玉林437例高危型人乳頭瘤病毒感染與宮頸上皮內瘤變的分析

李繼慧黎華輝

·論著·

玉林437例高危型人乳頭瘤病毒感染與宮頸上皮內瘤變的分析

李繼慧★黎華輝

目的調查玉林地區婦女生殖道高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染與宮頸上皮內瘤病變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）的關系。方法應用導流雜交基因芯片技術（HybriMax），對婦科門診就診的3 317例有性生活史的婦女，采集宮頸脫落細胞進行HPV分型檢測，對檢查HPV高危型別陽性者進行宮頸活組織檢查。結果自2014年7月至2015年6月期間，共檢測我院就診病例3 317例，檢出高危型HPV感染者694例，陽性率為20.92％。對437例進行宮頸活組織檢查，CIN 26例，占5.95％（26/437），其中CINⅡ～Ⅲ12例，占2.74％（12/437）。結論玉林地區婦女高危型HPV感染率及高危型HPV感染者宮頸病變檢出率均較高，本地區婦女宮頸上皮內瘤病變常見的高危型HPV類型為HPV16、52、58、18、33。

人乳頭瘤病毒；宮頸上皮內瘤病變；導流雜交分型技術

宮頸癌是世界范圍內最常見的婦科惡性腫瘤之一，其發病率在發展中國家尤為明顯。已有明確的證據證明，持續的高危型別人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宮頸癌發生及進展的最主要因素［1］。目前，根據世界衛生組織（World Health Organization，WHO）的數據顯示，至少有13種高危型別的HPV可以導致宮頸癌［2］。相比其它類型癌癥，宮頸癌的篩查具有極高的有效性。目前為止，全世界仍然有超過50萬女性受到宮頸癌的危害。在發展中國家，宮頸癌仍然是最為常見的發病率和死亡率較高的婦科惡性腫瘤之一［3］。因此，針對女性宮頸癌的預防、篩查及監控工作就顯得尤為關鍵。然而，值得關注的是經濟文化較為落后的地區以及農村人口中由宮頸癌引起的高死亡率尤為突出，所以將宮頸癌篩查的研究立足于偏遠地區人群就顯示出極為重要的作用［3-4］。為了解本地區婦女高危型HPV感染與宮頸上皮內瘤變的相關性，我們應用導流雜交基因芯片技術（HybriMax），針對婦科門診就診婦女進行了HPV感染分型的檢測，共3 317例，并將高危型HPV感染者進行宮頸活組織檢查。通過篩查分析不同高危HPV型別的危害性，進一步指導玉林地區HPV檢測及宮頸癌篩查的臨床檢測及診斷。現將結果整理報道如下。

1 材料方法

1.1 臨床樣本

樣本選取自2014年7月至2015年6月期間，醫院婦科門診就診有性生活史的婦女共計3 317例，年齡19～63歲，平均年齡40.9歲，自愿接受HPV基因分型檢測。6個月后對HPV高危型別陽性者進行回訪，其中437名婦女愿意接受在陰道鏡下定點取宮頸活體組織進行病理學檢查，以確定宮頸上皮內瘤病變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）的程度，并對CIN陽性患者再次進行HPV基因檢測。

1.2 HPV基因分型檢測

1.2.1 儀器與試劑

HybriMax醫用核酸分子快速雜交儀HHM-2型（潮州凱普生物科技股份有限公司）、人類乳頭瘤狀病毒基因分型檢測試劑盒（HPV-21分型檢測）（潮州凱普生物化學股份有限公司）；DNA擴增儀（Life Express）（杭州博日科技有限公司）。

1.2.2 樣本采集

窺器暴露宮頸，使用無菌棉簽擦去宮頸口分泌物，利用潮州凱普生物化學有限公司提供的專用毛刷于宮頸鱗柱狀交界處旋轉3～5圈，取得宮頸管脫落細胞，將取有標本的毛刷放置于對應標號的專用的細胞保存液試管中，4℃保存，2周內完成檢測。

1.2.3 檢測方法

提取樣本DNA后，進行PCR擴增，利用核酸分子快速導流雜交技術，使目的產物定向地穿過固定有特異標記探針的低密度基因芯片薄膜上，從而發生快速雜交，通過標記顯色，根據芯片上HPV分型分布相應點進行判斷其感染亞型。實驗同時檢測21種HPV基因型，其中13種高危型（high-risk types，HR-HPV），包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，5種低危型（lowrisk types，LR-HPV），包括6、11、42、43、44及3種中國人群常見亞型（53、66、CP8304）。具體操作步驟按試劑盒及儀器使用說明進行。

1.3 統計學方法

本報道應用SSPS 17.0統計軟件，采用χ2檢驗對數據進行統計分析。

2 結果

2.1 HPV亞型的感染情況

利用低密度芯片（圖1）快速導流雜交的方法，本報道3 317例樣本中，HPV陽性率為26.89％（892/ 3 317），其中高危型HPV陽性率為20.92％（694/ 3 317）。高危型HPV各亞型檢出情況，見表1。

上述HPV高危型別陽性病例中，有437例高危型別回訪患者進行了病理學檢查及HPV核酸檢測，其中CIN陽性病例共26例，CIN發生率為5.95％（26/437），其中CINⅡ～Ⅲ發生率為2.74％（12/437）。同時，CINⅠ的HPV陽性感染率為35.71％（5/14），CINⅡ～Ⅲ的HPV陽性感染率為83.33％（10/12），見表2。有宮頸上皮內瘤變的病例檢出的前6種高危型HPV基因型為52、16、58、18、68、33。利用R×C列聯表分析（表3），采用χ2檢驗對數據進行統計分析，結果顯示P=0.02，即CIN與高危型HPV感染密切相關。

表1 高危型HPV各亞型檢出分布Table 1 Distribution of high-risk HPV detection

表2 26例宮頸上皮內瘤變病例HPV感染分布Table 2 Distribution of HPV infection in 26 patients with CIN

表3 χ2檢驗統計分析Table 3χ2teststatistics analysis

2.2 HPV復合感染情況

在本次調查中，HPV復合感染（一個人同時感染2個或以上的型別，可以是同時感染高危型，也可以是高低危型別同時感染），高危型多重感染占HPV陽性婦女的19.73％（176/892），占被篩查婦女的5.31％。在合并感染中，常見的復合感染類型有HPV52、16、58，68、18、33之間的復合感染及與其它亞型的復合感染（表1）。

2.3 高危型HPV感染與年齡的關系

本次調查對象的年齡分布為19～63歲，高危型HPV感染率在35歲以下及45歲以上婦女中較高，分別為23.63％和21.53％，高危型HPV陽性率在19～35歲、36～45歲以及46～63歲年齡組間比較，見表4。

表4 高危型HPV感染在不同年齡段婦女中的分布Table 4 Distribution of high-risk HPV infection in differentage periods

3 討論

越來越多的證據已經證明，持續的高危型HPV感染會導致惡性宮頸癌癥的發生［1］。因此，HPV檢測是宮頸癌篩查中必不可少的關鍵環節。然而，在我國開展的宮頸癌篩查數據顯示，宮頸病變的患病率在2.5％～5.9％，表明在中國宮頸病變仍然是嚴重的生殖健康問題［4-13］。根據我國2015年公布數據顯示，全國約有2 814 000例死于癌癥，其中女性1 004 400例，約占總死亡病例36％。女性宮頸癌發病人數為98 900例，占女性癌癥發病總人數5.6％，死亡病例30 500例，占女性癌癥死亡總人數0.3％［4］。從橫向的不同地理區域進行分析，華北地區女性宮頸癌發病人數為16 700例，死亡人數6 100例，死亡率約36％；東北地區發病人數10 500例，死亡人數2 400例，死亡率約23％；華東地區發病人數27 600例，死亡人數6 700例，死亡率約24％；華中地區發病人數17 400例，死亡人數4 100例，死亡率約24％；華南地區發病人數8 100例，死亡人數2 300例，死亡率約28％；西南地區發病人數11 300例，死亡人數6 200例，死亡率約55％；西北地區發病人數7 300例，死亡人數2 600例，死亡率約36％。從縱向的不同行政區域來分析，城鎮地區宮頸癌發病人數為53 200例，死亡人數13 600例，死亡率約26％；農村地區為45 700例，死亡人數16 900例，死亡率約40％［4］。以上數據指出，城鎮地區宮頸癌發病率明顯高于農村人口，但死亡率則顯著低于農村地區。然而，值得關注的是經濟文化較為落后的西南地區以及農村人口中由宮頸癌引起的高死亡率尤為突出，所以將宮頸癌篩查的研究立足于農村人群就顯示出極為重要的作用。

過去的研究指出，HPV16與HPV18型別感染在宮頸癌患者中最常見［1-3］。最近的研究則發現，引起宮頸病變包括宮頸癌的高危HPV感染型別在不同地區之間有所差異［7-8］。有文獻指出，相較于HPV16與18型別的感染，在亞洲國家HPV52與58型別感染更常見，在上海有42％的宮頸癌標本存在HPV52與58型別感染［8］。另一個來自北京的多中心研究中報道，HPV16、58、33、56及31型別感染在宮頸病變中最常見［11］。一份對廣東省潮州市13 750例女性進行HPV篩查的研究發現，感染型別按感染率高低依次為HPV52、16、58、68及33，感染率分別為28％、15％、11％、8％及7％［7］。在華東區域的研究中顯示，HPV16、58、33、52及66在CINⅠ患者中檢出率最高。而在中國西南地區，HPV16、58、18、52及33型別的感染在宮頸癌病例中最普遍［6］。綜上，可以明顯發現HPV16和18等型別為中國最常見的高危HPV感染型別。此外，越來越多的研究也表明，中國高危HPV感染分布具有明顯的區域性，與生活習慣、年齡、文化水平等因素緊密相關。

本報道中，玉林地區3 317例婦女中宮頸高危型HPV感染率為20.92％，與廣東地區20.3％的水平［14］基本一致，略低于廣西其他地區23.78％［15］。本報道中高危型HPV陽性標本中，病理學診斷CINⅡ～Ⅲ檢出率為2.74％，相較北京地區2.19％的水平明顯增高［16］。HPV52、16和58型是玉林地區人群最主要的3個高危型HPV亞型，其在高危型HPV陽性人群中的百分率依次為5.49％、4.55％和3.04％，其次是18型1.60％、68型1.36％，33型1.18％。此外，高危型別HPV感染與宮頸上皮內瘤變，特別是CINⅡ及以上呈高度相關，此結果與以往報道基本一致［7-15］（表2）。有宮頸上皮內瘤的病例檢出的前3種高危型HPV基因型為52、16、58，應重視這些感染型別的防治。

本次調查發現高危型HPV陽性人群中176例發生多重感染，高危型多重感染占HPV陽性婦女的19.73％。有報道人群中多種HPV復合感染占總HPV感染人數的20％～30％，和單個HPV感染相比，增加了發生癌前病變的風險［17］。多種HPV復合感染可以是同時感染不同的HPV類型，也有可能是多次感染導致［17］。

綜上所述，玉林地區高危型HPV檢出率相比發達地區明顯較高，需要增強科普婦女健康意識與宮頸癌篩查的重要性。其次，感染型別分布與國內其它地區明顯不同，其中52、58型別檢出率較高，需要對上述型別加以重視與防治。

［1］Arbyn M，Castellsague X，de Sanjose S，etal.Worldwide burden of cervical cancer in 2008［J］.Annu Oncol，2011，22（12）：2675-2686.

［2］Torre LA，Bray F，Siegel RL，etal.Global cancer statistics，2012［J］.CA Cancer JClin，2015，65（2）：87-108.

［3］Banerjee J，M ishra N，Dhas Y.Metagenomics：A new horizon in cancer research［J］.Meta Gene，2015，5：84-89.

［4］Chen WQ，Zheng RS，Baade PD，etal.Cancer Statistics in China，2015［J］.CA Cancer JClin，2016，66（2）：115-132.

［5］王玉豐，林玲，劉春雨，等.三亞地區婦女人乳頭瘤病毒感染的分子流行病學調查［J］.檢驗醫學，2012，27（8）：628-630.

［6］孫曄.586例宮頸疾病患者HPV檢測結果分析［J］.國際檢驗醫學雜志，2015，36（12）：1777-1779

［7］李智敏，羅喜平，毛玲芝，等.廣東省潮州市13750例婦女宮頸人乳頭瘤病毒感染狀況及基因型分析［J］.中華婦幼臨床醫學雜志，2012，8（4）：357-360.

［8］Zhang R，Shi TY，Ren Y，et al.Risk factors for human papillomavirus infection in Shanghai suburbs：A population-based study with 10000 women［J］.JClin Virol，2013，58（1）：144-148.

［9］Hou R，Xu CY，Zhang SW，et al.Distribution of human papillomavirus genotype and cervical neoplasia among women with abnormal cytology in Beijing，China［J］.Int JGynaecol Obstet，2012，119（3）：257-261.［10］Ding X，Liu Z，Su J，et al.Human papillomavirus type-specific prevalence in women referred for colposcopic examination in Beijing［J］.JMed Virol，2014，86（11）：1937-1943.

［11］LiCD，Wu MH，Wang JD，et al.A population-based study on the risks of cervical lesion and human papillomavirus infection among women in beijing，people’s republic of China［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2010，19（10）：2655-2664.

［12］Wang L，Dai SZ，Chu HJ，etal.Intergration sites and genotype distributions of human papillomavirus in cervical intraepithelial neoplasia［J］.Asian Pac JCancer Prev，2013，14（6）：3837-3841.

［13］Chen Q，Xie LX，Qing ZR，etal.Epidemiologic characterization of human papillomavirus infection in rural Chaozhou，eastern Guangdong province of China［J］. Plosone，2012，7（2）：e32149.

［14］李亞紅，李楠，張珍，等.廣東地區2782例婦女高危型人乳頭瘤病毒感染陽性率和年齡段的關系［J］.分子診斷和治療雜志，2010，2（2）：112-115.

［15］劉繼秀，莫云，白華，等.廣西4874例婦女高危型人乳頭瘤病毒感染的流行病學現狀及其與宮頸上皮內瘤變的關系［J］.實用婦產科雜志，2011，8（27）：596-597.

［16］張為遠，武明輝，張淞文，等.2007～2008年北京地區25～54歲已婚婦女宮頸上皮內瘤變流行病學現狀調查［J］.中華婦產科雜志，2010，45（3）：892-897.

［17］李繼慧，羅宇迪，張炬光，等.3150例婦女宮頸乳頭狀瘤病毒感染的調查查分析［J］.廣西醫學，2014，5（36）：677-679.

Investigation of cervical intraepithelial neoplasia in 437 high-risk human papilloma virus infected patients from Yulin

Li Jihui★，LiHuahui
（Yulin Maternal and Child Care Service Center，Yulin，Guangxi，China，537000）

Objective To investigate the relationships between women high-risk human papilloma virus（HPV）infection and cervical intraepithelial neoplasia（CIN）in Yulin.Methods A total of 3 317 outpatient women with sexual histories were checked for HPV genotyping via DNA flow-through hybridization genotyping technique（HybriMax），and then cervical biopsy had was performed among the women with high-risk HPV infection.Results 694 high-risk HPV infections were detected out of 3 317 patients from July 2014 to June 2015，and the positive HPV rate was 20.92％.The cervical biopsy was performed on 437 patients and the proportion of CIN was5.95％（26/437），including 12 patients with CINⅡ～Ⅲ（2.74％）.Conclusion The rate of high-risk HPV infection and proportion of CIN among high-risk HPV infector were higher，and general types of high-risk HPV were HPV16，52，58，18，33 in Yulin district.

Human papilloma virus；Cervical intraepithelial neoplasi；Hybri Max

玉林市婦幼保健院，廣西，玉林537000

★通訊作者：李繼慧，E-mail：ljhhlc@126.com