復方葛丹膠囊的安全毒理學評價Δ

丁文宇，王志斌，丁麗娜，張憲黨（山東省內分泌與代謝病研究所，濟南　250062）

復方葛丹膠囊的安全毒理學評價Δ

丁文宇＊，王志斌，丁麗娜，張憲黨#（山東省內分泌與代謝病研究所，濟南250062）

目的：對復方葛丹膠囊的安全毒理學進行評價。方法：根據最大耐受量（MTD）試驗經口累計染毒20 g/kg，連續觀察14 d，進行急性毒性實驗。設置污染物致突變性實驗（Ames實驗）、小鼠骨髓嗜多染紅細胞（PCE）微核實驗、小鼠精子畸變實驗，考察復方葛丹膠囊的遺傳毒性。Ames實驗采用鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102進行，采用平板摻入法，設復方葛丹膠囊劑量為8、40、200、1 000、5 000μg/皿，在加與不加S-9混合液條件下，統計各組回變菌落數；小鼠骨髓PCE微核實驗取50只小鼠分為陰性對照組（蒸餾水）、陽性對照組（環磷酰胺40 mg/kg）和復方葛丹膠囊低、中、高劑量組（2.5、5.0、10.0 g/kg），每組10只，ig給藥，末次給藥6 h后計算微核細胞率及PCE與正染紅細胞數比值；精子畸變實驗取25只小鼠分組給藥劑量同上，每天ig給藥1次，連續5 d，35 d后統計精子畸變率。30 d喂養實驗取80只大鼠隨機分成陰性對照組和復方葛丹膠囊低、中、高劑量組（0.67、1.33、2.67 g/kg），ig給藥，連續30 d，觀察大鼠體質量增量、進食量、食物利用率、血常規等指標的變化。結果：雌雄兩組小鼠經口MTD均大于20 g/kg；3項遺傳毒性試驗結果均為陰性；30 d喂養實驗結果顯示，喂養期間各組大鼠均未出現中毒癥狀，血液學、血液生化和病理組織學檢查等各項指標均處于正常范圍內，未有異常變化。結論：復方葛丹膠囊屬于無毒級，不具有遺傳毒性，大鼠30d喂養后未見明顯毒性反應。

復方葛丹膠囊；急性毒性；遺傳毒性；30d喂養實驗；小鼠；大鼠

1　材料

1.1儀器

CX21生物顯微鏡（日本Olympus公司）；CD3700血細胞分析儀（美國Abbott公司）；7180全自動生化分析儀（日本Hitachi公司）；全自動菌落計數器（西班牙IUL公司）。

1.2菌株、藥品與試劑

組氨酸營養缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102和S-9混合液均由中國疾病預防控制中心營養與食品安全所提供；復方葛丹膠囊（委托山東魯信藥業有限公司制備，批號：20101221，規格：0.4 g/粒）；2-氨基芴（美國Sigma-Aldich公司，批號：14F-3451，純度：98%）；對二甲基氨基苯重氮磺酸鈉（美國 Chem Service公司，批號：425-161B，純度：98.8%）；甲基磺酸甲酯（美國Acros Organics公司，批號：A016101301，純度：99.0%）；1，8-二羥基蒽醌（德國默克公司，批號：7238243，純度：97.0%）；環磷酰胺（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號：10110633，純度：99.0%）；其余試劑均為分析純。

1.3動物

斷乳SD大鼠85只，SPF級，♀♂各半，體質量63～84 g；ICR小鼠95只，SPF級，♀（35只）、♂（60只）兼有，體質量18～22 g。動物均購自北京華阜康生物科技股份有限公司[許可證號：SCXK（京）2009～0004]。

考慮海上平臺空間限制，結合水質分析與認識，設計采用CDFU+兩級過濾器，并輔以水處理藥劑的小型化生產水處理工藝，工藝流程如圖3所示。

2　方法

2.1急性毒性實驗

選20只小鼠（♀♂各半），按照最大耐受量（MTD）法進行實驗，按不同性別分為2組。取復方葛丹膠囊用蒸餾水制成終質量濃度為0.50 g/ml的樣品溶液，分3次ig給藥，每次給藥間隔時間為4 h，每次給藥劑量為0.2 ml/10 g，累計染毒劑量為20.0 g/kg。實驗前小鼠禁食不禁水16 h，稱體質量；ig給藥后記錄小鼠的中毒表現及死亡情況，連續觀察14d。

2.2遺傳毒性實驗

2.2.1Ames實驗選用鑒定合格的組氨酸營養缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102進行實驗，采用平板摻入法，在加與不加S-9混合液的條件下進行。稱取復方葛丹膠囊5.00 g，以蒸餾水作溶劑，定容至100 ml量瓶中，用蒸汽消毒器滅菌20 min，冷卻后取出，4℃條件下保存。實驗設立自發回變組、溶劑對照組、復方葛丹膠囊組和陽性對照組，每個劑量平行做3個平皿。復方葛丹膠囊組分別加入質量濃度為50 000、10 000、2 000、400、80μg/ml的樣品溶液，每皿加入0.1 ml，即給藥量為5 000、1 000、200、40、8μg/皿。陽性對照組所用陽性藥物為對二甲基氨基苯重氮磺酸鈉（500 μg/ml）、2-氨基芴（100μg/ml）、甲基磺酸甲酯（5 μl/ml）和1，8-二羥基蒽醌（500 μg/ml），所用溶劑均為二甲基亞砜，使用時每皿加入0.1 ml。融化頂層瓊脂培養基，依次加入測試菌株新鮮增菌液0.1 ml、復方葛丹膠囊溶液0.1 ml（活化時加入S-9混合液0.5 ml），混勻，迅速傾入底層培養基上，轉動平皿使頂層培養基均勻分布在底層上，固化，37℃培養48 h。觀察結果，計算每皿的回變菌落數。若回變菌落數為自發回變菌落數的2倍以上，并具有劑量-反應關系，則判定為陽性結果。相同條件下實驗重復2次。

2.2.2小鼠骨髓PCE微核實驗選50只小鼠，隨機分成5組，包括染毒劑量為2.5、5.0、10.0 g/kg（分別為1/8、1/4和1/2半數致死量，下同）的實驗組，蒸餾水陰性對照組和環磷酰胺陽性對照組（40 mg/kg），每組10只（♀♂各半）。制備含復方葛丹膠囊樣品終質量濃度為0.125、0.250、0.500 g/ml的樣品溶液，ig給藥，給藥量為0.2 ml/10 g，共給藥2次，給藥間隔為24 h。末次給藥6 h后處死小鼠，取胸骨骨髓，經小牛血清稀釋后涂片，經甲醇固定和吉姆薩染色液染色。每只小鼠鏡檢1 000個PCE，記錄微核細胞數，計算微核細胞率。同時觀察200個PCE，計數觀察到的正染紅細胞（NCE）數目，并計算PCE/NCE比值。

2.2.3小鼠精子畸變實驗選25只小鼠（♂）隨機分成5組，每組5只。實驗設染毒劑量分別為2.5、5.0、10.0 g/kg的實驗組，蒸餾水陰性對照組和環磷酰胺陽性對照組（40 mg/kg）。制備含復方葛丹膠囊樣品終質量濃度分別為0.125、0.250、0.500 g/ml的樣品溶液，ig給藥，給藥量為0.2 ml/10 g，每天1次，持續5 d。首次給藥后第35天，取小鼠雙側附睪尾、制片、伊紅染色。每只小鼠計數1 000個結構完整的精子，記錄畸變類型和數量，計算精子畸變率。

2.330d喂養實驗

2.3.1喂養及取材選80只大鼠（♀♂各半）隨機分成4組，每組20只。設置復方葛丹膠囊低、中、高劑量組（0.67、1.33、2.67 g/kg，分別為人體推薦用量的25、50、100倍劑量）和蒸餾水陰性對照組，每天ig給藥1次，持續30 d。每周稱1次體質量，稱2次食物剩余量和撒食量，計算每周攝食量與體質量增量的比值（即食物利用率）。實驗第31天禁食16 h后，稱取動物體質量（供測定計算肝、脾、腎、睪丸等臟器系數）后，經腹主動脈取血，進行血液學和生化指標的測定，解剖動物并取各臟器組織。

2.3.2血液學和生化指標的測定血液學測定采用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝血，測定指標包括血紅蛋白、紅細胞計數、白細胞總數及其分類等。血液生化學測定采用血清，測定指標包括丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶、尿素、肌酐、膽固醇、三酰甘油、血糖、總蛋白和白蛋白，并計算白蛋白和球蛋白比值。

2.3.3臟器系數實驗結束時對所有大鼠臟器進行大體檢查；稱定臟器質量，根據臟器質量和禁食后的動物體質量之比，計算各臟器的臟器系數。將肝、脾、腎、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器固定保存，進行組織病理學檢查。

2.4統計學方法

3　結果

3.1急性毒性實驗結果

結果顯示，復方葛丹膠囊累計染毒劑量為20.0 g/kg時♀♂2組小鼠飲食、活動均處于正常狀態，體質量正常，表明復方葛丹膠囊對小鼠生長沒有影響。且小鼠未見明顯中毒癥狀，14 d內未出現死亡情況，表明復方葛丹膠囊對兩種性別小鼠的MTD均大于20 g/kg。根據急性毒性分級標準，復方葛丹膠囊屬于無毒級。

3.2遺傳毒性實驗結果

3.2.1Ames實驗2次實驗結果表明，復方葛丹膠囊各劑量組回變菌落數均未超過自發回變菌落數的2倍，不具有劑量-反應關系，試驗結果為陰性。這表明在加與不加S-9溶液時復方葛丹膠囊樣品對組氨酸營養缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102等4株實驗菌株均未見有致基因突變的作用，未呈現出遺傳毒性，結果詳見表1、表2。

表1　第1次Ames實驗結果（±s，n＝3）Tab 1　Results of the firstAmes tes（t±s，n＝3）

表1　第1次Ames實驗結果（±s，n＝3）Tab 1　Results of the firstAmes tes（t±s，n＝3）

組別復方葛丹膠囊8 μg/皿組復方葛丹膠囊40 μg/皿組復方葛丹膠囊200 μg/皿組復方葛丹膠囊1 000 μg/皿組復方葛丹膠囊5 000 μg/皿組自發回變組溶劑對照組陽性對照組TA97TA98TA100TA102不加S-9混合液125±11.6 123±9.0 115±8.5 120±10.7 117±11.5 121±9.8 119±10.1 2 241±168.5加S-9混合液130±12.0 127±11.0 132±8.3 120±9.5 125±10.5 128±10.0 136±9.7 890±91.9不加S-9混合液36±4.7 39±4.6 33±2.1 35±3.2 31±0.6 40±3.8 32±1.2 873±92.4加S-9混合液41±5.1 46±1.5 37±2.6 38±5.9 43±4.4 42±5.6 45±2.0 2 102±159.3不加S-9混合液134±9.5 141±10.6 136±8.0 133±11.5 137±11.0 135±9.8 139±10.4 974±108.5加S-9混合液149±13.0 138±12.1 145±12.5 140±9.1 142±11.6 143±12.0 150±13.5 1 130±113.0不加S-9混合液257±14.6 262±13.5 259±15.6 254±12.7 258±14.2 260±14.2 255±15.4 1 973±183.0加S-9混合液268±15.9 265±15.5 269±14.5 273±16.1 266±13.6 267±15.0 270±15.7 1 042±112.0

表2　第2次Ames實驗結果（±s，n＝3）Tab 2　Results of the secondAmes test（±s，n＝3）

表2　第2次Ames實驗結果（±s，n＝3）Tab 2　Results of the secondAmes test（±s，n＝3）

組別復方葛丹膠囊8 μg/皿組復方葛丹膠囊40 μg/皿組復方葛丹膠囊200 μg/皿組復方葛丹膠囊1 000 μg/皿組復方葛丹膠囊5 000 μg/皿組自發回變組溶劑對照組陽性對照組TA97TA98TA100TA102不加S-9混合液118±9.0 113±11.1 120±10.5 124±10.0 119±9.5 118±10.6 126±10.1 2 283±149.7加S-9混合液134±11.6 131±9.7 125±11.0 129±9.8 133±10.7 135±11.5 129±12.1 854±104.8不加S-9混合液33±2.1 38±4.0 32±1.2 42±4.2 35±3.2 34±2.6 39±5.6 896±120.5加S-9混合液41±5.0 36±3.6 44±3.8 37±5.1 40±4.6 43±3.5 45±3.1 2 173±143.3不加S-9混合液139±13.0 142±10.4 135±8.5 132±10.3 136±12.7 140±12.9 134±12.0 945±89.5加S-9混合液148±13.1 138±12.1 143±12.0 146±14.0 137±13.6 141±12.6 152±9.0 1 096±124.7不加S-9混合液261±13.5 256±14.1 263±14.6 260±15.0 253±14.0 257±14.5 264±15.6 1 954±181.4加S-9混合液265±16.0 271±15.4 267±15.7 262±16.4 270±14.2 273±15.5 269±13.0 1 082±104.1

3.2.2小鼠骨髓PCE微核實驗當小鼠性別為♂時，陰性對照組小鼠的PCE/NCE比值約為1.39，實驗組小鼠的比值約在1.37～1.39之間；當小鼠性別為♀時，陰性對照組小鼠的PCE/ NCE比值約為1.37，實驗組小鼠的比值約在1.36～1.39之間。各劑量組不同性別小鼠PCE/NCE比值均不低于陰性對照組的20%，說明復方葛丹膠囊對骨髓細胞沒有產生細胞毒性。復方葛丹膠囊各劑量組小鼠微核細胞率與陰性對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05），而環磷酰胺陽性對照組與陰性對照組比較差異有統計學意義（P＜0.01），表明復方葛丹膠囊在本實驗劑量條件下無致小鼠骨髓PCE微核作用，未呈現遺傳毒性，結果詳見表3。

表3　各組小鼠骨髓PCE微核實驗結果（±s）Tab 3　Results of marrow polychromatic erythrocytes of mice in each group（±s）

表3　各組小鼠骨髓PCE微核實驗結果（±s）Tab 3　Results of marrow polychromatic erythrocytes of mice in each group（±s）

注：與陰性對照組比較，＊P＜0.01Note：vs.negative control group，＊P＜0.01

PCE/NCE 1.37±0.27 1.39±0.22 1.37±0.27 1.39±0.25 1.19±0.25 1.39±0.26 1.36±0.25 1.37±0.26 1.37±0.24 1.22±0.22性別♂動物只數♀組別復方葛丹膠囊低劑量組復方葛丹膠囊中劑量組復方葛丹膠囊高劑量組陰性對照組陽性對照組復方葛丹膠囊低劑量組復方葛丹膠囊中劑量組復方葛丹膠囊高劑量組陰性對照組陽性對照組5 5 5 5 5 5 5 5 5 5檢查細胞個數5×1 000 5×1 000 5×1000 5×1000 5×1000 5×1000 5×1000 5×1000 5×1000 5×1000微核細胞個數9 10 10 11 134 9 11 10 9 130微核細胞率，‰1.8±0.45 2.0±0.71 2.0±1.00 2.2±0.84 26.8±4.32＊1.8±0.84 2.2±0.84 2.0±1.22 1.8±1.48 26.0±5.83＊

3.2.3小鼠精子畸變實驗復方葛丹膠囊各劑量組小鼠精子畸變率分別約為2.14%、2.40%、2.50%，與陰性對照組的精子畸變率2.34%比較差異無統計學意義（P＞0.05）；環磷酰胺陽性對照組的精子畸變率約為6.84%，與陰性對照組比較差異有統計學意義（P＜0.01）。實驗結果表明，復方葛丹膠囊未對小鼠精子畸變發生率產生明顯影響，無致小鼠精子畸變作用，未呈現遺傳毒性，結果詳見表4。

表4　各組小鼠精子畸變實驗結果（±s）Tab 4　Results of sperm abnormality test of mice in each group（±s）

表4　各組小鼠精子畸變實驗結果（±s）Tab 4　Results of sperm abnormality test of mice in each group（±s）

注：與陰性對照組比較，＊P＜0.01Note：vs.negative control group，＊P＜0.01

2.34±0.33 6.84±0.65＊組別復方葛丹膠囊低劑量組復方葛丹膠囊中劑量組復方葛丹膠囊高劑量組陰性對照組陽性對照組動物只數　胖頭　雙頭雙尾尾折疊　畸變率，% 5　5　5 5 5受檢精子個數5×1 000畸變精子個數無鉤14香蕉型12無定型73總數1072.14±0.21 5×1 000139891202.40±0.32 5×1 0001614851252.50±0.24 5×1 000 5×1 000 13 54 11 65 7　9　8 9 5 0 82 154 0　0　1 1 6 1　0　1 1 8 0　0　0 0 5 117 342

3.330d喂養實驗結果

3.3.1一般情況30 d喂養實驗周期內各劑量組大鼠總體生長狀況良好，未出現中毒體征或死亡情況。復方葛丹膠囊各劑量組大鼠體質量增量、總進食量、總食物利用率與陰性對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05），且均在正常值范圍內，表明復方葛丹膠囊對大鼠體質量、進食量、食物利用率未發生顯著影響，結果詳見表5。

表5　各組大鼠一般情況測定結果（±s，n＝20）Tab 5　Results of general situation of rats in each group（± s，n＝20）

表5　各組大鼠一般情況測定結果（±s，n＝20）Tab 5　Results of general situation of rats in each group（± s，n＝20）

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3.3.2血液學指標測定復方葛丹膠囊各劑量組大鼠血液白細胞數目、紅細胞數目及血紅蛋白水平等血液學指標均處于正常值范圍內，且與陰性對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05），表明復方葛丹膠囊對大鼠血液學指標未產生明顯影響。結果詳見表6。

表6　各組大鼠血液流變學測定結果（±s，n＝20）Tab 6　Results of hemorheology test of rats in each group（±s，n＝20）

表6　各組大鼠血液流變學測定結果（±s，n＝20）Tab 6　Results of hemorheology test of rats in each group（±s，n＝20）

組別陰性對照組復方葛丹膠囊低劑量組復方葛丹膠囊中劑量組復方葛丹膠囊高劑量組血紅蛋白，g/L♂143.0±2.3 137.9±3.5 142.7±4.7 140.3±9.4♀♀♀140.6±5.0 142.4±5.8 137.7±7.8 138.1±6.2紅細胞計數，×1012L－1♂6.85±0.22 6.63±0.24 6.76±0.24 6.58±0.45 6.83±0.25 6.91±0.38 6.78±0.38 6.82±0.47白細胞計數，×109L－1♂16.5±3.8 16.2±3.6 16.0±2.8 15.6±3.8 10.8±2.8 11.9±3.9 10.6±2.3 12.3±3.4

3.3.3血液生化學指標復方葛丹膠囊各劑量組大鼠丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶、尿素、肌酐及總膽固醇等血液生化學指標均處于正常值范圍內，除雌性大鼠肌酐水平外，其余各組大鼠上述指標與對陰性照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05），表明復方葛丹膠囊對大鼠血液生化學未產生明顯影響，結果詳見表7。

表7　各組大鼠血液生化指標檢測結果（±s，n＝20）Tab 7　Results of blood biochemical indexes of rats in each group（±s，n＝20）

表7　各組大鼠血液生化指標檢測結果（±s，n＝20）Tab 7　Results of blood biochemical indexes of rats in each group（±s，n＝20）

注：與陰性對照組比較，＊P＜0.05Note：vs.negative control group，＊P＜0.05

性別♂♀組別陰性對照組復方葛丹膠囊低劑量組復方葛丹膠囊中劑量組復方葛丹膠囊高劑量組陰性對照組復方葛丹膠囊低劑量組復方葛丹膠囊中劑量組復方葛丹膠囊高劑量組丙氨酸轉氨酶，U/L 59.4±9.7 63.6±11.0 63.0±12.5 64.7±12.7 58.9±10.9 62.4±12.4 59.9±7.2 60.3±12.6天冬氨酸轉氨酶，U/L 163.6±9.7 167.2±22.9 165.8±17.4 168.0±23.4 161.0±20.9 176.4±15.3 151.1±25.8 172.9±31.9尿素氮，mmol/L 6.50±0.55 6.41±0.25 6.63±0.65 6.36±0.29 6.56±0.51 6.04±0.55 6.52±0.54 6.40±0.55肌酐，μmol/L 59.3±2.5 58.5±1.5 61.7±2.4 59.8±2.8 54.2±3.2 53.7±3.4 55.1±4.6 58.9±4.4＊總膽固醇，mmol/L 1.34±0.24 1.32±0.17 1.24±0.25 1.26±0.20 1.26±0.27 1.24±0.21 1.21±0.09 1.22±0.24三酰甘油，mmol/L 0.67±0.11 0.70±0.12 0.68±0.09 0.72±0.12 0.62±0.06 0.62±0.10 0.66±0.06 0.63±0.06血糖，mmol/L 6.13±0.54 5.86±0.72 5.65±0.47 5.73±0.77 5.93±0.58 5.91±0.66 6.30±0.44 5.52±0.67總蛋白，g/L 61.0±1.5 59.7±0.9 59.5±1.8 60.6±1.9 61.0±1.3 60.8±1.4 60.9±1.3 60.2±1.9白蛋白，g/L 29.0±1.2 28.7±1.2 28.5±1.0 28.9±1.2 29.2±1.5 29.5±1.0 29.9±1.8 29.4±0.5白蛋白/球蛋白0.91±0.08 0.93±0.05 0.92±0.08 0.91±0.05 0.92±0.07 0.94±0.06 0.97±0.12 0.96±0.08

3.3.4臟器系數兩種性別的實驗組大鼠的肝、脾、腎、睪丸、卵巢等臟器的臟器系數均處于正常范圍內，與陰性對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。結果表明，復方葛丹膠囊對試驗組大鼠的肝、脾、腎、睪丸、卵巢等臟器的質量和臟器系數等未產生顯著影響，結果詳見表8。

表8　各組大鼠重要臟器系數測定結果（±s，n＝20）Tab 8　Results of key organ coefficient of rats in each group（±s，n＝20）

表8　各組大鼠重要臟器系數測定結果（±s，n＝20）Tab 8　Results of key organ coefficient of rats in each group（±s，n＝20）

性別睪丸系數，%組別　空腹體質量，g 肝臟系數，%脾臟系數，%腎臟系數，%

綜上，30 d喂養實驗期內各實驗組大鼠生長發育良好，體質量增量、食物利用率、臟器系數、血液學和血液生化學指標均在正常值范圍內；大體解剖及病理組織學檢查中，各試驗組大鼠被檢臟器均未見有意義的病理改變。這提示復方葛丹膠囊對大鼠的生長、發育及健康狀況均無顯著影響，無潛在毒性。

4　討論

糖尿病屬于中醫“消渴”范疇，傳統認為其病機為陰津虧損，燥熱偏勝，疾病本質是陰虛為本，燥熱為標，屬本虛標實[6]。本產品配方中，各方藥配伍機理為：葛根，甘辛性涼，輕揚升散，具有發汗解表、解肌退熱、透發麻疹之功效，常用于熱病煩渴、陰虛消渴、熱泄熱痢、脾虛泄瀉，在方中作為君藥。丹參，性微寒而緩，具活血祛瘀、涼血活血、清熱消癰止痛之功效，又善于通行血脈、祛瘀止痛，常用于血熱瘀滯等各種瘀血病癥，在方中作為臣藥。葛根、丹參君臣相伍，可去燥熱、消瘀阻、通脈絡、暢氣機。生地黃，清熱涼血、養陰生津，性甘寒質潤，能清熱生津止渴，又因甘寒養陰、苦寒泄熱，入腎經而滋陰降火，養陰津而泄伏熱，常用于治療陰虛內熱之消渴證；黃芪健脾補中、升陽舉陷、益衛固表、利尿、托毒生肌，為補中益氣之要藥，對脾虛不能布津之消渴，能補氣生津，促進津液的生成與輸布而有消渴之效；五味子收斂固澀、益氣生津、補腎寧心，具有益氣生津止渴之功，可用于治療陰虛內熱、口渴多飲之消渴證。三者合用，生地生津養陰，黃芪補中益氣，五味子益氣生津，均可治療陰虛內熱之消渴證，在方中為佐使藥。方中各藥相伍，生津養陰，活血祛瘀，解表退熱，使諸證皆愈[7-9]。

由實驗結果可知，復方葛丹膠囊對♀♂兩種性別小鼠的MTD均大于20 g/kg，根據急性毒性分級標準，屬于無毒級；遺傳毒性實驗（Ames實驗、小鼠骨髓PCE微核實驗、小鼠精子畸形實驗）結果均為陰性，表明復方葛丹膠囊無致突變作用、無細胞毒性作用、對生殖細胞無致突變作用，不具有遺傳毒性。復方葛丹膠囊30 d喂養實驗結果顯示，各劑量組大鼠均未出現異常癥狀，也無死亡情況發生，大鼠的體質量增量、總食物利用率、血常規、血生化指標、臟器系數、大體解剖及病理組織觀察均在正常值范圍內，未見特異性病變，表明復方葛丹膠囊對SD大鼠的生長、發育及健康狀況均無顯著影響，無潛在的毒性，可以長期服用。

綜上所述，在本次實驗劑量范圍內復方葛丹膠囊安全無毒、無致基因突變作用、無細胞毒性作用、無遺傳毒性、無潛在的毒性。本文安全毒理學試驗評價的結果，為下一步開展復方葛丹膠囊的臨床試驗及應用奠定了基礎。

[1]楊文超，顧正位，路其康，等.復方葛根片對糖尿病腎病模型大鼠腎組織的保護作用[J].中國藥房，2015，26（34）：4807.

[2]姚藍，辛小紅，姚雪梅，等.古今中醫治療糖尿病用藥異同探析[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（18）：342.

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[4]金汀龍，陳霞波.臨床常用中藥降糖作用研究進展[J].浙江中西醫結合雜志，2015，25（5）：526.

[5]羅毅，付玉山.中醫治療糖尿病用藥規律及效果分析[J].現代醫藥衛生，2015，31（1）：118.

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[8]郭東臣，張惠敏，梁淑新，等.中成藥治療2型糖尿病證治-方藥的調查分析[J].中成藥，2015，37（2）：442.

[9]趙紅霞，汪文來，賈海驊，等.單味中藥防治糖尿病的現代研究探討[J].中國醫藥導刊，2013，15（10）：1692.

（編輯：林靜）

Evaluation on Toxicological Security of Compound Gedan Capsule

DING Wenyu，WANG Zhibin，DING Lina，ZHANG Xiandang（Shandong Institute of Endocrine and Metabolic Diseases，Jinan 250062，China）

OBJECTIVE：To evaluate the toxicological security of Compound gedan capsule.METHODS：According to maximal tolerance dose（MTD）test，mice were orally treated with Compound gedan capsule at the dose of 20 g/kg for 14 days in the acute toxicity test.Ames test，marrow polychromatic erythrocytes（PCE）micronucleus test and mice sperm abnormality test were set up to investigate the inherent toxicity of Compound gedan capsule.In Ames test，the number of revertant colonies was recorded after Bacillus breslaviensis histidine auxotrophy TA97，TA98，TA100 and TA102 were treated with Compound gedan capsule at 8，40，200，1 000，5 000 μg/plate combined with or without S-9 suspension.In marrow PCE micronucleus test，50 mice were divided into negative control group（distilled water），positive control group（cyclophosphamide 40 mg/kg）and Compound gedan capsule low-dose，medium-dose and high-dose groups（2.5，5.0，10.0 g/kg）with 10 mice in each group；they were given relevant medicine intragastrically；the rate of micronucleus cell，the ratio of PCE to normochromatic erythrocyte were calculated 6 h after last administration.In mice sperm abnormality test，25 mice were grouped and treated with relevant medicine（same dose as above）intragastrically once a day，for consecutive 5 d；the rate of sperm abnormality was calculated 35 days later.In thirty-days feeding study，80 rats were randomly divided into negative control group and Compound gedan capsule low-dose，medium-dose and highdose groups（0.67，1.33，2.67 g/kg）；they were given relevant medicine intragastrically for consecutive 30 d.The changes of body weight，weight gain，food intake，food utilization and blood routine index were observed in rats.RESULTS：The oral MTD in both male and female mice were more than 20 g/kg.The results of three genetic toxicity tests were all negative.The thirty-days feeding study of rats demonstrated that no toxicity symptom was found，and the index of blood test，blood biochemical index test and histopathological examination were all within normal range；no abnormal change was found.CONCLUSIONS：Compound gedan capsule is atoxic and doesn’t show genetic toxicity.No obvious toxic reaction is found in thirty-days feeding study of rats.

Compound gedan capsule；Acute toxicity；Genetic toxicity；Thirty-days feeding study；Mice；Rats

R285

A

1001-0408（2016）28-3925-05

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.28.11

山東省自主創新及成果轉化專項（No.2015ZDZX05004）；山東省醫學科學院院級科技計劃項目（No.2015-49）

＊主治醫師。研究方向：糖尿病營養健康與治療。電話：0531-82595790。E-mail：18660129597@163.com

研究員，碩士。研究方向：中藥治療糖尿病機制研究及產品開發。電話：0531-82919799。E-mail：xiandangzh@163.com

（2016-01-11

2016-04-18）