血清及唾液中MMP-9和TIMP-1的水平與不同類型口腔扁平苔蘚的相關性研究①

朱建華，楊艷娟，胡 靜，郭朝陽，李曉光，劉繼光

(佳木斯大學附屬第二醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

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血清及唾液中MMP-9和TIMP-1的水平與不同類型口腔扁平苔蘚的相關性研究①

朱建華，楊艷娟，胡 靜，郭朝陽，李曉光，劉繼光

(佳木斯大學附屬第二醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討通過檢測扁平苔蘚(OLP)患者血清及唾液中基質金屬蛋白酶因子-9(MMP-9)水平、其天然抑制劑基質金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)水平和MMP-9/TIMP-1比值,從中篩選出有利于指導OLP臨床的敏感性指標。方法：實驗分3 組，正常對照組15例，實驗組OLP糜爛型 、OLP非糜爛型各15例，采取ELISA 法對正常組和OLP糜爛型 、OLP非糜爛型血清和唾液中MMP-9含量,TIMP-1含量進行測定，對結果進行統計。結果：分析實驗數據可知，正常對照組、OLP非糜爛型、OLP糜爛型血清和唾液中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1比值依次升高,差異具有統計學意義(P<0.05),TIMP-1含量也依次升高，但差異無統計學意義(P>0.05);兩實驗組血清和唾液中MMP-9水平成正相關(r=0.685,P<0.01)、MMP-9/TIMP-1比值成正相關(r=0.704，P <0.01)。結論:唾液中MMP-9的水平和MMP-9/TIMP-1比值可作為口腔扁平苔蘚病情監控的敏感指標。

口腔扁平苔蘚；MMP-9；TIMP-1；血清；唾液；ELISA

口腔扁平苔蘚(OLP)是一種常見口腔黏膜慢性炎性疾病，患病率為0.1%～4%,是口腔黏膜病中的常見疾病。該病好發于中年，女性患者較多，多數患者感覺不適伴有疼痛等癥狀[1]。其病因和發病機制尚不十分明確，以往研究證實細胞因子、生長因子、細胞黏附分子、基質金屬蛋白酶等均參與了OLP病損局部的炎癥和免疫反應，在OLP的發生和發展中起著重要的作用[2]。血清及唾液檢測標本收集簡潔方便,適用人群廣,尤其適合術前無法取得病理組織的患者。本課題通過測定血清和唾液中MMP-9及TIMP-1的水平，研究他們的水平及兩者之間的平衡與不同類型OLP的關系，通過檢測MMP-9和TIMP-1的水平來監控病情，分析療效，它們含量之間的失衡可能參與了OLP的病情發展，把MMP-9與TIMP-1的比值作為新因素進行分析。

1 材料及方法

1.1 材料

實驗組病例均來自于在佳木斯大學附屬第二醫院口腔醫院牙周黏膜病科就診并診斷確診為口腔扁平苔蘚的患者。患者近3個月內未接受任何治療,均無全身系統性疾病,無其他口腔疾病。共采集病例樣本30例(男9例，女21例，年齡20～60歲，平均45歲)，其中糜爛型15例，非糜爛型15例。正常對照組樣本15例均來自佳木斯大學附屬第二醫院體檢科，無口腔和皮膚扁平苔蘚病史，身體健康，體檢結果各項指標正常，平均年齡40歲。

唾液樣本的采集和血清樣本的采集：樣本均需1mL，于上午8～10點進行采集，將采集完畢的樣本裝入已消毒的EP管中，盡快放于-70℃冰箱中保存。

主要儀器及試劑：MMP-9 ELISA 試劑盒、TIMP-1 ELISA 試劑盒、恒溫型水槽、酶標儀、MMP-9酶標板、TIMP-1酶標板、低溫冰箱、高速離心機。

1.2 方法

按照ELISA試劑盒說明操作，將標準MMP-9液和TIMP-1液與未知質量濃度的MMP-9和TIMP-1的標本分別與抗人的MMP-9和TIMP-1生物素親和素和抗生物素蛋白發生特異性結合，加入酶標底物，出現顏色反應。，因為顏色的深淺與MMP-9和TIMP-1質量濃度成正比，所以通過標準曲線可測出所有標本的MMP-9和TIMP-1質量濃度。450nm波長下測出所有標本的光密度(OD值)，由標準質量濃度的MMP-9和TIMP-1與其OD值做標準曲線，測出所有標本的MMP-9和TIMP-1質量濃度。

1.3 統計學方法

2 結果

經統計學分析，正常對照組、OLP非糜爛型、OLP糜爛型血清和唾液中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1比值依次升高,差異具有統計學意義(P<0.05),TIMP-1含量也依次升高，但差異無統計學意義(P>0.05);兩種檢測媒介中MMP-9濃度和MMP-9/TIMP-1均呈正相關關系(P<0.01)，表1～3。

組別MMP-9(ug/mL)TIMP-1(ug/mL)MMP-9/TIMP-1糜爛組10.15±0.010.39±0.110.38±0.09非糜爛組20.11±0.0070.37±0.090.29±0.07正常對照組30.05±0.0040.32±0.080.16±0.05P13<0.05>0.05<0.05P23<0.05>0.05<0.05P12<0.05>0.05<0.05

組別MMP-9(ug/mL)TIMP-1(ug/mL)MMP-9/TIMP-1糜爛組10.56±0.030.79±0.180.71±0.17非糜爛組20.40±0.020.76±0.130.53±0.15正常對照組30.18±0.0090.69±0.110.26±0.08P13P<0.05P>0.05P<0.05P23P<0.05P>0.05P<0.05P12P<0.05P>0.05P<0.05

表3 血清和唾液中MMP-9、MMP-9/TIMP-1的相關性分析

3 討論

血液與唾液是人體的重要體液，很多文獻報道許多細胞因子在唾液和血清中都能檢出，并且在口腔黏膜疾病的診斷，治療和預后的監控具有臨床意義[3]。本實驗中血清及唾液的采集和儲存對實驗結果有很大影響。另外，OLP的不同階段,患者的免疫狀態是變化的，血清細胞因子的水平也可能是變化的，因此,在OLP 的不同階段,,如果各病型 OLP患者的納入比例不同,那么檢測結果有可能存在差異。

以往研究證實OLP病損局部的炎癥和免疫反應有細胞因子、生長因子、細胞黏附分子、基質金屬蛋白酶等均參與[4]。基質金屬蛋白酶家族(MMPs)是一類生物活性依賴于鈣離子和鋅離子內肽酶家族,MMPs能降解幾乎所有細胞外基質,在體內參與結締組織的降解、重建、炎癥反應等生理、病理過程[5]。然而MMPs的活性受到基質金屬蛋白酶天然組織抑制劑(TIMPs)的抑制[6],MMPs與TIMPs在體內維持著細胞外基質(ECM)降解和分泌的平衡[7]。正常機體中MMPs和TIMPs的合成和降解存在一定的比例關系，當組織由于某種因素刺激時，產生炎癥反應，即誘導刺激MMPs的分泌，導致基底膜及ECM降解，而其抑制因子TIMPs含量應該升高以起到對機體的保護作用。但本實驗研究結果顯示隨OLP病情嚴重程度加重TIMP-1的含量并無明顯升高(P>0.05)，原因可能是MMPs家族與TIMP-1同源的抑制劑如TIMP-2的含量增加。當MMPs過度分泌時,該平衡被打破,MMPs水平升高，MMP-9與TIMP-1比例失衡，導致OLP的發生發展及癌變[8]。與本實驗三組血清及唾液中MMP-9含量隨著病情嚴重程度加重升高而MMP-9和TIMP-1比例失衡相吻合，差異有統計學意義(P<0.05)。說明唾液中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1在OLP臨床病情監控中有重要意義。

本實驗通過檢測糜爛型和非糜爛型 OLP 患者血清和唾液中MMP-9和TIMP-1 的含量并與正常對照組比較,結果顯示兩種類型OLP患者血清和唾液中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1與正常對照組相比明顯升高(P<0.05),進而說明MMP-9含量在OLP的病情發展中有很大的影響，雖然血清和唾液中TIMP-1含量均高于正常對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)。通過OLP患者血清和唾液樣本中MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1的相關性分析(P<0.05),證明OLP患者血清中的及唾液中的MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1均具有高度的相關性。因此，可以通過更簡潔方便的檢測OLP患者唾液中的MMP-9的含量和MMP-9/TIMP-1來監控OLP臨床病情發展。

[1]陳謙明,主編.口腔黏膜病學[M].第3版.北京:人民衛生出版社,2008：83-87

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[8]Sutinen M,KainulainenT,HurskainenT,et al.ExPression of matrixmetalloprot-Einases (MMP-1 and -2) and their inhibitors(TIMP-l,-2and-3)in Oral liehen Planus,dysPlasia,squamous cell carcinoma and lymPh node metastasis[J].BrJCa-ncer，1998,77(12):2239-2245

1.黑龍江省衛生廳項目，編號：2013215；2.2014年度黑龍江省教育廳科學技術研究項目計劃，編號：12541784。

朱建華(1959～)女，黑龍江佳木斯人，本科，教授，碩士研究生導師。

劉繼光(1961～)男，黑龍江佳木斯人，博士，教授，碩士研究生導師。E-mail:woaijiarenyz@163.com

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1008-0104(2016)05-0040-02

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