結直腸癌組織中ABCG2蛋白的表達及其與CPT-11化療方案療效的相關性

朱　禮

(中國醫科大學腫瘤醫院 遼寧省腫瘤醫院 放療一科, 遼寧 沈陽, 110042)

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結直腸癌組織中ABCG2蛋白的表達及其與CPT-11化療方案療效的相關性

朱禮

(中國醫科大學腫瘤醫院 遼寧省腫瘤醫院 放療一科, 遼寧 沈陽, 110042)

目的探討結直腸癌組織中ABCG2蛋白的表達情況及其與CPT-11化療方案療效的相關性。方法選取結直腸癌住院患者89例。采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法檢測ABCG2表達情況，分析結直腸癌組織中ABCG2蛋白的表達情況與CPT-11化療方案療效的相關性，并分析ABCG2蛋白的表達情況與患者年齡、性別等臨床資料的相關性。結果89例直腸癌住院患者組織標本中，陽性率達89.89%。52例臨近正常腸黏膜組織標本中，陽性率為48.08%, 表明結直腸癌組織中ABCG2表達較正常腸黏膜組織顯著升高(P<0.05)。結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與患者年齡、性別、分化程度、病變部位、肝轉移無相關性(P>0.05)。結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與CPT-11化療療效無相關性(P>0.05)。結論結直腸癌組織中ABCG2蛋白的表達情況與CPT-11化療方案療效無相關性。

ABCG2; CPT-11; 結直腸癌

喜樹堿衍生物伊立替康(CPR-11)是目前臨床用于結直腸癌晚期化療的常用藥物之一，不同個體使用的療效差別巨大，并且不良反應多發，如腹瀉、骨髓抑制等[1]。現階段結直腸癌的主要研究方向集中在如何為患者選擇個性化療法，提高療效，降低不良發應。研究[2]發現一種屬于ABC轉運超家族的多耐藥轉運蛋白ABCG2可利用ATP水解釋放的能量將多種底物轉運到膜外。有研究[3-4]證實ABCG2在CPT-11耐藥性中起到了重要作用。Hiraki M等[5]發現，用CPT-11產物SN-38篩選細胞系, ABCG2的mRNA轉錄與蛋白質的表達在耐藥細胞株中明顯高于敏感細胞株。Inoue Y等[6]發現，在轉移性結直腸癌患者中, ABCG2的擴增程度與患者耐藥程度有直接的關系。本研究探討結直腸癌組織中ABCG2蛋白的表達情況與CPT-11化療方案療效的相關性，現報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取2012年1月—2015年1月腫瘤內科結直腸癌住院患者89例。入選標準：病理組織學確診為結直腸癌；接受CPT-11化療；有腫瘤組織標本保留；有或可進行療效評價。收集入選患者的病歷、病史資料及腫瘤組織標本。選取的89例直腸癌住院患者中，男45例，女44例；結腸癌患者49例，直腸癌患者40例；分化程度好患者52例，分化程度差患者37例。89例患者均接受CPT-11化療，其中CPT-11單藥者8例, CPT-11聯合恩度5例, CPT-11聯合愛必妥6例, CPT-11聯合希羅達、愛必妥2例，使用FOLFIRI方案者42例, FOLFIRI聯合泰欣生6例, FOLFIRI聯合愛必妥10例, FOLFIRI聯合貝伐珠單抗9例, FOLFOXIRI者1例。

1.2實驗方法

本研究采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法(SP)。獲得患者腫瘤組織標本后制作石蠟包埋切片保存并等待處理。脫蠟使用二甲苯浸泡3次，每次15 min。無水乙醇、95%乙醇各5 min, 90%、85%、80%乙醇各2 min, 蒸餾水清洗3次完成水化。1×檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液浸泡并高壓煮沸后自然冷卻，完成抗原修復。3%H2O2浸泡15 min滅活內源性過氧化物酶。蒸餾水清洗3次, PBS緩沖液浸泡5 min。5%封閉液室溫封閉10 min。滴加一抗，4℃孵育過夜。PBS緩沖液浸泡震蕩清洗4次，每次5 min。滴加二抗，室溫孵育20 min。PBS緩沖液浸泡震蕩清洗3次，每次5 min。滴加鏈親合素-辣根過氧化物酶，室溫15 min。PBS緩沖液浸泡震蕩清洗3次，每次5 min。滴加DAB工作液至反應部位黃褐色，蒸餾水清洗3次，完成顯色。浸入蘇木精溶液5 min, 蒸餾水清洗至不再變色，1%鹽酸酒精分化1～2 s, 蒸餾水反復清洗，反藍水清洗2 min, 完成復染。PBS緩沖液做一抗陰性對照液，不滴加任何一抗及一抗對照液做空白對照，已知陽性切片做陽性對照。

1.3評價標準

免疫組化結果由不少于2位本院病理科醫師做出判定。判定標準：細胞膜及細胞質出現黃褐色顆粒判定為免疫反應陽性細胞。連續10個高倍鏡視野，免疫反應陽性細胞<25%判定為陰性，25～50%判定為弱陽性，50～75%判定為陽性，>75%判定為強陽性。療效評價：按照RECIST 1.0實體瘤療效統一評價標準對療效進行評價，療效分級依次為完全緩解(CR), 部分緩解(PR), 病情穩定(SD)和疾病進展(PD)。每隔1周評價1次，可針對病情進展情況進行調整。

1.4統計學分析

使用SPSS 19.0進行數據處理分析，分析結直腸癌組織中ABCG2蛋白的表達情況與CPT-11化療方案療效的相關性，并分析ABCG2蛋白的表達情況與患者年齡、性別等臨床資料的相關性，分析采用卡方檢驗，當P<0.05時為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1結直腸癌組織標本ABCG2表達情況

免疫組化染色結果顯示，結直腸癌組織中ABCG2普遍表達。選取的89例直腸癌住院患者組織標本中，陰性(-)9例(10.11%)，弱陽性(+)11例(12.36%)，陽性(2+)43例(48.31%)，強陽性(3+)26例(29.21%)，陽性率89.89%。選取的89例直腸癌住院患者組織標本中，有52例有臨近正常腸黏膜組織標本，其中陰性(-)27例(51.92%)，弱陽性(+)5例(9.62%)，陽性(2+)11例(21.15%)，強陽性(3+)9例(17.31%)，陽性率48.08%。結直腸癌組織中ABCG2表達較正常腸黏膜組織顯著升高(P<0.05)，見圖1。

2.2結直腸癌組織標本ABCG2表達與患者臨床

資料的相關性

本研究結果顯示，結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與患者年齡、性別、分化程度、病變部位、肝轉移無相關性(P>0.05), 見表1。

2.3結直腸癌組織標本ABCG2表達與CPT-11化療療效的相關性

按照RECIST 1.0實體瘤療效統一評價標準對療效進行評價，選取的89例直腸癌住院患者中，達到CR/PR療效患者21例(23.60%)，SD療效患者44例(49.44%), PD療效患者24例(26.97%)。結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與CPT-11化療療效無相關性(P>0.05)。本研究中使用FOLFIRI方案者68例，對此部分患者單獨進行統計學分析，其中達到CR/PR療效患者16例(23.53%), SD療效患者33例(48.53%), PD療效患者19例(27.94%)。結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與FOLFIRI方案化療療效無相關性(P>0.05)。

A. 強陽性(3+)

B. 陽性(2+)

C. 弱陽性(+)

D. 陰性(-)

3　討　論

大腸癌是常見的惡性腫瘤，包括結腸癌和直腸癌。大腸癌的發生與高脂肪低纖維素飲食、大腸慢性炎癥、大腸腺瘤、遺傳因素和其他因素如血吸蟲病、盆腔放射、環境因素(如土壤中缺鉬)、吸煙等有關。大腸癌早期無癥狀或癥狀不明顯，僅感不適、消化不良、大便潛血等。隨著癌癥發展，癥狀逐漸出現，表現為大便習慣改變、腹痛、便血、腹部包塊、腸梗阻等，伴或不伴貧血、發熱和消瘦等全身癥狀。腫瘤因轉移、浸潤可引起受累器官的改變。大腸癌因其發病部位不同而表現出不同的臨床癥狀及體征。目前常用的治療方法有手術治療、輔助化學治療、IV結直腸癌的治療、放射治療等方法。

近年來研究人員發現一種屬于ABC轉運超家族的多耐藥轉運蛋白ABCG2, ABCG2可利用ATP水解釋放的能量將多種底物轉運到膜外[7-8]。ABCG2蛋白是ABC超家族成員之一，是一種P-糖蛋白，基因定位于4q22, 由多藥抗性蛋白(MDR1)基因和多藥抗性相關蛋白(MAP)基因編碼[9-10]。研究[11-12]表明，大多數腫瘤組織中都有ABCG2的表達，以肺、子宮內膜、消化道最為多見。目前關于結直腸癌癌組織與臨近正常腸黏膜組織ABCG2表達情況研究較少，且結果不一。有研究[13]顯示結直腸癌癌組織與臨近正常腸黏膜組織ABCG2表達情況相近(66.2%∶50%)，同時有研究[14]顯示結直腸癌癌組織ABCG2表達明顯高于臨近正常腸黏膜組織ABCG2表達(68.3%∶0%)。本研究顯示，結直腸癌組織中ABCG2普遍表達。選取的89例直腸癌住院患者組織標本中，陽性率達89.89%。有52例有臨近正常腸黏膜組織標本，陽性率48.08%，證實結直腸癌組織中ABCG2表達較正常腸黏膜組織明顯升高(P<0.05)。本研究顯示結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與患者年齡、性別、分化程度、病變部位、肝轉移無相關性(P>0.05)，可能與研究對象的入選標準、樣本量的大小、試驗方法等多種因素有關。

有研究[15-16]顯示, ABCG2表達情況與化療治療的臨床療效可能存在相關性。Jia Q等[17]研究顯示, ABCG2的表達與腫瘤患者化療治療的臨床療效并無關系。Seong SJ等[18]發現ABCG2可作為結直腸癌預后較差的指征。因此, ABCG2表達情況與化療療效的相關性存在較大的爭議。本研究結果顯示，結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與CPT-11化療療效無相關性(P>0.05)。總之，本研究顯示結直腸癌組織中ABCG2表達較正常腸黏膜組織明顯升高，結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與患者年齡、性別、分化程度、病變部位、肝轉移無相關性，結直腸癌組織標本ABCG2表達情況與CPT-11化療療效無相關性。

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Expression of ABCG2 in colorectal cancer tissues and its correlation with efficacy of CPT-11 chemotherapy

ZHU Li

(DepartmentofRadiotherapy,LiaoningProvincialTumorHospital,TumorHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,Liaoning, 110042)

ObjectiveTo explore the expression of ABCG2 in colorectal cancer tissues and its correlation with efficacy of CPT-11 chemotherapy. MethodsA total of 89 patients with colorectal cancer were selected. The SP method was used to detect ABCG2 expression level. The correlation between the expression of ABCG2 and the efficacy of CPT-11 chemotherapy was analyzed, and correlations between the expression of ABCG2 and the patient′s age, sex were analyzed as well. ResultsThe positive rate was 89.89% in 89 cases of rectal cancer. Positive rate was 48.08% in 52 cases of normal intestinal mucosa, which showed that the expression of ABCG2 in colorectal carcinoma was significantly higher than that in normal intestinal mucosa (P<0.05). The expression of ABCG2 in colorectal cancer tissue showed no correlation with the age, sex, degree of differentiation, location of lesion and liver metastasis (P>0.05). Expression of ABCG2 in colorectal cancer tissue had no correlation with efficacy of CPT-11 chemotherapy efficacy (P>0.05). ConclusionThere is no correlation between ABCG2 expression in colorectal cancer tissues and the efficacy of CPT-11 chemotherapy.

ABCG2; CPT-11; colorectal cancer

2016-05-21

R 735.3

A

1672-2353(2016)19-040-04DOI: 10.7619/jcmp.201619012