高效液相法測(cè)定薏苡中各部位薏苡素的含量

黃克俊，裴學(xué)海，蔣讓勇，洪 亮，陳治明*

（貴州師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550001）

高效液相法測(cè)定薏苡中各部位薏苡素的含量

黃克俊，裴學(xué)海，蔣讓勇，洪 亮，陳治明*

（貴州師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550001）

使用HPLC法測(cè)定薏苡中各部位薏苡素的含量，測(cè)定部位分別是根、莖、葉、種。在檢測(cè)中所用的色譜柱型號(hào)是C18phenomenex250×4.60mm 5 micron，高效液相色譜儀型號(hào)為L(zhǎng)C2000；流動(dòng)相是乙腈：0.1%磷酸水溶液（25∶75），流速設(shè)為0.743/min；色譜柱溫度為30℃，檢測(cè)器波長(zhǎng)為232nm。測(cè)定結(jié)果顯示，各部位薏苡素含量從大到小的依次是根＞葉＞種＞莖，其中根的含量為46mg/100g，葉的含量為21mg/100g，種的含量為0.8mg/100g，莖的含量約為2mg/100g。因此，建議多以根、葉作為藥用部位。

薏苡；薏苡素；根；徑；葉；種

在醫(yī)學(xué)上，薏苡素是具有重要意義的藥物之一。薏苡為禾本科植物，亦稱(chēng)“薏米”，味甘、淡、性微寒。薏苡在禾本科植物中首屈一指，被譽(yù)為“世界禾本科植物之王”［1］。薏苡是食藥兩用的物質(zhì)，現(xiàn)代中西醫(yī)臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，薏苡中有效成分是薏苡素，亦稱(chēng)為薏苡內(nèi)脂。薏苡素對(duì)肌肉具有收縮作用［2］，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有鎮(zhèn)靜、抑制、鎮(zhèn)痛及降溫與解熱作用。在人們追求美的背景下，充分發(fā)揮薏苡的美容功效。最新研究發(fā)現(xiàn)［6］，薏苡仁中的薏苡仁酯（CXL）被認(rèn)為是抗癌的有效成分，CXL最大功效是抑制癌細(xì)胞的異常性繁殖，并通過(guò)新陳代謝來(lái)改善體質(zhì)。20世紀(jì)中期［7］，U-kita（日本）等分離出薏苡仁酯，這是世界上第一次從薏苡仁中提取得到薏苡素，不久之后，便使用人工合成薏苡素，減少對(duì)薏苡植株的依賴(lài)，通過(guò)進(jìn)一步研究，將薏苡素作為薏苡中抗擊癌細(xì)胞的主要成分。Hu［8］運(yùn)用超臨界流體萃取方法，在薏米中提取出薏苡仁酯以及薏米油，提取效率相對(duì)于常用化學(xué)方法，比較可靠科學(xué)。國(guó)內(nèi)對(duì)薏苡研究用的方法主要有分光光度法、高效液相色譜法等，如李厚聰?shù)龋?］，張明昶等［4］，吳英梅等［5］都用的是高效液相色譜法，但是他們都用的索氏提取法，加熱時(shí)間長(zhǎng)，有機(jī)溶劑多，樣品前處理復(fù)雜，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)探索用浸泡超聲法進(jìn)行前處理，不僅縮短時(shí)間也不浪費(fèi)溶劑，操作簡(jiǎn)單且實(shí)驗(yàn)效果顯著。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

儀器：高效液相色譜儀LC-2000（日本）、LC-2050溶劑箱、LC-2030紫外可見(jiàn)檢測(cè)器、LC-輸液泵，色譜柱為C18phenomenex250×4.60mm 5 micron，以及烘箱、粉碎機(jī)、超聲儀、有機(jī)膜、天平（感量為0.000 1g）。

試劑：超純水、甲醇為色譜純、丙酮、0.1%磷酸、乙腈以上試劑均為分析純。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)樣的配備：稱(chēng)量大約1g薏苡素于250mL三角瓶中。加入25mL甲醇，浸泡過(guò)夜（24h以上），再超聲45min，然后用有機(jī)膜過(guò)濾，最后取濾液于20mL試管中上機(jī)備用。

1.3 儀器條件

流動(dòng)相∶乙腈∶0.1%磷酸水溶液=25∶75，流速為0.7mL/ min。色譜柱溫度為30℃，每次取樣為20μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為232nm。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 樣品的制備

稱(chēng)取已混合均勻的粉末試樣約1g（精確到0.1mg）于250mL潔凈三角瓶中，將三角瓶一一貼標(biāo)簽，再往其中加入25mL甲醇使其充分混合均勻。（注：薏苡素的試樣需要同時(shí)做回收率實(shí)驗(yàn)）。

1.4.2 待測(cè)液的制備

將裝有處理的試樣溶液的三角瓶放入冰箱內(nèi)保存，使之過(guò)夜至次日，且必須保證甲醇浸泡24h以上；再將其放置超聲儀中，頻率調(diào)至100Hz，時(shí)間調(diào)至45min，使其在超聲過(guò)程中充分混合、充分提取薏苡素。然后再將試樣取出，用有機(jī)膜進(jìn)行抽濾，當(dāng)然在抽濾之前要充分震蕩，使得試樣混合更充分，取一定量濾液于20mL試管中，同樣對(duì)試管進(jìn)行貼相應(yīng)標(biāo)簽。將裝有試樣的試管放入冰箱，且調(diào)節(jié)溫度至零下20℃存放。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

1.5.1 薏苡素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用甲醇處理的標(biāo)樣樣品，使薏苡素濃度為 0.012mg/mL。高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為20μL，繪制譜圖，見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 薏苡素對(duì)照?qǐng)D

1.5.2 線性關(guān)系

精密量取1、2、4、6、8、10、12、15、20μL薏苡素對(duì)照品溶液，進(jìn)樣并計(jì)算出峰面積。以對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算得線性回歸方程為：A=63 871.015 36+27 458.038 9X（r=0.999 7，n=3）。

The Content of Each Part in Coix Coix by HPLC

Huang Ke-jun，Pei Xue-hai，Jiang Rang-yong，Hong Liang，Chen Zhi-ming

The determination of Coixol in each part that Coix lacryma-jobi L.var.mayuen Stapf by HPLC.The part of determination are root、stem、leaf and seed.The model of chromatographic column si C18phenomenex250×4.60mm 5 micron in detection，The model of high performance liquid chromatography is LC2000；Mobile phase is acetonitrile of 25%、water of 75% and in the water the phosphate solution of 0.1%，F(xiàn)low rate is 0.7mL/min；The temperature of the chromatographic column is 30℃，The wave length of detector is 232nm.The consequence of determination show the content of Coixol is root＞leaf＞seed≈stem.and the content of root is 46mg/100g，the content of leaf is 21mg/100g，the content of seed is 0.8mg/100g，the content of stem is 2mg/100g.so I suggest root and leaf serve as medicine of Coix lacryma-jobi L.var.mayuen Stapf.

coix lacryma-jobi L.var.mayuen Stapf；Coixol；root；leaf；seed；stem

O657.72；R284

A

1003-6490（2016）07-0049-02

2016-06-25

受貴州師范大學(xué)研究生創(chuàng)新基金資助（NO：研創(chuàng)201517），貴州省自然科學(xué)基金（黔科合J字［2009］2021）。

黃克俊（1989—），男，貴州遵義人，碩士，主要研究方向?yàn)橛袡C(jī)合成。

陳治明（czm000219@163.com）。