溶解介質對黃芩苷脂質體主要特性的影響*

方曉玉，王亞靜，孫愛珍，王文津

（天津中醫藥大學 現代中藥發現與制劑技術教育部工程研究中心，天津 300193）

溶解介質對黃芩苷脂質體主要特性的影響*

方曉玉，王亞靜，孫愛珍，王文津

（天津中醫藥大學 現代中藥發現與制劑技術教育部工程研究中心，天津 300193）

［目的］考察溶解介質對黃芩苷脂質體主要特性的影響。［方法］測定黃芩苷在水相 ［水、磷酸鹽緩沖液（PBS）］和有機相（95%乙醇、無水乙醇、甲醇中）中的溶解度；分別將黃芩苷全部溶解在水相、有機相及在兩相中以一定比例存在，采用薄膜超聲法制備黃芩苷脂質體，測定粒徑、電位，并用高效液相色譜法測定包封率和滲漏率。［結果］黃芩苷在水、pH6.8 PBS溶液、95%乙醇、無水乙醇、甲醇中的溶解度分別為0.1、10.58、0.45、0.71、4.36 g/L。以pH6.8 PBS溶液、甲醇以及甲醇和pH6.8 PBS溶液為溶解介質制備的脂質體粒徑分別為（179.4±15.10）、（145.31± 7.35）、（133.84±4.67）nm；Zeta表面電位（-8.93±0.40）、（-8.69±1.08）、（-8.64±1.13）mV；包封率為（82.64±0.02）%、（48.87±0.01）%、（55.53±0.07）%；滲漏率為（9.30±0.02）%、（49.72±0.04）%、（55.41±0.01）%。［結論］以pH6.8 PBS溶液為溶解介質所得脂質體粒徑均勻、包封率高、滲漏量少，穩定性好。

黃芩苷；脂質體；包封率；滲漏率；溶解介質

DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2016.05.12

黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi）為中醫常用中藥，古籍記載具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效［1］。黃芩苷（baicalin）是從黃芩的根部提取的一種黃酮類化合物［2］，現代藥理研究表明，黃芩苷具有抗菌、消炎［3］、抗氧化［4］、美白［5］等作用。脂質體是一種具有類似生物膜雙分子層結構的囊泡，可將藥物包封于雙分子層結構中制成超微型球狀藥物載體制劑。將黃芩苷制成脂質體制劑可提高藥物的靶向性，并減少不良反應，提高生物利用度。目前，在藥物制備成脂質體的過程中，可以將藥物溶解于有機相中［6-9］，或溶解于水相中［10-11］，或在復方中根據藥物的脂、水溶解性將其溶于相應溶劑中［12］。文章以黃芩苷為模型藥物研究溶解介質對其制備的脂質體制劑主要特性的影響。

1 材料

島津高效液相色譜儀（日本島津公司），NanoSizer型激光粒度測定儀（英國Malvern公司），Thermo通用臺式冷凍離心機ST16R（德國賽默飛世爾公司），JY92-ⅡN型超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司），旋轉蒸發儀（上海愛朗有限公司），SHZ-Ⅲ型循環水真空泵（上海亞榮生化儀器廠），W201型恒溫水浴鍋（上海申盛生物技術有限公司），SK3200H型超聲儀（上海科導超聲儀器有限公司），ALC-1104型電子天平（上海精密科學儀器有限公司），十萬分之一天平（瑞士Mettler Toledo公司），超濾離心管（截留分子量30kD，Millipore公司）。

黃芩苷（天津中新藥業研究中心，純度＞94.0%），大豆卵磷脂（上海艾韋特醫藥科技有限公司，純度50%，批號20141119），膽固醇（鄭州利偉生物實業有限公司），磷酸二氫鉀（天津市光復科技發展有限公司，批號20120216），氫氧化鈉（天津化學試劑批發公司，批號20131106），甲酸（天津市富宇精細化工有限公司，批號20140511），甲醇、乙腈（天津市康科德科技有限公司）均為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他藥品、試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃芩苷溶解度測定 按照2010版《中國藥典》測定方法，進行溶解度測定［13］。稱取黃芩苷供試品適量，于（25±2）℃溫度下分別加入10 mL去離子水、pH6.8磷酸鹽緩沖液（PBS溶液）、甲醇、95%乙醇、無水乙醇中，每隔5 min強力振搖30 s，觀察其溶解狀況，如無目視可見的黃芩苷粉末時，視為藥物完全溶解，直至溶液中剛剛出現不溶物時，稱量剩余黃芩苷的量即為其在各溶劑中的溶解度。見表1。

表1 黃芩苷溶解度測定結果 g/L

根據溶解度測定結果，有機介質中黃芩苷在甲醇中的溶解度最大。水性介質中在pH6.8 PBS溶液中的溶解度大。故在制備脂質體時分別選擇甲醇為有機介質，pH6.8 PBS溶液為水性介質。

2.2 黃芩苷脂質體制備 根據前期預實驗結果，初步篩選出了以薄膜超聲法制備黃芩苷脂質體的處方工藝。

2.2.1 溶解介質為pH6.8PBS溶液的脂質體 以大豆卵磷脂與膽固醇比例為5∶1，黃芩苷與大豆卵磷脂比例1∶15的量精密稱取大豆卵磷脂、膽固醇于250 mL茄形瓶中加甲醇20 mL，超聲15 min溶解，置于旋轉蒸發儀上減壓蒸發除去有機溶劑，至瓶壁形成一層薄膜。另精密稱取黃芩苷全部溶于20 mL pH6.8 PBS溶液中。將溶有藥物的pH6.8 PBS溶液加入到茄形瓶中，水合洗膜至形成脂質體混懸液，將該混懸液于冰水浴中探頭式超聲60次（工作時間3 s，間隔時間3 s，功率200 w）即得，于冰箱中4℃條件下保存。

2.2.2 溶解介質為甲醇的脂質體 以大豆卵磷脂與膽固醇比例為5∶1，黃芩苷與大豆卵磷脂比例1∶15精密稱取大豆卵磷脂、膽固醇、黃芩苷于250 mL茄形瓶中加甲醇20 mL，超聲15 min溶解，于旋轉蒸發儀上減壓蒸發除去有機溶劑，至瓶壁上形成一層淡黃色薄膜。準確量取20 mL pH6.8 PBS溶液加入茄形瓶中，水合、洗膜至形成脂質體混懸液。將該混懸液于冰水浴中探頭式超聲60次（工作時間3 s，間隔時間3 s，功率200 w），即得。冰箱4℃條件下保存。

2.2.3 溶解介質為甲醇和pH6.8 PBS溶液的脂質體

以大豆卵磷脂與膽固醇比例為5∶1，黃芩苷與大豆卵磷脂比例1∶15精密稱取大豆卵磷脂、膽固醇、一定量黃芩苷于250 mL茄形瓶中，加甲醇20 mL，超聲溶解15 min，減壓蒸發除去有機溶劑，直至瓶壁上形成一層淡黃色薄膜。另稱取剩余量黃芩苷溶解于20 mL pH6.8 PBS溶液中，將其倒入茄形瓶中，水合、洗膜，制得脂質體混懸液，并在冰水浴中探頭式超聲60次（工作時間3 s，間隔時間3 s，功率200 w）。冰箱4℃條件下保存。

2.3 脂質體粒徑、電位測定 取上述3種脂質體樣品適量，加去離子水稀釋，測定粒徑及Zeta表面電位。見表2。

表2 黃芩苷脂質體粒徑、電位測定結果（±s）

表2 黃芩苷脂質體粒徑、電位測定結果（±s）

溶解介質 PDI Zeta電位（mV）pH6.8 PBS溶液 0.39±0.07-8.93±0.40甲醇 0.31±0.03-8.69±1.08甲醇∶pH6.8 PBS溶液 0.24±0.02-8.64±1.13 n 3 3 3粒徑（d/nm）179.40±15.10 145.31±07.35 133.84±04.67

由表2可看出，同時以甲醇和pH6.8 PBS溶液為介質制備的脂質體粒徑相對較小，其次是以甲醇為溶解介質制備的脂質體。就多分散系數（PDI）指數而言，3種脂質體相差不大，但同時溶解于甲醇和pH6.8 PBS溶液中所得脂質體比其他兩種脂質體更穩定。在本實驗中，脂質體表面帶負電荷，比較樣品的Zeta電位值，可知溶解介質為甲醇或pH6.8 PBS溶液對脂質體的電位值并無明顯影響。

2.4 包封率測定

2.4.1 色譜條件 Venusil XBP C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.1%甲酸水∶乙腈（69∶31）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。

2.4.2 線性關系考察 將黃芩苷分別配制成質量濃度為0.16、0.32、0.48、0.64、0.80 g/L的系列對照品溶液，進樣，測定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程A= 1 143.0C+39 735（r=0.999 7），表明黃芩苷在濃度為0.16～0.8 g/L時線性關系良好。

2.4.3 重復性實驗 取黃芩苷脂質體樣品1 mL，加甲醇溶定容至10 mL。取適量經0.45 μm微孔濾膜過濾，連續進樣5次，測定結果的RSD為0.28%，表明系統的重復性良好。

2.4.4 方法回收率實驗 準確稱取處方量輔料，制備空白脂質體。另分別精密量取1 mL空白脂質體加入對照品溶液，配制成質量濃度分別為0.4、0.5、0.6 g/L的樣品溶液（n=3），高效液相色譜法進行測定，計算回收率。平均回收率為97.84%，RSD 1.19%，符合要求。

2.4.5 游離藥物回收率實驗 準確稱取黃芩苷4、5、6 mg于10 mL容量瓶中，加pH6.8 PBS溶液溶解，定容，配制成質量分數為0.4、0.5、0.6 g/L的低、中、高3種濃度黃芩苷溶液。從中準確量取1 mL至超濾離心管中，按照“2.4.7”項下進行操作，高效液相色譜法測定峰面積，計算平均回收率102.67%，RSD 1.51%，回收率試驗符合要求。

2.4.6 精密度實驗 取同批次黃芩苷脂質體樣品6份各1 mL，分別加甲醇溶解并定容至10 mL。取適量經0.45 μm微孔濾膜過濾，進行測定，測定結果的RSD為0.69%，方法的精密度符合要求。

2.4.7 脂質體包封率的測定 精密量取黃芩苷脂質體1 mL至超濾離心管中，5 000 r/min離心40 min后收集濾液。濾液與同樣量1 mL未經超濾的脂質體樣品加甲醇超聲15 min破乳，稀釋定容至同樣倍數。取適量用0.45 μm微孔濾膜過濾，采用高效液相色譜法（HPLC）測定。未經超濾的脂質體中藥物量記為Wt，濾液中藥物量記為Wf，根據包封率計算公式En%=（Wt-Wf）/Wt×100%，計算藥物包封率。結果見表3。

表3 黃芩苷脂質體包封率測定結果（±s） %

表3 黃芩苷脂質體包封率測定結果（±s） %

溶解介質包封率n 3 pH6.8 PBS溶液 甲醇 甲醇∶pH6.8 PBS溶液82.64±0.02 48.87±0.01 55.53±0.07

通過對以不同溶解介質制備的黃芩苷脂質體包封率測定結果分析，發現當藥物完全溶解于pH6.8 PBS溶液時包封率最高，其次為同時溶解于甲醇和pH6.8 PBS溶液中的脂質體。

2.5 脂質體滲漏率測定 精密量取制得的脂質體樣品1 mL，按照“2.4.7”項下包封率測定方法進行測定，并按下式計算貯存過程中的滲漏率。滲漏率=［（制備時包封量-貯存一定時間后的包封量）/制備時的包封量］×100%［14］。見表4。

表4 黃芩苷脂質體滲漏率測定結果（±s） %

表4 黃芩苷脂質體滲漏率測定結果（±s） %

溶解介質滲漏率n 3 pH6.8 PBS溶液 甲醇 甲醇∶pH6.8 PBS溶液9.30±0.02 49.72±0.04 55.41±0.01

從測定結果可以看出，于冰箱中4℃條件下放置1周后，溶解介質為甲醇、甲醇和pH6.8 PBS溶液時制備的兩種脂質體滲漏明顯，而溶解介質為pH6.8 PBS溶液所制備的脂質體樣品滲漏量很少，可見pH6.8 PBS為溶解介質時所得脂質體穩定性更好。

3 討論

在脂質體的質量評價中，粒徑說明脂質體的大小，多分散系數（PDI）表明了粒徑大小的分布情況，當PDI指數大于0.3時，認為粒徑大小的分散范圍較寬，當PDI指數小于0.3時則認為脂質體大部分粒子的粒徑分布于某一數值范圍之間［15-16］。在粒徑測定結果中以pH6.8 PBS溶液為溶解介質制備的脂質體粒徑相對較大，分布范圍也較寬，另兩種脂質體的粒徑小，分布范圍較窄，說明溶解介質的確對脂質體的粒徑有影響。包封率測定方法的選擇在脂質體質量評價中是一項重要工作。當前包封率測定方法有很多，如葡聚糖凝膠柱色譜法、微柱離心法、超速離心法、魚精蛋白凝聚法等并各有特點［17-20］。本實驗采用超濾離心法測定黃芩苷脂質體的包封率，其操作簡單、快捷，成本較低，且超濾離心管容量可調整，經實驗驗證回收率符合要求，適用于黃芩苷脂質體的包封率測定。

目前，文獻中關于黃芩苷制劑的研究報道多數重點考察制備過程中的工藝條件，鮮有考察溶解介質對其脂質體制劑特性的影響。本文以此問題為研究對象，考察了溶解介質為甲醇、pH6.8 PBS溶液及同時溶于甲醇與pH6.8 PBS溶液時對黃芩苷脂質體粒徑、電位、包封率及滲漏率的影響，結果說明在制備脂質體時，需要考慮溶解介質對制劑特性的影響。因此，對于類似黃芩苷這種脂溶性與水溶性均較差的藥物，應該根據制劑要求進行適宜溶解介質的篩選。

［1］聶愛國.黃芩的藥理作用研究進展［J］.中國民族民間醫藥雜志，2010，19（17）:66-66.

［2］王 弘，陳濟民，張清民.黃芩苷的物化常數測定［J］.沈陽藥科大學學報，2000，17（2）:105-106.

［3］宋旦哥，孟慶剛.黃芩藥理作用研究述評［J］.中華中醫藥學刊，2009，27（8）:1619-1622.

［4］郭少英，程發峰，鐘相根，等.黃芩苷的體外抗氧化研究［J］.時珍國醫國藥，2011，22（1）:9-11.

［5］龔盛昭，揭育科，袁水明.黃芩苷在功能性化妝品中的應用研究［J］.日用化學工業，2003，33（3）:200-203.

［6］時 軍，黃嗣航，王小燕，等.Z-綜合評分法優化丹皮酚陽離子脂質體凝膠劑制備工藝［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（3）:32-35.

［7］熊 欣，劉淑芝，頊佳音，等.黃芩苷脂質載體凝膠的制備及其體外透皮性能評析［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（12）:28-30.

［8］齊 娜，劉 廣，廖 迎，等.熊果酸脂質體的制備及體外釋放特性考察［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（2）: 28-31.

［9］許伯慧，李曉霞，孟 璐，等.齊墩果酸脂質體包封率的測定［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（23）:86-90.

［10］齊 濱，劉 莉，張楠楠，等.西洋參SOD脂質體的制備工藝優選和性質評價［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19 （18）:17-19.

［11］張慧慧，劉超英.三七葉總皂苷脂質體凝膠劑的制備及其離體透皮率考察［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（21）: 45-48.

［12］潘 峰，胡春梅，潘黎軍，等.粉防己堿阿霉素脂質體的制備與體外釋放度的研究［J］.中草藥，2009，40（2）:215-220.

［13］中國藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2015.

［14］畢殿洲.藥劑學［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2000.

［15］Solans C，hquierdo P，Nolla J，et al.Nano-emulsions［J］.Current Opinionin Colloid Interface Seienee，2005，10（2）: 102-110.

［16］Zweers MLT，GrijPma DW，Engbers GHM，et al.The Preparation of monodis Persebiodegradable Polyesterna nopartieles with a controlled size［J］.Journal of Biomedieal Materials Researeh PartB:aPPlied Biomaterials，2003，66（1）:559-566.

［17］祝文琪，徐衛康，侯曉林，等.HPLC-超濾離心法測定連翹酯苷復方脂質體包封率［J］.中國現代應用藥學，2013，30（9）:1001-1004.

［18］張 冕.超速離心-HPLC法測定胸腺五肽脂質體的包封率［J］.荊楚理工學院學報，2012，27（2）:12-14.

［19］劉 陽，陶勝堯，郭偉英.葡聚糖凝膠微柱-HPLC測定奧沙利鉑脂質體包封率［J］.中國現代應用藥學，2014，31 （1）:74-77.

［20］高曉黎，季興梅.葡聚糖凝膠柱色譜法測定脂質體包封率的條件篩選［J］.中國藥學雜志，2003，38（7）:515-517.

Effects of dissolved medium on baicalin liposome main characteristics

FANG Xiao-yu，WANG Ya-jing，SUN Ai-zhen，WANG Wen-jin
（Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique，Ministry of Education，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To investgate the effects of dissolution medium on main characteristics of baicalin liposome.［Methods］Determination of baicalin solubility in methanol，PBS and the mixture of both.Baicalin liposome was prepared by thin-film dispersion method based on the measuring content of baicalin.The particle size，zeta potential and distribution of baicalin was measured with zeta potential and particle size analyzer，the leakage and encapsulation efficiency were examined by HPLC.［Results］The results showed that solubility of baicalin were 0.1，10.58，0.45，0.71，4.36 g/L in water，PBS，95%ethanol，absolute ethanol and methanol.Particle size of liposomes prepared by PBS，methanol，methanol and PBS as the solvent medium were 179.4±15.10，145.31±7.35，133.84±4.67 nm；zeta potential were-（8.93±0.40），-（8.69±1.08），-（8.64±1.13）mV；encapsulation efficiency were （82.64±0.02）%，（48.87±0.01）%，（55.53±0.07）%；the leakage rate were 9.30%±0.02，49.72%±0.04，55.41%±0.01.［Conclusion］The size distribution of baicalin liposome prepared by PBS as solvent medium was symmetrical and high coated rate，good stability.

baicalin；liposome；encapsulation efficiency；leakage rate；dissolution medium

R284

A

1673－9043（2016）05－0332-04

2016-05-14）

國家科技部“重大新藥創制”專項課題（2013ZX0 9508-105，2012ZX0903201）。

方曉玉（1988-），女，碩士研究生，主要從事藥物新劑型與新技術研究。

王亞靜，E-mail:yajing022@163.com。