高溫高壓處理，使樣液中的Pro-His二肽發生環化反應，生成CHP（圖1），達到預定時間后，溶液冷卻，經旋轉蒸發儀濃縮后，冷凍干燥，得到環化產物。稱取2 mg產物溶于20 mL含0.05% TFA的水-乙腈（95∶5，V/V）溶液，樣液過0.22 μm微孔濾膜后，采用超高效液相色譜法進行分析。

圖1　CHP的合成途徑Fig.1　Scheme of CHP synthesis

1.3.4CHP含量的測定

環化產物中CHP含量的測定采用超高效液相色譜法，色譜柱：Waters Acquity UPLC HSS T3柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；保護柱：VanGuard Pre-Column HSS T3（5 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相A為含0.05% TFA的超純水，流動相B為乙腈，線性洗脫梯度：0～5 min，5% B；5～6 min，5%～80% B；6～20 min，80% B。流速：0.2 mL/min；柱溫：35 ℃，檢測波長：220 nm，進樣量1 μL。

圖2　CHP標準品的超高效液相色譜圖Fig.2　UPLC chromatogram of CHP standard

CHP的定量采用外標法，精密稱取CHP標準品5 mg（精確至0.l mg）于5 mL容量瓶中，用流動相溶解并定容，配置成1.0 mg/mL的標準儲備液，再將標準儲備液稀釋成系列標準工作溶液，采用上述色譜條件檢測（圖2），以峰面積為縱坐標、以對照品質量濃度（mg/mL）為橫坐標，進行線性回歸，得到方程y=4 307 590x+10 640（R2=0.999 8）。根據標準曲線計算樣品中CHP的含量，最終根據下式計算CHP提取量：

式中：X為CHP提取量/（mg/g）；c為根據標準曲線計算得到的樣液中CHP的含量/（mg/mL）；V為樣液的體積/mL；m為樣品的質量/g；M1為環化產物的質量/g；M2為環化前玉米蛋白水解物的質量/g。

1.3.5高溫高壓法合成玉米CHP工藝條件優化

1.3.5.1單因素試驗

選取反應溫度（11 0～1 3 5 ℃）、反應時間（3～7 h）、底物質量濃度（13～33 mg/mL）和KHCO3濃度（0～0.5 mol/L）4 個因素，研究不同因素對CHP提取量的影響，從而確定各因素的最佳水平。

1.3.5.2響應面試驗

根據中心組合試驗設計原理，在單因素試驗的基礎上，以反應溫度、底物質量濃度、KHCO3濃度和反應時間為自變量，進行四因素三水平的響應面分析試驗，以CHP提取量為響應值，優化高溫高壓法合成玉米CHP的工藝條件，試驗因素及水平設計見表1。

表1　中心組合試驗設計因素及水平Table1　Factors and levels used in central composite design

1.3.6環化產物中CHP超高效液相色譜-串聯質譜分析

采用Thermo LTQ XL線性離子阱質譜儀對環化產物中CHP進行鑒定，質譜條件為電噴霧離子源，正離子檢測模式，噴霧電壓5.00 kV，毛細管電壓25.00 V，毛細管溫度250 ℃，鞘氣（N2）流速50.00 mL/min，管透鏡補償電壓85.00 V，一級全掃描范圍m/z 100～500。采用Thermo-Fisher Accela超高效液相色譜儀與質譜儀聯用，色譜柱及色譜條件同方法1.3.4節，實驗數據的采集和處理采用Xcalibur軟件。

2　結果與分析

2.1單因素試驗結果

2.1.1反應溫度的確定

線型二肽前體閉合成環二肽反應實質上是分子內縮合形成肽鍵的過程，二肽的環化反應歷程是線型二肽前體通過單鍵的旋轉使羧基中的C和氨基中的N逐漸接近，羧基上的OH先脫去，N和C繼續接近至形成單鍵，而后氨基上的H才脫去，H移向OH與之結合成H2O，最后H2O遠離生成的環二肽［17］。根據文獻報道［18］，高溫高壓有利于線性肽克服形成環狀過渡態結構中的扭曲張力，增加首尾相遇機會，促進成環反應進行。在底物質量濃度23 mg/mL、KHCO3濃度0.2 mol/L、反應時間5 h條件下，分別于110、115、120、125、130、135 ℃進行環化反應，考察反應溫度對CHP提取量的影響，如圖3所示。

圖3　反應溫度對CHP提取量的影響Fig.3　Effect of reaction time on the yield of CHP

由圖3可知，隨著反應溫度的升高，反應釜顯示的反應壓力不斷增大，而CHP提取量呈現先增加后下降的趨勢：當反應溫度低于125 ℃時，CHP提取量隨著反應溫度的升高而急劇增大，在125 ℃時趨于平穩；繼續提高反應溫度，超過130 ℃時，反應壓力繼續增大，而CHP提取量開始降低，同時伴隨有副產物生成，并且在產物中觀察到了部分消旋。因此本實驗選取125 ℃為最佳反應溫度，此時反應壓力為0.24 MPa。

2.1.2底物質量濃度的確定

Marchini等［19］指出最佳底物質量濃度是形成環狀過渡態復合物引起環張力最小的那一種；若底物質量濃度過高則容易發生分子間的聚合，從而導致環二聚肽和環多聚肽等副產物的生成［20］。在KHCO3濃度0.2 mol/L、反應溫度125 ℃、反應時間5 h條件下，分別于13、18、23、28、33 mg/mL的底物質量濃度條件下進行環化反應，考察底物質量濃度對CHP提取量的影響，如圖4所示。

圖4　底物質量濃度對CHP提取量的影響Fig.4　Effect of substrate concentration on the yield of CHP

由圖4可知，隨著底物質量濃度的增加，CHP提取量逐漸降低，底物質量濃度在13～23mg/mL范圍內，CHP提取量隨著底物質量濃度的增加降低不顯著；當底物質量濃度超過23 mg/mL時，CHP提取量降低的幅度較大，液相色譜檢測到有副產物生成。因此關環反應需在稀溶液中進行，但是過低的底物質量濃度造成反應溶液體積過大，在實際生產中無形的增加了設備要求，濃縮成本也加大，因此本實驗選取23 mg/mL為最佳底物質量濃度。

2.1.3KHCO3濃度的確定

根據文獻［21］，反應體系中添加堿可以提高二肽N端的親核活性，有利于氨基進攻末端碳原子發生分子內縮合，提高環化速率，故經典的環二肽液相合成法大多是在堿性條件下進行，但是過量的堿易引起終產物環二肽的消旋，得到非對映異構體的混合物［22］。分別添加0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mol/L不同濃度的KHCO3溶液，于底物質量濃度23 mg/mL、反應溫度125 ℃、反應時間5 h條件下進行環化反應，考察KHCO3濃度對CHP提取量的影響，如圖5所示。

圖5　KHCO3濃度對CHP提取量的影響Fig.5　Effect of KHCO3concentration on the yield of CHP

由圖5可知，隨著KHCO3濃度的增加，CHP提取量呈現先增加后下降的趨勢，當KHCO3在低濃度范圍（0～0.2 mol/L）時，隨著KHCO3濃度的增加，CHP提取量逐漸增大；當KHCO3濃度大于0.2 mol/L時，隨著KHCO3濃度的增加，CHP提取量開始緩慢下降，并且產物的消旋化程度逐漸增加，因此本實驗中KHCO3濃度選擇0.2 mol/L。

2.1.4反應時間的確定

在底物質量濃度23 mg/mL、反應溫度125 ℃、KHCO3濃度0.2 mol/L的條件下，分別反應不同的時間3、4、5、6、7 h，考察反應時間對CHP提取量的影響，如圖6所示。

圖6　反應時間對CHP提取量的影響Fig.6　Effect of reaction time on the yield of CHP

由圖6可知，隨著反應時間的延長，CHP提取量逐漸增大，當反應時間為5 h時，CHP提取量達到最大，繼續延長反應時間，CHP提取量上升緩慢并逐漸趨于平穩，表明此時反應已經完全，從能耗及經濟角度考慮，本實驗選取5 h為最佳反應時間。

2.2響應面試驗結果

由于試驗過程中反應釜的壓力不可調，其是隨著反應溫度的變化而變化的，故反應壓力和反應溫度的影響一致，因此選擇反應溫度（A）、底物質量濃度（B）、KHCO3濃度（C）和反應時間（D）進行中心組合試驗，中心組合試驗設計和結果如表2所示。

表2　響應面試驗方案及結果Table2　Experimental design and results for response surface methodology

以CHP提取量為因變量，采用Design-Expert 8.0.6軟件對表2數據進行響應面分析，得二次多項擬合回歸方程為：

Y=-276.925 2+4.254 9A+0.437 8B-34.666 7C+ 5.935D-0.003 2AB+0.37AC-0.13AD+0.35BC+ 0.015BD-1.1CD-0.016 6A2-0.004 8B2-42.5C2-0.37D2

從表3可以看出，整體模型的P值小于0.05，表明該二次方程模型顯著；失擬項P=0.304 9＞0.05，表明其對于絕對誤差不顯著，方程擬合較好；變異系數越小，試驗的可靠性越高［23］，變異系數較低，說明試驗操作的可信度高。此外，模型的相關系數R2=0.971 8和校正決定系數=0.945 5，說明自變量與響應值之間的多元回歸關系顯著，該模型與實際數據擬合良好，可以在模型設定的范圍內分析和預測CHP提取量。模型中一次項A、B、C、D，二次項A2、B2、C2、D2以及交互項AC、BC對CHP提取量有顯著影響，其余項的影響均不顯著（P＞ 0.05）。方差分析結果還說明，高溫高壓合成過程中對CHP提取量影響程度由強到弱的因素為：KHCO3濃度＞反應溫度＞反應時間＞底物質量濃度。

表3　回歸模型的方差分析及回歸系數的顯著性檢驗Table3　Analysis of variance （ANOVA） and significance test for quadratic response surface model

圖7　各因素交互作用對CHP提取量影響的響應面Fig.7　Response surfaces showing the interactive effects of reaction conditions on the yield of CHP

利用軟件分析得到如圖7所示的因變量與四因素間交互作用的響應面圖。對回歸方程進行模擬優化，得到高溫高壓法合成玉米CHP的最佳工藝條件為反應溫度125.87 ℃、底物質量濃度20.5 mg/mL、KHCO3濃度0.16 mol/L，反應時間5.26 h，在此條件下得到的CHP提取量的理論值為6.54 mg/g。

2.3最佳反應條件的驗證

考慮到實際操作可行性，將最佳反應條件修正為反應溫度125.9 ℃、底物質量濃度20.5 mg/mL、KHCO3濃度0.16 mol/L，反應時間5.3 h。取10 g水解物，按照上述最優條件進行3 次高溫高壓合成反應實驗，實際測得的平均CHP提取量為6.58 mg/g，與模型預測值較為相近，驗證了響應面設計的準確性。Lieberman等［6］從富含蛋白的加工食品如肉罐頭、魚露以及干制蝦中鑒定出CHP，其含量分別為0.84、1.27、1.41 μg/g食物；Koo等［24］用含KHCO3的乙醇溶液加熱回流大豆蛋白水解物，反應2 周后水解物中CHP的含量為11.2 mg/g（水解物干質量），但我國大豆年產量很低，為1 200萬～1 300萬 t，每年需要進口大豆6 500萬～7 700萬 t，占國內大豆消費總量的80%［25］，有研究指出到2020年國內大豆供需缺口將高達1 383萬 t［26］，我國大豆資源呈緊缺態勢。玉米蛋白粉來源廣泛，利用率很低，據統計數字顯示每年全國通過廢液自然排放的玉米黃粉的產量達8萬 t以上［27］，利用高溫高壓技術將玉米蛋白粉中含量豐富的玉米蛋白轉化為CHP不僅能夠提高社會效益和經濟效益，而且有利于減少環境污染。

2.4環化產物中CHP的超高效液相色譜-串聯質譜分析

圖8　高溫高壓環化反應前（a）和反應后（b）水解物的超高效液相色譜圖Fig.8　Comparison of UPLC chromatogram of hydrolysate before and after being subjected to cyclization reaction under high temperature and high pressure

圖9　保留時間3.07 min的色譜峰的一級質譜圖Fig.9　Mass spectrum of peak at retention time of 3.07 min

圖10　10 m/z 235.7母離子的二級質譜圖Fig.10　Tandem mass （MS/MS） spectrum of precursor ion m/z 235.7

對最優工藝條件下得到的環化產物中的CHP進行進一步鑒定。圖8為環化產物的超高效液相色譜圖，對比標準品的保留時間，推測保留時間3.07 min的峰為CHP。通過質譜儀自動對來自超高效液相色譜的洗脫組分交替進行一級質譜和二級質譜處理，借助分析軟件，可對目標組分進行結構預測。由圖9可知，保留時間3.07 min的成分形成m/z 235.7的母離子［M+H］+峰，可得出該組分的分子質量為234.7 D，與標準品的分子質量一致。再選擇母離子（m/z 235.7）通過惰性氣體碰撞誘導離解為多個二級碎片離子，碎片離子的掃描圖如圖10所示，主要碎片離子峰有m/z 207、162、166、110、70，查閱相關文獻，根據環二肽的質譜裂解規律可以推斷出：母離子m/z 235裂解失去一個中性分子—CO形成碎片離子m/z 207.7，基峰m/z 162是碎片m/z 207進一步丟失一個肽鍵（—CHONH2）形成的，強峰 m/z 166則是母離子m/z 235通過丟失一個咪唑基團（C3N2H5）產生的，另一強峰m/z 110是由碎片m/z 207丟失CHNHC4N2H5形成的，二級質譜中還出現了典型的m/z 70的碎片離子，這是典型的脯氨酸的特征碎片離子，故可進一步證明高溫高壓環化反應后的玉米蛋白水解物中含有CHP。

3　結 論

以水為溶劑，采用高溫高壓技術對玉米蛋白水解物進行環化，制備CHP。通過單因素試驗和響應面分析對此工藝進行優化，得出最佳反應條件為反應溫度125.9 ℃、反應壓力0.25 MPa、底物質量濃度20.5 mg/mL、KHCO3濃度0.16 mol/L、反應時間5.3 h。在此條件下，玉米蛋白水解物中的His-Pro和Pro-His線性二肽可以直接發生分子內環化，得到較高提取量的CHP（6.58 mg/g），表明從玉米蛋白粉中實際生產CHP很有前景。通過超高效液相色譜-串聯質譜技術對產物中的CHP進行結構鑒定，進一步證明了環化產物中含有CHP活性肽。目前環二肽的高溫高壓合成都要經過兩步：首先將二肽的羧基端制成活潑酯，然后于高溫高壓條件下成環，制備工藝繁瑣。本實驗利用高溫高壓法一步合成CHP，不僅簡化了工藝流程，同時具有反應時間短、產物提取量高、環境友好等優點，適于在工業化生產中推廣。我國玉米蛋白資源豐富，利用率低，玉米蛋白制備CHP用于保健食品和藥品的生產，可大幅度提高玉米蛋白經濟效益及社會效益。

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Optimization of Key Processing Parameters for Preparation of Corn Cyclo （His-Pro） by High Temperature/High Pressure Method

FAN Hongxiu, LIU Tingting, LIU Hongcheng, REN Huahua, ZHANG Yanrong*
（College of Food Science and Engineering, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China）

In this study, we investigated the synthesis of corn cyclo （His-Pro） （CHP） in aqueous solution by a high temperature/pressure method from corn protein hydrolysate prepared in our laboratory. First of all, the one-factor-at-a-time method was used to investigate the influences of reaction temperature, substrate concentration, KHCO3concentration and reaction time on CHP yield. Subsequently, the reaction conditions were optimized using response surface methodology. Results revealed that the optimum reaction conditions were determined as follows： reaction temperature, 125.9 ℃；reaction pressure, 0.25 MPa； substrate concentration, 20.5 mg/mL； KHCO3concentration, 0.16 mol/L； and reaction time, 5.3 h, resulting in the maximum yield of CHP as high as 6.58 mg/g. The prepared CHP exhibited the expected structure as confirmed by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）.

corn protein； cyclo （His-Pro）； high temperature/high pressure method； cyclization reaction

10.7506/spkx1002-6630-201620002

TS213.4

A

1002-6630（2016）20-0006-07

樊紅秀, 劉婷婷, 劉鴻鋮, 等. 響應面試驗優化高溫高壓制備玉米環（組氨酸-脯氨酸）二肽關鍵工藝［J］. 食品科學, 2016, 37（20）： 6-12. DOI：10.7506/spkx1002-6630-201620002. http：//www.spkx.net.cn

FAN Hongxiu, LIU Tingting, LIU Hongcheng, et al. Optimization of key processing parameters for preparation of corn cyclo （His-Pro） by high temperature/high pressure method［J］. Food Science, 2016, 37（20）： 6-12. （in Chinese with English abstract） DOI：10.7506/spkx1002-6630-201620002. http：//www.spkx.net.cn

2016-05-12

“十二五”國家科技支撐計劃項目（2013BAD16B08）；國家高技術研究發展計劃（863計劃）項目（2011AA100805）

樊紅秀（1987—），女，博士研究生，研究方向為糧油植物蛋白工程。E-mail：xcpyfzx@163.com

張艷榮（1965—），女，教授，博士，研究方向為糧油植物蛋白工程及功能食品。E-mail：xcpyfzx @163.com