Versican、CTGF、TGFβ1在子宮內膜樣腺癌及子宮內膜上皮內瘤變中的表達和意義

汪 鋒，宋曉燕，胡玉崇，賀慧杰，武 慧，張 帆，釵麗干

(內蒙古自治區人民醫院 1.病理科；2.婦產科，內蒙古 呼和浩特010017)

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Versican、CTGF、TGFβ1在子宮內膜樣腺癌及子宮內膜上皮內瘤變中的表達和意義

汪 鋒1，宋曉燕1，胡玉崇2，賀慧杰1，武 慧1，張 帆1，釵麗干1

(內蒙古自治區人民醫院 1.病理科；2.婦產科，內蒙古 呼和浩特010017)

目的 探討多功能蛋白聚糖(Versican)、結締組織生長因子(CTGF)、轉化生長因子β1(TGFβ1)在子宮內膜樣腺癌(EA)及子宮內膜上皮內瘤變(EIN)中的表達及三者相關性。方法 采用免疫組織化學方法對76例EA和35例EIN中Versican、CTGF、TGFβ1的表達情況進行了分析，闡述其在EA及EIN中的表達特征及相互關系。結果 在76例EA中Versican、CTGF、TGFβ1陽性表達率分別為75%，65.8%，69.7%，在35例EIN中陽性表達率分別為42.9%，37.1%，37.1%。Versican、CTGF、TGFβ1在EA陽性表達率明顯高于EIN陽性表達率，差異均具有統計學意義(P<0.05)，Versican與TGFβ1在EA中表達率具有相關性(P<0.05)，CTGF與TGFβ1在EA中表達率也具有相關性(P<0.05)。結論 子宮內膜上皮內瘤變是子宮內膜樣腺癌的癌前病變，Versican、CTGF、TGFβ1的異常表達可能與子宮內膜樣腺癌的發生、發展相關，Versican、CTGF、TGFβ1在這一過程中具有明顯的相關性。

子宮內膜樣腺癌；子宮內膜上皮內瘤變；Versican；結締組織生長因子；轉化生長因子β1

(ChinJLabDiagn,2016,20:1658)

子宮內膜癌是常見的婦科惡性腫瘤，近年來其發病率逐漸增高，在部分國家已經超過子宮頸癌成為最常見的女性生殖系統惡性腫瘤，僅美國每年就有47130例新發病例，8010例死于子宮內膜癌[1]。2014年，第4版WHO將子宮內膜不典型增生(AH)與子宮內膜上皮內瘤變(EIN)并列命名為AH/EIN[2]。分子遺傳學研究顯示，EIN具有與子宮內膜樣腺癌相類似的細胞遺傳學改變，進一步證實其為子宮內膜樣腺癌的前期病變。Versican是一種軟骨素硫酸鹽蛋白聚糖，可與多種因子結合，從而調節細胞與細胞、細胞與基質的相互作用，促進細胞增生并誘導腫瘤細胞發生上皮-間質轉化(EMT)。TGFβ是EMT的重要細胞因子。TGFβ是CTGF的上游調節介質。本文重點研究Versican、CTGF、TGFβ1在子宮內膜樣腺癌及其癌前病變子宮內膜上皮內瘤變中的表達及相互關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集內蒙古自治區人民醫院病理科2012年8月至2015年12月子宮內膜樣腺癌手術標本76例。患者年齡32-72歲，平均年齡54.6歲。子宮內膜上皮內瘤變診刮標本35例，患者年齡30-69歲，平均年齡50.2歲。所有標本均經10%福爾馬林固定，石蠟包埋后行4 μm厚切片。參照2014年，第4版《WHO女性生殖器官腫瘤分類》診斷標準對病例進行回顧性分析，由兩名副主任醫師以上人員對病理診斷及組織學分級進行確認。

1.2 方法

兔抗人Versican、CTGF、TGFβ1抗體均為北京博奧森生物技術有限公司產品，二抗亦購自北京博奧森生物技術有限公司。采用鏈霉菌素-生物素(SP)免疫組織化學染色方法檢測。

1.3 結果判斷

隨機選擇5個高倍視野，每個視野計數100個瘤細胞，計數陽性細胞百分比。評分標準使用目前已被廣泛接受的免疫反應評分(IRS)系統。該評分系統包括陽性染色細胞數和染色強度兩部分評價：(1)陽性染色細胞數≤5%為0分，5%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，>75%為4分。(2)染色強度無色為0分，染色強度淡黃色為1分，黃色為2分，褐色為3分。將同一組織的兩部分評分結果相乘即得出該組織標本的免疫反應評分，0分為無表達“﹣”，1-4分為弱陽性“+”，5-8分為中等陽性“++”，9-12分為強陽性“+++”。在本研究中，為了便于分組統計分析，將無表達和弱陽性定義為陰性表達；將中等陽性和強陽性定義為陽性表達。

1.4 統計學處理

數據統計使用SPSS V13.0統計軟件進行處理，顯著性檢驗采用χ2檢驗，相關性檢驗采用Spearman相關分析；檢驗水準為α=0.05.

2 結果

2.1 TGFβ1在EA及EIN中的表達

TGFβ1表達于子宮內膜腺上皮細胞胞質，在76例EA中TGFβ1陽性表達率為69.7%，在35例EIN中陽性表達率37.1%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)。見表1。

表1 TGFβ1在子宮內膜樣腺癌及子宮內膜上皮內瘤變中表達的比較

2.2 Versican在EA及EIN中的表達

Versican表達于子宮內膜腺上皮細胞及間質細胞胞質，在76例EA中Versican陽性表達率為75%，在35例EIN中陽性表達率42.9%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)。見表2。

表2 Versican在子宮內膜樣腺癌及子宮內膜上皮內瘤變中表達的比較

2.3 CTGF在EA及EIN中的表達

CTGF主要表達于子宮內膜腺上皮細胞胞質及胞膜，間質細胞亦有表達，在76例EA中CTGF陽性表達率為65.8%，在35例EIN中陽性表達率37.1%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)。見表3。

表3 CTGF在子宮內膜樣腺癌及子宮內膜上皮內瘤變中表達的比較

2.4 TGFβ1與Versican在EA中表達的相關性

在76例EA中Versican、TGFβ1陽性表達率分別為75%，69.7%，在子宮內膜樣腺癌組織中的表達有協同變化的趨勢，表現為隨著一種蛋白的表達增強，另一種蛋白其表達也增高，采用Spearman相關分析，r=0.546,P<0.01，表明兩者的表達呈正相關。見表4。

表4 TGFβ1與Versican在子宮內膜樣腺癌組織中表達的相關性

2.5 TGFβ1與CTGF在EA中表達的相關性

在76例EA中CTGF、TGFβ1陽性表達率分別為65.8%，69.7%，采用Spearman相關分析，r=0.672,P<0.01，表明兩者的表達呈正相關。見表5。

表5 TGFβ1與CTGF在子宮內膜樣腺癌組織中表達的相關性

3 討論

研究發現[3，4]，上皮細胞在一些因素的作用下，失去細胞極性，丟失細胞間緊密連接和黏附連接，獲得浸潤和游走遷移能力，變成了具有間質細胞形態和特性的細胞，這被稱為EMT。由于EMT是上皮細胞獲得遷移能力的有效方式，成為占惡性腫瘤90%以上的上皮細胞癌浸潤轉移的一個重要途徑。TGFβ[5]是一種多功能的細胞因子，在EMT中發揮重要的調節作用，TGFβ是最主要的信號通路之一。研究表明[6]TGFβ能夠誘導子宮內膜癌細胞發生EMT。本研究中，在76例EA中TGFβ1陽性表達率為69.7%，在35例EIN中陽性表達率37.1%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)。同樣說明 TGFβ1在子宮內膜樣腺癌發生發展及癌組織浸潤中可能具有較為重要的作用。

軟骨素硫酸鹽蛋白聚糖Versican在多種惡性腫瘤中高表達，它在腫瘤中的作用是調節細胞的增殖、黏附、侵襲、遷移、血管生成，以及腫瘤浸潤和轉移[7]。本研究發現versican在子宮內膜樣腺癌中表達較其癌前病變子宮內膜上皮內瘤變中明顯增多，差異具有統計學意義。

本研究發現，在人的子宮內膜樣腺癌中versican與TGFβ1的表達具有相關性，提示versican與TGFβ在子宮內膜樣腺癌發生發展中可能存在相互作用。Gao等[8]研究發現，小鼠乳腺癌模型多功能蛋白聚糖介導的TGFβ途徑阻滯可能會激發EMT，進而促進細胞增生，最終導致轉移部位腫瘤迅速生長。與本研究結論相一致。

CTGF具有促血管形成、促有絲分裂等許多生理功能[9]。許多研究表明，CTGF的表達與多種惡性腫瘤的發生、發展密切相關。但在子宮內膜癌中有關CTGF報道很少，本研究發現CTGF主要表達于子宮內膜腺上皮細胞胞質及胞膜，間質細胞亦有表達，在76例EA中CTGF陽性表達率為65.8%，在35例EIN中陽性表達率37.1%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)，說明CTGF與子宮內膜樣腺癌的發生發展存在一定的關系。

TGFβ1是CTGF的上游調節介質，實驗發現[10]CTGF蛋白、TGFβ1蛋白的陽性表達率在正常宮頸組織、CINII-Ⅲ組織、宮頸鱗癌組織中呈逐步遞增的趨勢，Spearman等級相關性分析發現二者在宮頸鱗癌中的表達呈正相關。本研究發現，TGFβ1與CTGF在子宮內膜樣腺癌中蛋白表達具有相關性，說明兩者在子宮內膜樣腺癌中可能存在相同的關聯性。

總之，EMT是上皮細胞癌浸潤轉移的一個重要途徑。TGFβ是上皮間質轉化的重要因子，與其相關的CTGF及versican兩個因子，在子宮內膜樣腺癌中蛋白表達存在較為明顯的相關性，對子宮內膜樣腺癌發生發展可能有著重要的意義。

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Expression and significance of Versican、CTGF、TGFβ1 in endometrioid adenocarcinoma and endometrial intraepithelial neoplasia

WANGFeng，SONGXiao-yan，HUYu-chong，etal.

(DepartmentofPathology,InnerMongoliaPeople’sHospital,Huhhot010017,China)

Objective To explore the expression and correlation of versican、connective tissue growth factor(CTGF)and transforming growth factor beta1(TGFβ1) in endometrioid adenocarcinoma and endometrial intraepithelial neoplasia.Methods The expression of vesican、CTGF and TGFβ1 was examined by Streptavidin-biotin peroxidase(SP) immunohistochemical method in 76 cases of endometrioid adenocarcinoma and 35 cases of endometrial intraepithelial neoplasia respectively.The results of versican、CTGF and TGFβ1 in endometrioid adenocarcinoma and endometrial intraepithelial neoplasia were analyzed with statistic package SPSS 13.0.Results Positive rate of versican、CTGF and TGFβ1 have significant difference between endometrioid adenocarcinoma and endometrial intraepithelial neoplasia.Positive rate of versican、CTGF and TGFβ1 was 75%、65.8% and 69.7% respectively significantly higber in endometrioid adenocarcinoma than in endometrial intraepithelial neoplasia respectively which was 42.9%，37.1%，37.1% respectively(P<0.05).The expression of versican was positively correlated with TGFβ1 in endometrioid adenocarcinoma(P<0.05).The expression of CTGF was positively correlated with TGFβ1 also in endometrioid adenocarcinoma(P<0.05).Conclusion The endometrial intraepithelial neoplasia was regarded as the precancerous lesion of endometrioid adenocarcinoma.The abnormal expression of versican、CTGF and TGFβ1 had obvious association with the pathogenesis of endometrioid adenocarcinoma.

endometrioid adenocarcinoma;endometrial intraepithelial neoplasia;versican;connective tissue growth factor;transforming growth factor beta1

內蒙古自治區人民醫院院內基金普通項目(201419)

1007-4287(2016)10-1658-04

R737.33

A

2016-03-01)