TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫組化方法檢測對上氣道咳嗽綜合征的診斷價值

石曉嵐

(西安市兒童醫院，陜西 西安　710003)

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TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫組化方法檢測對上氣道咳嗽綜合征的診斷價值

石曉嵐

(西安市兒童醫院，陜西 西安710003)

目的：探討瞬時受體電位香草酸受體1(transient receptor potential vanniloid 1,TRPV1)及轉化生長因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)的免疫酶聯吸附試驗(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)及免疫組化方法檢測對兒科上氣道咳嗽綜合征(upper airway cough syndrome,UACS)的診斷價值。方法：94例UACS患兒作為試驗組，另選擇同一時期的92例腺體樣肥大，但無UACS的患兒作為對照組。采集兩組患兒血清進行TRPV1及TGF-β2的ELISA測定，采集患兒腺樣體組織進行TRPV1及TGF-β2的免疫組化檢測，對檢測結果進行對照分析。結果：UACS組患兒ELISA檢測的TRPV1和TGF-β2值均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(均P<0.001)；UACS組患兒免疫組化檢測的TRPV1、TGF-β2陽性率均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(P=0.018，0.001)；TRPV1和TGF-β2的免疫組化檢測方法的敏感度均顯著干預ELASA，差異具有統計學意義(均P<0.001),TRPV1和TGF-β2的ELASA檢測的特異度均顯著高于免疫組化檢測，差異具有統計學意義(均P<0.05)。結論：TRPV1及TGF-β2的升高與UACS的發病可能有關，TRPV1和TGF-β2的免疫組化檢測對UACS診斷的敏感性較高，而TRPV1和TGF-β2的 ELASA檢測對UACS診斷的特異性較高，聯合應用ELISA及免疫組化檢測UACS可疑病例，有助于提高UACS患者診斷的準確性，降低漏診、誤診率。

瞬時受體電位香草酸受體1；轉化生長因子β2；免疫酶聯吸附試驗；免疫組化；上氣道咳嗽綜合征

上氣道咳嗽綜合征(upper airway cough syndrome,UACS)是指由上氣道各種病因引起的鼻腔或鼻竇炎性分泌物倒流入鼻后或咽部、甚至反流入聲門或氣管，直接或間接刺激咽部咳嗽感受器而導致的以慢性咳嗽、咽部異物感等為主要表現的一系列臨床綜合征[1]。引起UACS的基礎疾病復雜多樣，包括過敏性鼻炎、感染后鼻炎、細菌性鼻竇炎、過敏性真菌性鼻竇炎等多種鼻部疾病以及變應性咽炎、慢性扁桃體炎等多種咽部疾病，且大部分UACS患者是多種病因聯合致病，從而導致UACS的漏診、誤診率極高[2]。目前，UACS的發病機制尚未明確，但多項研究結果顯示，UACS患兒的瞬時受體電位香草酸受體1(transient receptor potential vanniloid 1,TRPV1)及轉化生長因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)等指標與正常同齡幼兒存在一定差異，而這種差異是否能成為UACS的診斷依據目前仍處于研究階段[3]。當前UACS的臨床診斷主要依靠患者病史、癥狀、體征等臨床資料等，缺乏較為客觀且具有特異性的輔助檢查結果支持[4]。Narula等[5]發現，采用免疫酶聯吸附試驗(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)及免疫組化法檢測患兒的TRPV1以及TGF-β2可有效提高對UACS患兒診斷的靈敏度和特異度。本次研究以此為依據，采用對ELISA及免疫組化法檢測94例UACS患兒的TRPV1以及TGF-β2，探討其對UACS的診斷價值。以下為本次研究的主要內容。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選擇2013年1月至2015年12月在我院住院治療的94例UACS患兒作為研究對象，其中男性62例，女性32例，年齡3～8歲,平均年齡(4.15±1.32)歲，UACS患兒選擇標準：(1)患者的病史、臨床癥狀及體征均符合UACS相關診斷標準[6]；(2)電子鼻咽鏡檢查均可見鼻咽部炎性分泌物；(3)咽后壁淋巴濾泡增生明顯，呈“鵝卵石”樣外觀，同時可見炎性分泌物自鼻咽部后流或有分泌物黏附；(4)經對癥治療后可見咳嗽明顯好轉。患兒排除標準：(1)各種急性、亞急性咳嗽以及與支原體、衣原體、百日咳等相關的咳嗽；(2)合并有心、肺、肝、腎功能障礙以及其他全身性系統疾病的患兒；(3)其他呼吸系統疾病引發的慢性咳嗽者。另選于同一時期在我院住院治療的腺體樣肥大，但無UACS的92例患兒作為對照組，其中男性62例，女性30例，年齡3～7歲，平均年齡(4.07±1.26)歲。參與本研究的所有患兒監護人均已被告知本研究的相關內容，自愿參與本研究并已簽署相關知情同意書。兩組患兒在性別、年齡等一般資料的比較差異均無統計學意義(均P>0.05)，資料具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1兩組患兒均行低溫等離子射頻腺樣體消融術術前采集血清進行TRPV1及TGF-β2的ELISA測定，術中采集腺樣體組織進行TRPV1及TGF-β2的免疫組化檢驗。

1.2.2ELISA 檢測方法術前取患兒的不抗凝全血，離心后留取血清，凍存于-20 ℃待測。應用ELISA試劑盒(江蘇寶萊生物科技有限公司，F26241-A)檢測患兒血清中TRPV1和 TGF-β2水平[7]。以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標)，OD值為縱坐標(普通坐標)，在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數即為樣品的實際濃度。本研究中TRPV1及TGF-β2的r值分別為0.986和0.992。

1.2.3免疫組化檢測方法術中取患兒腺樣體組織，經10%甲醛溶液固定及石蠟包埋后，3 μm厚度連續切片，行TRPV1和TGF-β2的免疫組化染色(一抗和二抗，杭州赫貝科技有限公司，PB0334，BM1637)，鏡下觀察明顯被染成黃色/棕黃色的細胞即為陽性細胞。根據顯微鏡視野下陽性細胞的分布情況劃分等級，其中等級“-”(視野下陽性細胞幾乎不可見)、“+”(視野下可見局灶性分布陽性細胞，所占總細胞比例低于30%)、“++”(陽性細胞所占總細胞比例介于30%～60%之間)、“+++”(視野下可見彌漫性分布陽性細胞，所占總細胞比例大于60%)。將等級“-”和“+”歸為陰性結果，等級“++”和“+++”歸為陽性結果[8]。

1.3觀察指標

(1)比較兩組患兒TRPV1和TGF-β2的ELISA及免疫組化檢測結果；(2)兩組患兒TRPV1和TGF-β2的ELISA陽性檢出率及免疫組化陽性檢出率。

1.4統計學分析

2　結果

2.1兩組患兒TRPV1和TGF-β2的ELISA檢測結果比較

UACS組患兒ELISA檢測的TRPV1和TGF-β2值均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(均P<0.001)，見表1。

組別nTRPV1(pg/mL)TGF-β2(ng/L)UACS組9415.14±3.76153.52±3.14對照組926.41±1.81104.05±1.97t值-20.106128.390P值-<0.001<0.001

2.2兩組患兒TRPV1和TGF-β2的免疫組化檢測結果比較

UACS組患兒免疫組化檢測的TRPV1、TGF-β2陽性率均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(均P<0.001)，見表2。

表2　兩組患兒TRPV1和TGF-β2的免疫組化檢測結果比較

2.3兩組患兒TRPV1和TGF-β2的ELISA及免疫組化陽性檢出率比較

TRPV1和TGF-β2的免疫組化檢測方法的敏感度均顯著干預ELASA，差異具有統計學意義(χ2=43.843，13.791，均P<0.001),TRPV1和TGF-β2的 ELASA檢測的特異度均顯著高于免疫組化檢測，差異具有統計學意義(χ2=45.316，4.997，均P<0.05)，見表3和圖1。

表3　兩組患兒TRPV1和TGF-β2的ELISA及免疫組化陽性檢出率比較

3　討論

UACS是指上氣道各種病因引起的鼻腔或鼻竇炎性分泌物倒流入鼻后或咽部、甚至反流入聲門或氣管，直接或間接刺激咽部咳嗽感受器而導致的以慢性咳嗽為主要表現的一系列臨床綜合，其伴隨癥狀可包括膿性黏稠痰液、咽部異物感、睡眠打鼾、鼻塞、流涕、噴嚏、睡眠呼吸障礙等[9]。臨床上UACS多見于兒童，但由于兒童主訴較少、臨床癥狀常不典型、且UACS的病因復雜、甚至大部分UACS患者是多種病因聯合致病等，UACS的漏診、誤診率極高，有研究報道稱，UACS的誤診率可高達50%[10]。目前，UACS的發病機制尚未完全明確，但有學者報道稱，UACS所致的慢性咳嗽癥狀是多種因素共同作用的結果，一方面，鼻粘膜炎性反應導致氣道高反應，抗原反復刺激引起鼻-肺反射；另一方面，鼻粘膜炎性反應導致鼻纖毛運動和清除異物能力減弱、溫濕度調節能力降低[11]；此外，鼻腔或鼻竇炎性分泌物增多并反流如鼻咽部，長期刺激咳嗽感受器，均可引起慢性咳嗽[12]。

當前UACS的臨床診斷主要依靠患者病史、癥狀、體征等臨床資料，缺乏較為客觀且具有特異性的輔助檢查結果支持[13]。有研究報道稱，UACS患者的慢性咳嗽可進一步損傷氣道黏膜，加重患者氣道炎癥，同時促使氣道上皮細胞產生各種生長因子，如轉化生長因子β2 (TGF-β2)、上皮生長因子樣生長因子、神經生長因子等，其中神經生長因子的過量分泌又可引發TRPV1的表達上調，從而造成咳嗽敏感性增高，加重患者的咳嗽癥狀[14]。故有學者認為以TRPV1升高導致的氣道高反應和TGF-β2升高引發的氣道慢性炎癥共同作用，是UACS的致病機制之一，因而TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫組化方法檢測對UACS的診斷具有一定的輔助價值[15]。

本研究中186例患兒TRPV1、TGF-β2的ELISA及免疫組化檢測結果顯示，UACS組患兒ELISA檢測的TRPV1和TGF-β2值均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(均P<0.001)；UACS組患兒免疫組化檢測的TRPV1、TGF-β2陽性率均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(P=0.018，0.001)。說明，TRPV1以及TGF-β2的升高于UACS的發生有關，此結果與此前研究結果基本一致。

此外，本研究結果顯示，UACS患兒TRPV1和TGF-β2的免疫組化檢測方法的敏感度均顯著高于ELASA，差異具有統計學意義(χ2=43.843，13.791，均P<0.001),而UACS患兒TRPV1和TGF-β2的 ELASA檢測的特異度均顯著高于免疫組化檢測，差異具有統計學意義(χ2=45.316，4.997，均P<0.05)。說明，對于UACS患兒，免疫組化檢測的陽性率較高，陰性預測值較高，敏感性較高，對可疑病例進行免疫組化檢測可降低漏診率；而ELISA的陽性率偏低，但特異性較高，可用于可疑病例的非UACS排除。

綜上所述，TRPV1及TGF-β2的升高與UACS的發病有關，TRPV1和TGF-β2的免疫組化檢測對UACS診斷的敏感性較高，而TRPV1和TGF-β2的 ELASA檢測對UACS診斷的特異性較高，聯合應用ELISA及免疫組化檢測UACS可疑病例，有助于提高UACS患者診斷的準確性，降低漏診、誤診率。

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(學術編輯：劉云)

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Clinical value of ELISA and immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 in diagnosis of UACS

SHI Xiao-lan

(Xi’anChildren’sHospital,Xi’an710003,Shaanxi,China)

Objective：To explore the clinical value of ELISA and immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 in diagnosis of UACS.Methods：Choosing 94 patients as UACS group.And choosing 92 patients with adenoid hypertrophy but without UACS as the control group.All the patients were tested for TRPV1 and TGF-β2 with ELISA and immunohistochemical.Results：TRPV1 and TGF-β2 tested with ELISA and immunohistochemical of patients in UACS group were significantly higher than those of control group(P<0.05).The sensitivity of ELISA of TRPV1 and TGF-β2 was significantly higher than that of immunohistochemical,and the specificity of immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 was significantly higher than that of ELISA(P<0.05).Conclusion：The rise of TRPV1 and TGF-β2 is connected with the attack of UACS. ELISA of TRPV1 and TGF-β2 has high specificity and immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 has high sensitivity in the diagnosis of UACS.Combined detection of ELISA and immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 can improve the diagnosis rate of UACS.

Transient receptor potential vanniloid 1(TRPV1);Transforming growth factor-β2(TGF-β2);Enzyme-linked immuno sorbent assay(ELISA);Immunohistochemical(IHC);Upper airway cough syndrome(UACS)

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.05.04

2016-01-24

石曉嵐(1980-)，女，碩士，主治醫師。E-mail：sinian119@126.com

時間：2016-10-2511∶31

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20161014.1716.008.html

1005-3697(2016)05-0637-04

R73；R68

A