荷花粉多糖顯著減輕氟尿嘧啶所致小鼠腸道黏膜屏障損傷

方小明，田文禮，張曉琳，彭文君，肖紅偉，高凌宇，王燦紅，高振江，*

（1.中國農業大學工學院，北京 100083；2.中國農業科學院蜜蜂研究所，北京 100093；3.中國醫學科學院 北京協和醫學院藥用植物研究所，北京 100193）

荷花粉多糖顯著減輕氟尿嘧啶所致小鼠腸道黏膜屏障損傷

方小明1，2，田文禮2，張曉琳1，彭文君2，肖紅偉1，高凌宇2，王燦紅3，高振江1，*

（1.中國農業大學工學院，北京 100083；2.中國農業科學院蜜蜂研究所，北京 100093；3.中國醫學科學院 北京協和醫學院藥用植物研究所，北京 100193）

目的：探討不同干燥方法提取的荷花粉多糖（lotus bee pollen polysaccharides，LP）對5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-Fu）所致小鼠腸道黏膜損傷及功能失調的改善作用。方法：分別采用熱風干燥與真空脈動干燥的方法對荷花粉進行干燥，并提取多糖。建立5-Fu小鼠腸黏膜炎模型，隨機分組、給藥。炭末推進法測定小鼠的腸推進率，并測量小鼠結腸長度；計算全腸道派氏集合淋巴結（Peyer’s patches，PPs）的面積；取小鼠結腸組織進行病理組織切片觀察；生物化學方法檢測PPs勻漿上清液中活性氧（reactive oxygen species，ROS）和谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量、過氧化氫酶（catalase，CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力；酶聯免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測PPs勻漿上清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的含量。結果：與正常組相比，5-Fu可顯著抑制小鼠腸道的推進功能（P＜ 0.05）。熱風干燥與真空脈動干燥樣品中提取的LP能減緩5-Fu所致的結腸縮短（P＜0.05），顯著或極顯著增加小鼠腸道PPs的面積（P＜0.05或P＜0.01）；此外，與5-Fu組比較，LP與5-Fu聯合應用能明顯促進小鼠腸道的推進功能（P＜0.05），升高GSH含量、CAT和GSH-Px活力（P＜0.01或P＜0.05），明顯減少TNF-α含量（P＜0.05或P＜0.01）；結腸病理組織切片顯示LP能明顯減輕5-Fu所致的小鼠結腸黏膜上皮杯狀細胞丟失、隱窩深度變淺及炎癥細胞浸潤。結論：LP能夠減輕5-Fu所致小鼠結腸黏膜炎，改善5-Fu所致的腸道傳輸功能失調，保護5-Fu對腸道的氧化損傷，其中真空脈動干燥樣品中提取的花粉多糖效果更好。

荷花粉多糖；5-氟尿嘧啶；腸黏膜屏障；氧化損傷；干燥方式

方小明， 田文禮， 張曉琳， 等. 荷花粉多糖顯著減輕氟尿嘧啶所致小鼠腸道黏膜屏障損傷［J］. 食品科學， 2016， 37（15）: 209-214. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615035. http://www.spkx.net.cn

FANG Xiaoming， TIAN Wenli， ZHANG Xiaolin， et al. Lotus bee pollen polysaccharides significantly relieve intestinal mucosal barrier damage in mice caused by fluorouracil［J］. Food Science， 2016， 37（15）: 209-214. （in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615035. http://www.spkx.net.cn

多糖作為一類天然生物大分子，其來源豐富、成本低廉、無毒，且藥理作用廣泛，如杏鮑菇多糖、靈芝多糖、茯苓多糖、香菇多糖等，它們在抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化等方面均取得了良好療效［1-5］，其中抗腫瘤和免疫增強作用是其研究的熱點，尤其與化療藥物合用的減毒增效作用受到了廣泛關注。蜂花粉多糖是蜂花粉重要的有效成分之一，蜂花粉中糖類總含量約為25%～40%，糖類種類齊全，包括單糖（如葡萄糖、果糖等）、低聚糖和多糖［6］，其中最具有功效開發前景的是花粉多糖［7-8］。大量研究表明，花粉多糖具有良好的免疫調節能力［9］、抗炎［10］及抗腫瘤活性［11］。鮮花粉含水量高達20%～30%，不宜貯存。干燥能夠使花粉含水率降低至安全貯藏水平，是蜂花粉加工的必要步驟，干燥后的花粉也是其商品化流通的基本形式［12］。花粉多糖屬于熱敏性物質，因此選擇適宜的干燥方法對于保證花粉品質至關重要。而目前不同干燥方式對花粉多糖活性的影響還未見報道。

化療是惡性腫瘤患者常用且有效的治療方法之一，但是化療藥物、特別是大劑量應用時常對機體正常生長旺盛的組織造成嚴重損傷。化療導致的腸黏膜屏障功能障礙在全身感染、炎性反應綜合征和多器官功能障礙綜合征的發病中有著重要影響［13］。5-氟尿嘧啶（5-f luorouracil，5-Fu）是臨床上用于治療消化道腫瘤和乳腺癌的基本藥物［14］。然而，臨床應用發現5-Fu具有較強的毒副作用，如引起胃腸道黏膜炎并造成機體免疫功能及造血功能低下等［15-16］。為觀察荷花粉多糖是否能夠改善5-Fu所致小鼠腸黏膜炎及具有腸道保護作用，本實驗采用不同干燥方式加工荷花粉，并提取多糖，通過腹腔注射5-Fu建立小鼠腸黏膜炎模型，測定荷花粉多糖對小鼠腸道推進作用、派氏集合淋巴結（Peyer’s patches，PPs）面積、PPs勻漿上清液中脂質過氧化指標、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平及結腸病理、炎癥相關指標的影響，探討不同干燥方式下荷花粉多糖對5-Fu所致小鼠腸黏膜炎的改善及腸道功能的保護作用，以及可能作用機制，為荷花粉多糖的加工及深入開發提供理論依據。

1　材料與方法

1.1動物、材料與試劑

無特定病原體（specifi c pathogen free，SPF）級雌性C57BL/6J小鼠，體質量（18±2） g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK（京）2012-0001。按嚙齒類動物飼養方法和條件飼養于SPF級動物房。

新鮮荷花粉，購于中國農業科學院蜜蜂研究所，初始濕基含水率為31%，置于冰柜（（-10±1）℃）中密封保存。

5-氟尿嘧啶注射液 上海旭東海普藥業有限公司；活性氧（reactive oxygen species，ROS）試劑盒、谷胱甘肽（glutathione，GSH）試劑盒、過氧化氫酶（catalase，CAT）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒 南京建成生物工程研究所；TNF-α酶聯免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒 武漢華美生物工程有限公司；乙醚、氯仿、正丁醇、冰醋酸、甲醛及其他試劑均為國產分析純。

1.2儀器與設備

真空脈動干燥機 中國農業大學工學院農產品加工技術與裝備實驗室自制；WD101-2型電熱鼓風干燥箱吳江萬達電熱設備有限公司；BCN-1360生物潔凈工作臺北京東聯哈爾儀器制造有限公司；5410二氧化碳培養箱美國Napco公司；MQX 200酶標儀 美國Bio-Tek公司；CKX 41熒光倒置顯微鏡 日本Olympus公司；Labofuge 400R離心機 德國Heraeus公司。

1.3方法

1.3.1荷花粉干燥及多糖提取

分別采用熱風干燥及真空脈動干燥方法處理新鮮荷花粉：熱風干燥溫度為60 ℃；脈動干燥溫度60 ℃，真空保持時間12 min，常壓保持時間3 min，兩種方法均需將花粉干燥至目標含水率5%（濕基）。干燥完成后將樣品封存于聚乙烯袋中，置于干燥皿中保存。

荷花粉多糖提取［17］流程為：荷花粉→乙醚脫脂→超聲熱水浸提→加入果膠酶水提→離心取上清液→殘渣重復浸提2 次→合并上清液→減壓濃縮→乙醇沉淀→沉淀加水復溶→Sevag法除蛋白→透析（除鹽及小分子雜質）→濃縮→冷凍干燥→荷花粉多糖。

1.3.2動物分組及給藥

健康雌性C57BL/6J小鼠32 只，隨機分為4 組，每組8 只：正常組、5-Fu組（25 mg/kg）、熱風LP組（熱風干燥LP 200 mg/kg+5-Fu 25 mg/kg）、脈動LP組（真空脈動干燥LP 200 mg/kg+5-Fu 25 mg/kg）組。正常組灌胃給予蒸餾水，20 mL/kg；LP組灌胃給藥，20 mL/kg；5-Fu組腹腔注射給藥，10 mL/kg，1 次/2 d。各組均連續給藥14 d。

1.3.3LP對小鼠腸道功能的影響

給藥最后一天，提前6 h禁食，正常飲水。末次給藥1.5 h后，給每只小鼠灌胃炭末混懸液（阿拉伯膠10%、活性炭5%）0.2 mL。灌胃后20 min頸椎脫臼處死小鼠，剖腹取小腸，測量炭末推進前端的位置及小腸總長度，按照下式計算炭末推進率。

收集從幽門下端至回盲部的全部小腸組織，肉眼目測觀察位于其腸系膜對側的PPs，記錄PPs個數并用尺測量計算其總面積。

剪取結腸，測量結腸長度，并將結腸部分組織置于10%甲醛中固定，進行組織病理切片觀察及免疫組化檢測。

1.3.4LP對小鼠相關生化指標的影響

剪取并稱取一定質量的1.3.3節中所述小腸外壁上隆起的PPs或結腸組織，按1∶9（m/m）加入生理鹽水，冰浴、充分勻漿， 4 ℃、3 000 r/min離心15 min，取上清液-80 ℃保存，按照試劑盒說明書操作要求測定相應指標。

1.4數據統計分析

采用SPSS 17.0統計軟件進行單因素方差分析，比較組間差異性，實驗數據用表示，P＜0.05或P＜0.01認為差異具有統計學意義。

2　結果與分析

2.1不同干燥方式提取的LP對小鼠小腸長度及推進功能的影響

表1　荷花粉多糖對5-Fu模型小鼠小腸長度及炭末推進率的影響TTaabbllee 11 EEffffeecctt ooff LLPP oonn ssmmaallll iinntteessttiinnaall lleennggtthh aanndd ccaarrbboonn--pprrooppeelllliinngg rate in model mice induced by 5-Fu

表1　荷花粉多糖對5-Fu模型小鼠小腸長度及炭末推進率的影響TTaabbllee 11 EEffffeecctt ooff LLPP oonn ssmmaallll iinntteessttiinnaall lleennggtthh aanndd ccaarrbboonn--pprrooppeelllliinngg rate in model mice induced by 5-Fu

注：*.與正常組相比，差異顯著（P＜0.05）；#. 與5-Fu組相比，差異顯著（P＜0.05）。下同。

組別小腸全長/cm炭末推進長度/cm炭末推進率/%正常組52.09± 2.0629.87±2.9757.34±4.65 5-Fu組48.58±1.8124.64±1.36*49.67±5.01*熱風LP組50.65±1.9730.45±3.6760.12±6.21#脈動LP組51.26±2.3531.24±3.1160.94±5.04#

如表1所示，與正常組比，各組小鼠的小腸總長度無明顯變化，但5-Fu組小鼠的炭末推進長度明顯低于正常組（P＜0.05）。與正常組相比，5-Fu組小鼠的小腸炭末推進率最低（49.67%），并具有顯著差異（P＜0.05）。而荷花粉多糖與5-Fu聯用后小鼠的小腸炭末推進率明顯升高，與5-Fu組相比差異均有統計學意義（P＜0.05）。

2.2不同干燥方式提取的LP對小鼠結腸長度及PPs面積的影響

圖1　荷花粉多糖對5-Fu模型小鼠結腸長度的影響（Fig. 1 Effect of LP on the length of colon in model mice induced by 5-Fu

如圖1所示，與正常組相比，5-Fu能顯著縮短小鼠結腸的長度（P＜0.05）。而與5-Fu組相比，聯用LP與5-Fu后，熱風LP組和脈動LP組小鼠的結腸長度顯著增加（P＜0.05）。

解剖過程中肉眼觀察小鼠腸道及相關淋巴組織中的PPs，發現正常組小鼠的小腸腸壁較厚、較有韌性，PPs數量雖不均一但較多，突出腸壁較高且有光澤。而5-Fu組小鼠的小腸腸壁變薄，在腸壁外可明顯觀察到腸內容物，腸壁缺乏彈性、易斷，PPs數量減少、直徑明顯減小，隆起不明顯，甚至部分小鼠的腸壁上無肉眼可見的PPs結。熱風LP組和脈動LP組小鼠的小腸腸壁厚度與正常組相比略薄，但仍存在一定彈性，PPs數量與正常組相比有所減少、直徑變小，但仍然突出腸壁。對PPs面積進行統計，結果見表2。5-Fu組小鼠腸PPs的面積明顯低于正常組，與正常組比較具有極顯著差異（P＜0.01），這表明化療藥物5-Fu抑制了小鼠腸道黏膜的免疫功能。而熱風LP組與脈動LP組小鼠的PPs面積均明顯高于5-Fu組，特別是脈動LP組，與5-Fu組相比差異達到極顯著水平（P＜0.01），這表明荷花粉多糖能夠減緩5-Fu對小鼠黏膜免疫功能的抑制。

表2　荷花粉多糖對5-Fu模型小鼠小腸PPs面積的影響TTaabbllee 22 EEffffeecctt ooff LLPP oonn ssuurrffaaccee aarreeaa ooff PPPPss iinn mmooddeell mmiiccee iinndduucceedd bbyy 5--FFuu

表2　荷花粉多糖對5-Fu模型小鼠小腸PPs面積的影響TTaabbllee 22 EEffffeecctt ooff LLPP oonn ssuurrffaaccee aarreeaa ooff PPPPss iinn mmooddeell mmiiccee iinndduucceedd bbyy 5--FFuu

注：**. 與正常組相比，差異極顯著（P＜0.01）；##. 與5-Fu組相比，差異極顯著（P＜0.01）。下同。

組別PPs個數PPs面積/m m2正常組15±442.19±12.06 5-Fu組9±218.58±7.81**熱風LP組11±327.65±5.97#脈動LP組12±332.26±6.35##

2.3不同干燥方式提取的LP對小鼠結腸病理組織學的影響

光學顯微鏡下觀察小鼠結腸組織，正常組小鼠結腸腸黏膜絨毛表面完整，固有層可見小血管、毛細血管、淋巴管；黏膜下層的疏松結締組織富有血管、淋巴管，肌層和漿膜層次清晰。與正常組相比，5-Fu組小鼠結腸腸黏膜表面不完整，上皮細胞排列不緊密， 杯狀細胞丟失嚴重，炎癥細胞浸潤達黏膜肌層。相比于單一使用5-Fu，聯合使用LP的熱風LP組和脈動LP組小鼠的結腸黏膜組織病變、上皮杯狀細胞丟失及炎癥細胞浸潤等現象均明顯減輕，結腸黏膜表面相對完整（圖2）。

圖2　小鼠結腸病理組織切片（蘇木精-伊紅，400×）Fig. 2 Histological images of mouse colonic samples stained with hematoxylin and eosin （HE， 40 ×）

2.4不同干燥方式提取的LP對小鼠PPs中脂質過氧化指標的影響

化療藥物可導致腸道黏膜發生氧化應激損傷，因此，測定小鼠腸道PPs中脂質過氧化指標即可表征損傷程度。如圖3所示，與正常組比較，5-Fu組小鼠PPs中的ROS含量顯著增加（P＜0.05），GSH含量、CAT和GSH-Px活力均顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），這表明5-Fu導致小鼠發生了明顯的脂質過氧化損傷；而與5-Fu組相比，脈動LP組小鼠PPs中的GSH含量顯著升高（P＜0.05），CAT和GSH-Px活力明顯升高（P＜0.01或P＜0.05）。熱風LP組小鼠PPs中的GSH-Px活力也明顯升高（P＜0.05）。以上結果表明，荷花粉多糖能夠降低小鼠PPs中過氧化物ROS含量，增加抗氧化物GSH含量和抗氧化物酶CAT和GSH-Px的活性，并且真空脈動的干燥方式能更好地保護花粉多糖的抗氧化功能。

圖3　荷花粉多糖對5-Fu模型小鼠PPs中脂質過氧化指標的影響Fig. 3 Effect of LP on ROS （A）， CAT （B）， GSH （C） and GSH-Px （D）levels in supernatant of PPs in model mice induced by 5-Fu

2.5不同干燥方式提取的LP對小鼠結腸組織中細胞因子TNF-α含量的影響

當機體組織受到外界刺激時，會產生一系列復雜的細胞生物學效應，包括應激信號的激活和傳遞、炎癥反應發生、各種細胞因子的釋放等。研究發現，當機體、組織發生炎癥時，p38 MAPK通路被過度激活，進而促進炎癥因子TNF-α、白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6等的合成、釋放，且炎癥因子釋放與損傷程度成正相關。因此，本研究檢測了小鼠結腸組織中細胞因子TNF-α的表達水平。如圖4所示，與正常組比較，5-Fu組小鼠結腸組織中的TNF-α含量極顯著增加（P＜0.01），表明5-Fu對小鼠造成了炎癥性損傷，這與臨床化療藥物對患者腸道造成的損傷癥狀機理一致；此外，與5-Fu組相比，聯用LP能夠明顯降低小鼠結腸組織中TNF-α的水平，特別是真空脈動干燥的荷花粉中提取的多糖，極顯著降低了小鼠結腸組織中TNF-α含量（P＜0.01）。以上結果表明，荷花粉多糖能夠降低小鼠體內TNF-α的釋放，進而對腸道黏膜起到保護作用，且真空脈動干燥技術能更好地保護多糖的這一活性。

圖4　荷花粉多糖對5-Fu模型小鼠結腸組織中細胞因子TNNFF--α含量的影響Fig. 4 Effect of LP on TNF-α in colon tissue of model mice induced by 5-Fu

3　討 論

腸道不僅是重要的消化器官，而且是人體最大的免疫器官，在正常生理條件下，腸黏膜存在較完整的屏障功能，主要由機械屏障、生物屏障、免疫屏障、化學屏障四部分組成，這4 個組成部分各自具有不同的結構、分子調控機制和生物學功能，并通過各自的信號通路有機地結合在一起，共同防御外來抗原物質對機體的侵襲。化療是惡性腫瘤治療的重要方法之一，化療藥物在殺傷腫瘤細胞的同時對正常的組織器官也有不同程度的影響，其中腸黏膜損傷正是某些抗癌藥物的毒性反應。5-Fu是治療消化道腫瘤和乳腺癌的基本藥物，但其有較嚴重的副作用，如引起骨髓抑制、皮炎、心臟毒性、腹瀉、肝損傷和黏膜損傷，其中黏膜屏障損傷是化療的主要毒副作用［18］。化療藥物對腸黏膜屏障的損傷主要包括：直接損傷腸黏膜，絨毛萎縮，吸收、傳遞功能降低，出現腹瀉；毛細血管組織缺血，釋放 大量氧自由基ROS，損傷 膜結構，機體循環被破壞、清除自由基能力降低［19］。化療藥物可導致細胞免疫和體液免疫功能的改變，影響CD4+、CD8+T淋巴細胞失調，造成腸黏膜免疫功能紊亂［20］。缺血、缺氧引起的氧化應激反應和細胞凋亡均可促進TNF-α、IL-6、IL-8等炎性介質的分泌釋放，引發炎癥反應，從而導致腸道菌群失調、腸動力障礙等病理性改變。研究發現，5-Fu可通過p53機制引起大腸黏膜細胞凋亡［21-22］。胃腸黏膜損傷是一種嚴重的化療副作用，不僅增加患者的身心痛苦，降低患者生活質量，甚至使患者死亡率增加。

本研究結果顯示，荷花粉多糖能改善5-Fu所致的小鼠小腸推進功能降低；減緩5-Fu所致的小鼠結腸縮短；明顯減輕5-Fu所致結腸黏膜組織病變、上皮杯狀細胞丟失及炎癥細胞浸潤等病理損傷，使結腸黏膜表面相對完整；這說明荷花粉多糖能夠保護小鼠腸道黏膜，促進黏液分泌，增加小腸定向蠕動，提高腸道屏障的機械功能；荷花粉多糖還能增強化療小鼠的抗氧化能力，這表明荷花粉多糖對化療藥物5-Fu所致的氧化應激損傷等腸黏膜屏障障礙起到了良好的保護作用，這可能與花粉多糖的抗氧化能力有關，前人的研究也表明花粉多糖有較強的清除羥自由基效果［23］。TNF-α是最重要的炎癥因子，具有廣泛的生物學效應。TNF-α可通過激活炎癥細胞，上調黏附因子、NO和氧自由基等損害組織，引起炎癥反應［24］，而荷花粉多糖可降低TNF-α的釋放，進一步抑制5-Fu所致的腸道黏膜氧化應激損傷。這些結果充分說明荷花粉多糖能夠促進小鼠的腸道蠕動，減輕化療藥物所致的腸道黏膜免疫功能低下及病理損傷和炎癥的發生，調節機體腸道免疫功能，起到保護腸道的作用。此外，研究結果還表明，干燥方式對荷花粉多糖功效的發揮產生了不同影響，其中真空脈動干燥能夠更好地保護荷花粉多糖的活性。這可能是因為在真空脈動干燥的條件下，干燥溫度更低，水分遷移更為均勻，使得花粉多糖的熱敏性基團得到保護。

綜上所述，荷花粉多糖能夠改善臨床常用化療藥物5-Fu造成的腸道不良反應，拮抗小鼠腸道傳輸功能失調；減輕5-Fu所致的腸道黏膜系統炎癥及腸道形態學損傷，說明荷花粉多糖在化療聯合用藥、提高機體免疫功能、改善患者生活質量等方面具有積極意義。

［1］ 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）［M］. 北京: 化學工業出版社， 2005: 166.

［2］ HAMURO J， MAEDA Y Y， ARAI Y， et al. The significance of the higher structure of the polysaccharides lentinan and pachymaran with regard to their antitumour activity［J］. Archives of Dermatology， 2007，24（5）: 1623-1626. DOI:10.1016/0009-2797（71）90026-3.

［3］ WANG Y， ZHANG L. Chain conformation of carboxymethylated derivatives of （1→3）-β-D-glucan from Poria cocos sclerotium［J］. Carbohydrate Polymers， 2006， 65（4）: 504-509. DOI:10.1016/ j.carbpol.2006.02.014.

［4］ 陳春霞. 羧甲基茯苓多糖的抗腫瘤活性與免疫效應［J］. 食用菌學報，2001， 8（3）: 39-44. DOI:10.3969/j.issn.1005-9873.2001.03.008.

［5］ 張秀軍， 徐儉， 林志彬. 羧甲基茯苓多糖對小鼠免疫功能的影響［J］. 中國藥學雜志， 2002， 37（12）: 35-38. DOI:10.3321/ j.issn:1001-2494.2002.12.011.

［6］ 任乃艷， 盧榮， 程妮， 等. 蜂花粉活性成分的研究進展［J］. 中國蜂業中旬刊（學術）， 2011， 62（10）: 76-78.

［7］ LINSKENS H F， JORDE W. Pollen as food and medicine: a review［J］. Economic Botany， 1997， 51（1）: 78-86. DOI:10.1007/BF02910407.

［8］ SILVA T M S， CAMARA C A， LINS A C D S， et al. Chemical composition and free radical scavenging activity of pollen loads from stingless bee Melipona subnitida Ducke［J］. Journal of Food Composition & Analysis， 2006， 19（6/7）: 507-511. DOI:10.1016/ j.jfca.2005.12.011.

［9］ 劉銘， 李娜娜， 耿越. 硫酸酯化馬尾松花粉多糖對小鼠脾臟B淋巴細胞免疫調節作用的研究［J］. 中國細胞生物學學報， 2014（4）: 461-469. DOI:10.11844/cjcb.2014.04.0337.

［10］ 平舜， 王凱， 張江臨， 等. 茶蜂花粉提取物BPE對LPS誘導的Raw 264.7細胞的體外抗炎癥作用［J］. 食品與生物技術學報， 2015，34（12）: 1302-1307. DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2015.12.011.

［11］ 楊曉萍， 羅祖友， 吳謀成. 油菜花粉多糖的制備及其對荷瘤小鼠的影響［J］. 食品科學， 2005， 26（12）: 202-204. DOI:10.3321/ j.issn:1002-6630.2005.12.048.

［12］ 方小明， 田文禮， 高凌宇， 等. 蜂花粉真空脈動干燥方法和使用該方法制得的蜂花粉: CN102488123A［P］. 2012-06-13.

［13］ 蒙燁， 黃永坤. 化療藥物對腸黏膜屏障的損傷及其防治［J］. 醫學綜述， 2012（9）: 1325-1327. DOI:10.3969/j.issn.1006-2084.2012.09.017.

［14］ GRADISHAR W J， VOKES E E. 5-Fluorouracil cardiotoxicity: a critical review［J］. Annals of Oncology Offi cial Journal of the European Society for Medical Oncology， 1990， 1（6）: 409-414.

［15］ ABOU-ZEID N R A. Ameliorative effect of vitamin C against 5-fuorouracil-induced hepatotoxicity in mice: a light and electron microscope study［J］. Journal of Basic & Applied Zoology， 2014， 67（4）: 109-118. DOI:10.1016/j.jobaz.2013.12.004.

［16］ INNOCENTI F， DANESI R， BOCCI G， et al. 5-Fluorouracil catabolism to 5-fluoro-5，6-dihydrouracil is reduced by acute liver impairment in mice［J］. To xicology & Applied Pharmacology， 2005，203（2）: 106-113. DOI:10.1016/j.taap.2004.08.018.

［17］ 劉潔， 繆曉青. 響應面分析法優化蓮花蜂花粉多糖提取工藝研究［J］.食品科學， 2010， 31（14）: 101-105.

［18］ TSUYUKI S， KAWAGUCHI K， KAWATA Y， et al. Usefulness of antimycotic agents （it raconazole） in chemotherapy-induced mucositis of breast cancer patients［J］. Gan to Kagaku Ryoho Cancer & Chemotherapy， 2012， 39（9）: 1369-1373.

［19］ 徐智媛， 堯穎， 程宇， 等. 急性肝衰竭大鼠血漿D-乳酸二胺氧化酶和內毒素的變化及其意義［J］. 胃腸病學和肝病學雜志， 2011， 20（8）: 736-738. DOI:10.3969/j.issn.1006-5709.2011.08.014.

［20］ 劉端勇， 黃敏芳， 徐榮， 等. 黃芪多糖對結腸炎大鼠小腸PP結中T淋巴細胞亞群的調節作用［J］. 中國藥理學通報， 2015（9）: 1328-1329. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.09.029.

［21］ SHARIF O， BOLSHAKOV V N， RAINES S， et al. Transcriptional profiling of the LPS induced NF［J］. BMC Immunology， 2007， 8（1）: 194-194. DOI:10.1186/1471-2172-8-1.

［22］ 張安平， 劉寶華， 張連陽， 等. p53抑制劑PFT-α對熱化療誘導腸上皮細胞凋亡的保護作用［J］. 世界華人消化雜志， 2004， 12（10）: 2353-2355. DOI:10.3969/j.issn.1009-3079.2004.10.021.

［23］ 范三紅， 周立波. 油松花粉多糖提取及其清除羥自由基活性研究［J］. 食品科學， 2008， 29（12）: 274-277. DOI:10.3321/ j.issn:1002-6630.2008.12.059.

［24］ 王琳琳， 韋巧珍， 連淑君， 等. 谷氨酰胺對內毒素血癥幼鼠腸道核因子-B活化及腫瘤壞死因子-白介素-6表達的影響［J］. 實用兒科臨床雜志， 2010， 10（19）: 1479-1481.

Lotus Bee Pollen Polysaccharides Significantly Relieve Intestinal Mucosal Barrier Damage in Mice Caused by Fluorouracil

FANG Xiaoming1，2， TIAN Wenli2， ZHANG Xiaolin1， PENG Wenjun2， XIAO Hongwei1， GAO Lingyu2， WANG Canhong3， GAO Zhenjiang1，*
（1. College of Engineering， China Agricultur al University， Beijing 100 083， China； 2. Institute of Apicultural Research， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100093， China； 3. Institute of Medicinal Plant Development， Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College， Beijing 100193， China）

Objective: To investigate the protective effects of polysaccharides （LP） extracted from lotus bee pollen dried by different drying methods on intestinal mucosal inflammation and intestinal barrier dysfunctions in mice induced b y 5-fl uorouracil （5-Fu）. Methods: Mouse models of intestinal mucosal infl ammation were established by induction with 5-Fu and the model mice were grouped randomly and subjected to drug administration. The carbon-propelling rate was tested，and colon length and Peyer’s patches （PPs） area were measured. The colon tissue was stained with hematoxylin-eosin （HE）for histological section observation. Reactive oxygen species （ROS） and glutathione （GSH） contents， and catalase （CAT） and GSH-Px activities in the supernatant of PPs homogenate were evaluated by biochemical assays. Tumor necrosis factor-α （TNF-α）in the supernatant of colon tissue homogenate was determined through ELISA. Results: Compared with the normal group，intraperitoneal injection of 5-Fu to mice signifi cantly inhibited small intestinal transit （P ＜ 0.05）. LP extracted from lotus bee pollen dried by hot air or vacuum pulsed drying improved colon shortening caused by 5-Fu （P ＜ 0.05） and resulted in a signifi cant or highly signifi cant increase of PPs area （P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01）. Moreover， compared with the 5-Fu-induced model group， LP combined with5-Fu could signifi cantly promote intestinal transit （P ＜ 0.05）， increase GSH content， and CAT and GSH-Px activities （P ＜ 0.01 or P ＜ 0.05）， and decrease obviously TNF-α contents （P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01）. HE staining results showed that LP could signifi cantly reduce the loss of colonic mucosa epithelium goblet cells， infl ammatory cell infi ltration and more shallow crypt depth induced by 5-Fu. Conclusion: LP could relieve intestinal mucosal damage， improve intestinal transit dysfunction and protect against intestinal oxidative damage in mice induced by 5-Fu. The polysaccharides extracted from lotus bee pollen subjected to vacuum pulsed dry ing exhibited better activity than the polysaccharides extracted from hot air dried lotus bee pollen.

lotus bee pollen polysaccharide； 5-fl uorouracil； intestinal mucosal barrier； oxida tive damage； drying method

2016-03-17

國家自然科學基金青年科學基金項目（31501548）；國家現代農業（蜜蜂）產業技術體系建設專項（NCYTI-43-KXJ17）；中國農業科學院科技創新工程項目（CAAS-ASTIP-2015-IAR）

方小明（1983—），男，博士研究生，主要從事蜂產品加工與功能評價研究。E-mail：153886891@qq.com

高振江（1958—），男，教授，博士，主要從事農產品（食品）加工技術與裝備研究。E-mail：zjgao@cau.edu.cn

10.7506/spkx1002-6630-201615035

TS201

A

1002-6630（2016）15-0209-06

引文格式：