光照對喹乙醇檢測結果的影響

孔凡科，劉東，郭吉原

（1.中國石油大學化學工程學院，山東青島266580；2.新希望六和股份有限公司，山東青島266555）

光照對喹乙醇檢測結果的影響

孔凡科1，2*，劉東1，郭吉原2

（1.中國石油大學化學工程學院，山東青島266580；2.新希望六和股份有限公司，山東青島266555）

分別在陽光直射、室內光照射兩種條件下對喹乙醇溶液進行了不避光、簡單避光及嚴格避光三種處理方式的損失率測定實驗，采用嚴格避光的標準溶液做標準工作曲線（外標校正），并用超高效液相色譜儀進行快速分析，以比較不同條件下喹乙醇損失率。結果顯示，與嚴格避光組相比，陽光直射組與室內光照射組喹乙醇的損失率顯著偏高（P＜0.05）；在相同光照強度下，不避光組的損失率顯著高于簡單避光組（P＜0.05）。因此，光照對喹乙醇分解變質影響很大，為了在喹乙醇的檢測中得到較高準確度，整個檢測過程中要做到嚴格避光。

喹乙醇；光照；損失率

喹乙醇是一種抗菌促生長劑（Kamphues，1999），主要用于防止仔豬腹瀉（胡新崗等，2001）。中國獸藥典獸藥使用指南規定，喹乙醇預混劑只允許在35 kg以下的小豬飼料中使用，其添加量上限為100 mg/kg。不允許在禽料中使用喹乙醇預混劑，不允許在出口的畜產品中檢測到喹乙醇及其代謝物（中國獸藥典委員會，2011）。我國飼料行業中大部分企業使用的是混合生產線，即同一條生產線既生產小豬料也生產大豬料及禽料，雖然生產小豬料后需要進行洗倉，但是后續的飼料生產由于洗倉效果的原因也可能含有微量的喹乙醇。為了確保在禽飼料和大豬飼料中不含喹乙醇，評估洗倉效果時需要對洗倉料進行喹乙醇含量檢測，檢測結果準確性決定洗倉效率和食品安全。

在實際檢測過程中光照對喹乙醇檢測結果影響較大。原因是喹乙醇是光敏性試劑，倘若在進行檢測時避光操作不嚴，會對喹乙醇檢測的準確度造成嚴重影響。熾昌（1995）分別用254 nm和365 nm的紫外燈照射喹乙醇，結果表明，喹乙醇對紫外光敏感，但關于可見光對喹乙醇的影響并沒有給出明確的結論。本實驗主要對自然光照對喹乙醇溶液的影響及檢測過程中應采取的避光措施進行了研究以期為提高喹乙醇檢測結果的準確度提供指導。

1　材料和方法

1.1試驗設計

1.1.1光照條件本實驗所指自然光照是天然光源（太陽）發出的光，包括陽光直射光（DS，direct sunlight）和室內自然光（IL，internal light）。這兩種實驗條件均是選擇在天氣晴朗、室內采光良好的情況下。光照強度采用光學強度測定儀測定。陽光直射光照強度范圍是40000～70000 lx，室內自然光光照強度范圍是300～500 lx，嚴格避光條件下光照強度為0.1 lx。

1.1.2避光條件不避光（A）：沒有任何避光保護措施，實驗中使用無色玻璃器皿。

簡單避光（B）：實驗中使用棕色玻璃器皿。

嚴格避光（C）：實驗中使用棕色玻璃器皿，避光放置，不進行光照處理，該處理組為對照組。

1.1.3實驗分組實驗具體分組見表1。

表1　喹乙醇光照損失率實驗處理方案

1.1.4實驗溫度室內溫度為（20±5）℃。

1.1.5實驗結果要求每個處理組的每個時間點樣品重復進樣3次，取平均值報告結果。

1.2試劑與溶液

1.2.1喹乙醇標準品購自德國Dr.Ehrenstorfer，有標準品證書，產品標識含量為99%。

1.2.2喹乙醇標準溶液稱取10.00 mg于10 mL棕色容量瓶中，用40%（V/V）甲醇-水溶解并定容至刻度，該溶液的濃度為1.0 mg/mL。

1.2.3喹乙醇工作溶液以40%的甲醇-水溶液作為稀釋劑，采用梯度稀釋法配制0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、50.0 μg/mL 7個不同濃度標準工作溶液。標準工作溶液配制完成后立即放入密閉控溫的自動進樣器中上機測定，該標準溶液僅用于實驗樣品的定量計算，不參與光照實驗處理。

1.3儀器與設備超高效液相色譜儀（Waters UPLC H-Class）配紫外檢測器（e-λ PDA）；無色進樣瓶、棕色進樣瓶。光學強度測定儀（德國SAUTER）：型號SN100K，測量范圍0～100000lx。

1.4色譜條件色譜柱，BEH-C18色譜柱，內經2.1 mm，柱長100 mm，粒徑1.7 μm；進樣量：2 μL；流速：0.2 mL/min；檢測波長：260 nm；流動相：甲醇、超純水，梯度洗脫。梯度洗脫程序見表2。

表2　梯度洗脫程序

1.5實驗步驟

1.5.1標準工作溶液的檢測將配制好的標準工作溶液按照1.4的色譜條件進行上機測定。

1.5.2實驗溶液的檢測配制50份10 μg/mL的喹乙醇實驗溶液，按照表1規定的處理方法進行處理。共有5個處理組，分別為：陽光直射不避光（DS-A）、陽光直射簡單避光（DS-B）、室內光照射不避光（IL-A）、室內光照射簡單避光（IL-B）、嚴格避光（C）。每個處理組有10個處理水平。處理完畢后進行上機測定。

1.6結果計算

1.6.1喹乙醇濃度表示喹乙醇溶液的濃度以質量分數（μg/mL）表示。

1.6.2喹乙醇溶液損失率計算

式中：C為根據標準工作曲線計算得到的試驗溶液中喹乙醇含量，μg/mL。

1.6.3喹乙醇標準溶液的色譜圖及標準曲線根據本實驗色譜條件進行上機檢測。喹乙醇標準溶液色譜圖見圖1；喹乙醇標準溶液標準曲線方程及濃度范圍見表3。

圖1　喹乙醇標準溶液色譜圖

表3　喹乙醇曲線方程、相關系數及濃度范圍

1.7實驗數據處理所有數據以“平均值±標準誤”表示，采用SPSS 20.0軟件進行方差分析，Tukey HSDa’s法進行方差檢驗。

2　結果與分析

2.1喹乙醇溶液光照損失率結果分析通過表4可以看出，喹乙醇溶液經陽光直射不避光處理，20 min后，損失率達到94%左右，且處理20～200 min差異不顯著（P＞0.05）；喹乙醇溶液經室內光照射不避光處理，80 min后損失率達到90%以上，再行照射損失率變化差異不顯著（P＞0.05）；喹乙醇溶液經陽光直射簡單避光處理，180 min后損失率可達78%左右；喹乙醇溶液經室內光照射簡單避光處理，200 min后損失率為15%；喹乙醇溶液經嚴格避光處理，200 min后損失率在2%左右，且處理20～200 min差異不顯著（P＞0.05）。

2.2自然光照對喹乙醇溶液的影響通過表4可知，在相同避光條件下，陽光直射處理組的損失率顯著大于室內光照射處理組的損失率（P＜0.05）。說明光照強度是造成喹乙醇標準溶液分解變質的主要因素。

表4　喹乙醇光照損失率實驗結果%

2.3避光處理方式對喹乙醇溶液的影響通過表4可知，在相同光照條件下，不避光處理組比簡單避光處理組的損失率顯著偏高（P＜0.05），但兩者與嚴格避光處理組相比，損失率均顯著偏高（P＜0.05）。說明簡單避光可以有效緩解光照對喹乙醇的分解作用，但簡單避光處理只能減緩喹乙醇的分解速度，只有在嚴格避光的條件下，才可以將喹乙醇的分解程度降到最低。

2.4實際樣品不同避光方式下回收率檢測結果為了驗證上述結論的準確性，進行了不同飼料樣品提取過程中嚴格避光（C）與不避光（A）的加標回收比對試驗。加標回收比對結果見表5。由表5可知，在飼料樣品前處理過程中，嚴格避光處理的樣品加標回收率平均在91%左右，而不做避光處理的樣品加標回收率平均僅有55%。可見，與不避光處理組相比，嚴格避光處理組的加標回收率提高了65%，大大提高了飼料中喹乙醇檢測結果的準確度。

表5　飼料中喹乙醇加標回收率比對結果

3　結論

實驗結果表明，光照是造成喹乙醇標準溶液分解變質的主要因素。在光照條件下，會造成喹乙醇檢測結果偏低甚至不能檢出。通過簡單避光可以在一定程度上減緩光照對喹乙醇的分解速度。為了在喹乙醇的檢測中盡可能提高檢測結果的準確度，需要在整個檢測過程中做到嚴格避光。

喹乙醇檢測過程中需要嚴格避光的關鍵點主要包括：（1）喹乙醇標準儲備溶液從冰箱內取出放在室內回溫過程中，一定要將其放在嚴格避光的位置。（2）樣品提取時要用能避光的實驗器皿或器具，比如不透光的離心管或棕色的具塞三角瓶。（3）SPE固相萃取柱的過程中也需要嚴格避光，一般的SPE固相萃取柱不具有避光作用，可以在SPE固相萃取柱萃取外面包裹一層錫箔紙，或者包裹一層黑色不透明膠帶，以起到避光作用。（4）接取洗脫液的玻璃試管需要用棕色的，如果沒有，可以外面包裹錫箔紙和黑色不透明膠帶等做簡單避光處理。（5）上機液要裝在棕色進樣瓶中。（6）最好選擇有避光作用的自動進樣器進行分析。

［1］胡新崗，方希修，黃銀云，等.喹乙醇飼料添加劑應用研究進展［J］.動物科學與動物醫學，2001，19（5）：64～65.

［2］中國獸藥典委員會，中華人民共和國獸藥典獸藥使用指南化學品卷（2010版）［M］.北京：中國農業出版社.2011.105.

［3］沈熾昌.哇乙醇穩定性的初步研究［J］.中國獸藥雜志，1995，29（3）：25.

［4］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.GB/T 8381.7-2009［S］.飼料中喹乙醇的測定高效液相色譜法.北京：中國標準出版社，2009.

［5］Kamphues J.Antibiotic growth promoters for the view of animal nutrition［J］.Ber Munch Tierarztl Wochenschr，1999，112（10～11）：370～379.■

This test studied the loss rate of olaquindox solution processed in three ways including simply avoiding light，being in the light and strictly avoiding light，respectively，under two different conditions of direct sunlight and internal light.The processed samples was determined by the ultra high performance liquid chromatograph.External standard calibration was used with the olaquindox solution which was strictly avoiding light.Results showed that the loss rate of olaquindox solution of the direct sunlight and internal light group were significantly higher than that of the strictly avoiding light group（P＜0.05）.Under the same light conditions，the loss rate of being in the light group was significantly higher than that of simple light group（P＜0.05）.The results was indicated that light was the main factor on olaquindox decomposition.In order to get the high accuracy in the detection of olaquindox，we must strictly avoid light in the testing process.

olaquindox；light；loss rate

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161504

S816.17

A

1004-3314（2016）15-0016-03