miR-21和miR-93表達(dá)水平與三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究

羅玲娟, 帕提瑪·阿布力米提, 謝新梅, 張洪亮

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院 腫瘤二科, 新疆 烏魯木齊, 830000)

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miR-21和miR-93表達(dá)水平與三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究

羅玲娟, 帕提瑪·阿布力米提, 謝新梅, 張洪亮

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院 腫瘤二科, 新疆 烏魯木齊, 830000)

目的探討miR-21和miR-93的表達(dá)水平與三陰性乳腺癌(TNBC)發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。方法選擇行乳腺癌根治術(shù)的女性患者86例，收集癌組織與正常乳腺組織，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測miR-21和miR-93的相對表達(dá)量，并分析其與臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果miR-21和miR-93在TNBC組織中相對表達(dá)量高于癌旁組織; TNBC組織中, miR21高表達(dá)54例，占62.79%, miR-93高表達(dá)50例，占58.14%; miR-21和miR-93在腫瘤直徑>5 cm、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中高表達(dá)率顯著增高(P<0.01); miR-21和miR-93的表達(dá)水平與患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、病理分級無明顯相關(guān)性。癌組織中miR-21與miR-93表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.761,P<0.01)。結(jié)論miR-21與miR-93在TNBC中表達(dá)異常增高，且與腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，可作為TNBC診斷及判斷預(yù)后的輔助指標(biāo)。

微小核糖核酸; miR-21; miR-93; 三陰性乳腺癌; 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)

據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界范圍內(nèi)乳腺癌每年新增女性病例約有120～140萬，其中三陰性乳腺癌(TNBC)占10%～15%[1]。TNBC惡性程度高、易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)[2]，且生物學(xué)行為、分子表達(dá)特征和臨床病理特征較為特殊，常規(guī)組織病理學(xué)診斷已不能滿足對其治療指導(dǎo)和預(yù)后判斷的需求。微小核糖核酸(miRNA)是一類長度為20～25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA, 廣泛存在于真核生物中，參與多種信號通路的調(diào)節(jié)[3]。研究[4-6]表明, miRNA參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化等重要過程的調(diào)控，其表達(dá)失調(diào)與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究通過檢測三陰性乳腺癌患者組織中miR-21和miR-93的表達(dá)水平，探討其與臨床病理特征的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年2月—2016年1月在新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院行乳腺癌根治術(shù)的女性患者86例，納入標(biāo)準(zhǔn): ① 均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為TNBC; ② 年齡≥18歲; ③ 術(shù)前均未行放、化療、免疫治療及內(nèi)分泌治療等; ④ 簽署《知情同意書》。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 妊娠或感染患者; ② 肝腎功能不全; ③ 合并有心腦血管疾病、糖尿病及其他腫瘤。患者年齡26～63歲，平均(40.98±9.67)歲；腫瘤直徑1.0～14.0 cm, 平均(5.65±1.48)cm; 絕經(jīng)60例；未絕經(jīng)26例；臨床分期: Ⅰ～Ⅱ期57例, Ⅲ～Ⅳ期29例；病理分級: Ⅰ級7例, Ⅱ級59例, Ⅲ級20例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本收集：收集所有患者癌組織和距腫瘤邊緣2 cm以上的癌旁組織，嚴(yán)格無菌操作下，將標(biāo)本切成小塊，分裝，30 min內(nèi)-80℃凍存待測。

1.2.2逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測：采用Trizol試劑盒(美國Invitrogen公司)提取總RNA后，以GAPDH為內(nèi)參，行PCR。反應(yīng)體系中含：總RNA 1μL、模板cDNA 2.5 μL、聚合酶Ex Taq HS 0.1 μL、AMV逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μL、上下游引物各0.1 μL。miR-21引物序列：F: 5′-TGCGCTAGCTTATCAGACTGAT-3′, R: 5′-CCAGTGCAGGGTCCGAGGTATT-3′; miR-93引物序列: F: 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′, R: 5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′; GAPDH引物序列: F: 5′-CAGGGCTGCTTTTAACTCTGGTAA-3′, R: 5′-GGGTGGAATACATTGGAACATGT-3′。 反應(yīng)條件為: 94 ℃ 2 min; 94 ℃ 40 s, 50～65 ℃ 40 s, 72 ℃ 1 min, 共35個(gè)循環(huán); 72 ℃ 5 min, 1個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，取6 μL產(chǎn)物以2%瓊脂糖凝膠電泳，掃描電泳條帶灰度，計(jì)算miR-21和miR-93的相對表達(dá)量。

1.3評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

計(jì)算miR-21和miR-93的平均相對表達(dá)量，高于此值為高表達(dá)，低于此值為低表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2　結(jié)　果

2.1癌組織和癌旁組織中miR-21、miR-93表達(dá)水平比較

miR-21和miR-93在TNBC組織中相對表達(dá)量高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1　癌組織和癌旁組織中miR-21、miR-93表達(dá)水平比較±s)

與癌旁組織比較, **P<0.01。

2.2癌組織中miR-21和miR-93表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性

癌組織中, miR21高表達(dá)54例，占62.79%, miR-93高表達(dá)50例，占58.14%。miR-21和miR-93在腫瘤直徑>5 cm、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中高表達(dá)率顯著增高(P<0.01); miR-21和miR-93的表達(dá)水平與患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、病理分級無顯著相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

2.3癌組織中miR-21和miR-93表達(dá)水平的相關(guān)性

TNBC組織中, miR-21、miR-93在癌組織中均呈高表達(dá)，兩者的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.761,P<0.01)。

表2　癌組織中miR-21和miR-93表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性[n(%)]

與同一病理特征的另一亞項(xiàng)比較, **P<0.01。

3　討　論

TNBC是一種亞型乳腺癌，多見于45歲以下的年輕女性，惡性程度高；首次確診時(shí)臨床分期晚、組織分級高、腫瘤直徑大、多淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；腫瘤侵襲性強(qiáng)，病情進(jìn)展迅速，化療、內(nèi)分泌治療等效果均不佳；預(yù)后差, 3年內(nèi)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)率高[7]。miRNA是一種小分子RNA片段，具有高度保守性、時(shí)序性和特異性，可調(diào)控癌基因和抑癌基因的表達(dá)，在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用[8-9]。miR-21是目前研究較多的miRNA之一，據(jù)報(bào)道[10-11], miR-21高表達(dá)于甲狀腺乳頭狀癌、食管鱗癌等腫瘤組織中。基礎(chǔ)研究[12]顯示, miR-21的表達(dá)水平對結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞增殖、周期、凋亡、侵襲和遷移等生物學(xué)行為均存在影響。吳子晏等[13]研究表明, miR-21高表達(dá)與骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移及對化療藥的敏感程度密切相關(guān)。劉潔等[14]也認(rèn)為, miR-21的表達(dá)水平影響著結(jié)腸癌晚期患者對化療藥物的敏感性，或可作為預(yù)測化療療效的指標(biāo)。miR-93位于MCM7基因的第13號內(nèi)含子內(nèi)，研究[15]顯示, miR-93高表達(dá)可能通過下調(diào)抑癌基因染色體質(zhì)域解螺旋酶DNA結(jié)合蛋白5(CHD5)mRNA的表達(dá)，促進(jìn)胃癌SGC-7901細(xì)胞的遷移和侵襲。

本研究應(yīng)用RT-PCR檢測TNBC組織及癌旁組織中miR-21和miR-93表達(dá)水平，并分析其與臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果顯示，癌組織中miR-21和miR-93均過表達(dá)，兩者表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)，且其表達(dá)水平與腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否密切相關(guān)，提示miR-21和miR-93或可作為TNBC診斷及預(yù)后預(yù)測的輔助指標(biāo)，其具體作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

[1]Feiten S, Dünnebacke J, Heymanns J, et al. Breast cancer morbidity：questionnaire survey of patients on the long term effects of disease and adjuvant therapy[J]. Dtsch Arztebl Int, 2014, 111(31-32): 537-544.

[2]Rangel M C, Bertolette D, Castro NP, et al. Developmental signaling pathways regulating mammary stem cells and contributing to the etiology of triple-negative breast cancer[J]. Breast Cancer Res Treat, 2016, 156(2): 211-226.

[3]Butkyte S, Ciupas L, Jakubauskiene E, et al. Splicing-dependent expression of microRNAs of mirtron origin in human digestive and excretory system cancer cells[J]. Clin Epigenetics, 2016, 8: 33.

[4]Lin Z, Li JW, Wang Y, et al. Abnormal miRNA-30e Expression is Associated with Breast Cancer Progression[J]. Clin Lab, 2016, 62(1-2): 121-128.

[5]單保恩, 劉麗華. MicroRNA: 癌癥診治新靶點(diǎn)[J]. 中國腫瘤生物治療雜志, 2014, 21(6): 603-609.

[6]方楚玲, 郭琳瑯. miRNA對肺癌化療耐藥調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 中華腫瘤防治雜志, 2014, 21(1): 72-76.

[7]Pan X B, Qu S, Jiang Y M, et al. Triple Negative Breast Cancer versus Non-Triple Negative Breast Cancer Treated with Breast Conservation Surgery Followed by Radiotherapy: A Systematic Review and Meta-Analysis[J]. Breast Care (Basel), 2015, 10(6): 413-416.

[8]Qiu X, Zhang J, Shi W, et al. Circulating MicroRNA-26a in Plasma and Its Potential Diagnostic Value in Gastric Cancer[J]. PLoS ONE, 2016, 11(3): e0151345.

[9]Bertoli G, Cava C, Castiglioni I. MicroRNAs as Biomarkers for Diagnosis, Prognosis and Theranostics in Prostate Cancer[J]. Int J Mol Sci, 2016, 17(3): 421.

[10]郭柏華, 唐云, 陳力, 等. 甲狀腺乳頭狀癌組織中miR-21的表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系[J]. 中國急救復(fù)蘇與災(zāi)害醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 10(3): 247-249.

[11]郭權(quán)威, 張建華, 王成, 等. miR-21和程序性細(xì)胞死亡基因4在食管鱗癌中的表達(dá)及意義[J]. 廣東醫(yī)學(xué), 2014, 35(20): 3175-3177.

[12]熊兵紅, 馬利, 程勇, 等. 抑制miR-21表達(dá)對結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J]. 中國腫瘤生物治療雜志, 2014, 21(1): 49-54.

[13]吳子晏, 劉洋, 楊述華. 骨肉瘤患者血清miR-21的表達(dá)意義及其與化療藥物敏感性的研究[J]. 實(shí)用骨科雜志, 2015(7): 607-610.

[14]劉潔, 吳稚暉, 劉懷, 等. 結(jié)腸癌患者血漿miR-21表達(dá)水平與化療藥物療效相關(guān)性的研究[J]. 實(shí)用腫瘤雜志, 2015, 30(5): 423-426.

[15]趙立剛, 姜維民, 董茂盛. miR-93轉(zhuǎn)染對胃癌細(xì)胞株SGC-7901侵襲遷移能力的影響及機(jī)制探討[J]. 山東醫(yī)藥, 2015, 55(43): 31-33.

Study on correlation between expression levels of miR-21, miR-93 and the occurrence and development of triple-negative breast cancer

LUO Lingjuan, PATIMA·Abulimiti, XIE Xinmei, ZHANG Hongliang

(SecondDepartmentofOncology,TCMHospitalAffiliatedtoXinjiangMedicalUniversity,Urumchi,Xinjiang, 830000)

ObjectiveTo explore the correlation between expression levels of miR-21, miR-93 and the occurrence and development of triple-negative breast cancer (TNBC). MethodsA total of 86 females with radical mastectomy were selected to collect cancerous tissues and normal mammary tissues. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the relative expression of miR-21 and miR-93, and its relationship with clinical pathological characters was analyzed. ResultsThe expression of miR-21 and miR-93 was significantly higher in TNBC tissues than that in para-canerous tissues. Of all patients, 54 patients (62.79%) had high expression of miR-21 and 50 (58.14%) cases had high expression of miR-93 in TNBC tissues. The expression of miR-21 and miR-93 increased significantly in patients with tumor diameter >5 cm, in clinical stage of Ⅲ～Ⅳ and with lymph node metastasis (P<0.01). Meanwhile, the expression of miR-21 and miR-93 had no significant association with patients′age, menstrual status and pathological degree. However, the expression levels of miR-21 and miR-93 were positively associated with cancerous tissues (r=0.761,P<0.01). ConclusionThe expression levels of miR-21 and miR-93 are abnormally high in TNBC tissues, and are in close association with tumor diameter, clinical stage and lymph node metastasis, so they can be used as complementary indexes for the diagnosis and prognostic evaluation in patients with TNBC.

micro ribonucleic acid; miR-21; miR-93; triple-negative breast cancer; reverse transcriptase polymerase chain reaction

2016-04-21

中國高校醫(yī)學(xué)期刊臨床專項(xiàng)資金(11525862)

張洪亮, E-mail: zhanghongliang@csco.cn

R 737.9

A

1672-2353(2016)19-031-03DOI: 10.7619/jcmp.201619009