D型肉毒梭菌生物毒素防治青海田鼠的試驗研究

李生慶 張西云 胡國元 范玉霞 劉生財李志寧 李秀平 王亭亭 黃 榮 劉懷新

(青海省畜牧獸醫科學院，西寧，810016)

D型肉毒梭菌生物毒素防治青海田鼠的試驗研究

李生慶 張西云 胡國元 范玉霞 劉生財李志寧 李秀平 王亭亭 黃 榮 劉懷新

(青海省畜牧獸醫科學院，西寧，810016)

D型肉毒滅鼠劑；

(Qinghai Academy of Animal Sciences and Veterinary Medicine，Xining ，810016，China)

青藏高原草地具有涵養水源與全球氣候調節的重要作用，青藏高原草地應以保護生態環境功能為主要目的，以生態保護發展戰略為優先[1-2]。然而，近年來隨著生態環境的不斷改變，包括青海田鼠(Lasiopodomysfuscus)在內的多種害鼠對高原牧區草地植被的破壞日趨嚴重。據統計，1987～1997年的10 a間鼠害面積的年增長率達43.8%。據果洛州的實測資料，果洛州每公頃草地平均有青海田鼠1 450只，洞口4 500 個，對草地植被的破壞相當嚴重[2]。

青海田鼠為嚙齒目(Rodentia)、倉鼠科(Cricetidae)、毛足田鼠屬動物，主要分布于青海、四川省，棲息于海拔3 700～ 4 800 m的草地中，為青藏高原特有種[3]。該鼠喜棲在疏叢型草地及灌叢草地等氣候溫和，土壤疏松，牧草比較豐茂，具有高山嵩草(Kobresiapygmaea)、蕨麻(Potentillaanserina)、白穎薹草(Carexduriuscularigescens)、香附子(Cyperusrotundus)的草地上，在沿河流域沼澤地帶呈連續性分布，而在山坡嵩草草甸、低矮小葉金露梅(Potentillaparvifolia)灌叢草甸中呈島狀分布[4]。該鼠在青海省內主要分布于玉樹州、果洛州、海南州、海西州、海北州等地區[5]。

20世紀90年代，三江源地區的鼠害治理方法主要是化學和物理防治，即化學藥劑毒殺和人工捕殺?；瘜W藥物自60 年代以來，先后更換了三代藥物。早先使用的藥物毒性大，能引起動物的二次中毒和積累中毒，從而破壞食物鏈[2]。鑒于此，青海省畜牧獸醫科學院利用D型肉毒梭菌所產毒素成功研制了D型肉毒滅鼠劑。為了檢驗該滅鼠制劑對青海田鼠的防治效果，我們進行該項實驗研究。

1 材料

毒素：813批D型肉毒毒素，毒力1 000萬MLD/mL(小白鼠靜注)

動物：青海田鼠從剛察縣捕捉。

2 試驗方法

2.1 灌胃半數致死量的測定

用霍恩氏法測定LD50，以每公斤體重設置21 500、46 400、100 000、215 000 MLD四個劑量組(毒素溶液配制成每毫升為1 075、2 300、5 000、10 750 MLD/mL)。每組灌服5只田鼠，以每20 g體重分別灌服430、930、2 000、4 300 MLD毒素量，喂燕麥和胡蘿卜，觀察5 d記錄死亡結果。

2.2 有選擇適口性的測定

取健康田鼠10只，平均體重28.2 g，不分雌雄，放入一鼠籠中，試驗前喂胡蘿卜及燕麥。試驗時取形狀大小相同的2個食盆，一個放含0.1% D型肉毒滅鼠劑的小麥，另一個食盆內放無毒小麥(取常水10 mL加入100 g小麥中，反復攪拌，充分混勻后悶制24 h)，同時放入籠子中央，12 h稱剩余餌料量，并調換位置，48 h后改喂正常飼料(胡蘿卜及燕麥)，觀察記錄攝食量及死亡情況。

2.3 無選擇適口性的測定

取健康田鼠20只，平均體重28.7 g，不分雌雄，隨機分為2組，每組10只。

第一組(毒餌組)：喂含有0.1% D型肉毒滅鼠劑的小麥，即取含2億MLD/瓶 D型肉毒毒素凍干劑1瓶，加水20 mL即成為1 000 MLD/mL D型肉毒滅鼠劑，吸取1 mL加入到99 mL水中充分混合，然后再吸取10 mL加入到100 g小麥中，充分混合均勻悶制24 h后飼喂。

第二組(無毒組)：取10 mL水加入到100 g小麥中，反復攪拌充分混勻悶制24 h后飼喂。

共飼喂48 h，在12、24、48 h分別稱剩余餌料1次，48 h后喂正常飼料，觀察10 d并記錄攝食量和死亡情況。

2.4 再遇適口性的測定

取健康青海田鼠10只，不分雌雄，平均體重28 g，隨機分為2組，每組10只。

第一組為再遇試驗組，于2009年6月5日投給亞致死量D型肉毒滅鼠劑毒餌，亞致死量為1/4LD50。取形狀大小相同的2個食盆，每個放入亞致死量毒餌100 g，飼喂24 h后取出稱重，記錄消耗量并改喂正常飼料(胡蘿卜及燕麥)，3 d后，做再遇適口性試驗。

第二組為對照組，正常飼喂。

3 d后，再遇組與對照組分別用含0.4% D型肉毒滅鼠劑的小麥毒餌和無毒小麥各100 g，取2個相同的食盆，分別放入0.4%的D型肉毒滅鼠劑的小麥毒餌及無毒小麥各100 g，每12 h稱重并調換位置，觀察記錄攝食量及死亡情況。

3 試驗結果

3.1 D型肉毒毒素對青海田鼠灌胃試驗

測得813批D型肉毒毒素對青海田鼠的灌胃半數致死量(共3次)，實驗數據列于表1、表2、表3中。

表1 D型肉毒毒素對青海田鼠LD50測定(試驗1)

Tab.1 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 1)

表2 D型肉毒毒素對青海田鼠LD50測定(試驗2)

Tab.2 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 2)

表3 D型肉毒毒素對青海田鼠LD50測定(試驗3)

Tab.3 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 3)

根據表1、表2、 表3的實驗結果，得出以下結論。

試驗1：LD50=5.01萬MLD/kg體重(95%可信限為3.08～8.14萬MLD/kg體重)；

試驗2：LD50=5.11萬MLD/kg體重(95%可信限為2.43～10.8萬MLD/kg體重)；

試驗3：LD50=6.81萬MLD/kg體重(95%可信限為4.00～13.5萬MLD/kg體重)。

上述結果表明D型肉毒毒素對青海田鼠敏感。

3.2 青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑選擇適口性試驗結果

青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑毒餌及無滅鼠劑餌料采食量的比較試驗結果列于表4。

表4 選擇適口性試驗結果

Tab.4 The result of choose palatability

注：表中72 h后為觀察期，記錄其死亡情況，實驗動物給予正常飼喂，故餌料消耗標記為“0”

研究結果表明：毒餌消耗量與無毒餌消耗量相比，攝食系數為0.92，表明青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑選擇適口性良好。

3.3 青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑無選擇適口性試驗結果

采用青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑毒餌及無滅鼠劑餌料采食量的比較試驗結果。

表5 無選擇適口性試驗結果

Tab.5 The result of no choose palatability

實驗結果表明：青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑無選擇適口性很好，攝食系數(毒餌組攝食量/對照組攝食量)為0.95。

3.4 青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑再遇適口性試驗結果

表6 亞致死量毒餌攝食情況

Tab.6 Feeding coefficient of sublethal amount poison bait

表7 再遇試驗攝食情況

Tab.7 Feeding coefficient of repeating palatability

注：表中48 h后為觀察期，記錄其死亡情況，實驗動物給予正常飼喂，故餌料消耗標記為“0”

表8 對照組攝食情況

Tab.8 Feeding coefficient of control group

注：表中48 h后為觀察期，記錄其死亡情況，實驗動物給予正常飼喂，故餌料消耗標記為“0”

實驗結果表明：再遇適口性攝食系數為1.15，對照攝食系數為0.94，表明再遇適口性良好，青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑再遇時無避食現象。

4 結論

通過以小麥做基餌在實驗室內測定青海田鼠對D 型肉毒滅鼠劑的敏感性、適口性和再遇適口性。實驗結果表明：青海田鼠對D型肉毒滅鼠劑(小麥做基餌)敏感，有選擇適口性、無選擇適口性及再遇適口性均良好，D型肉毒滅鼠劑具備潛在的防治野外青海田鼠的能力。

5 討論

5.1 高原鼠兔(Ochotonacurzoniae)、高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi)和青海田鼠是危害青海省草原的3種主要害鼠種類，多年來，青海省在防治高原鼠兔和高原鼢鼠方面積累了豐富的經驗，防治技術日臻完善，但在青海田鼠防治方面，始終未能找到成功的防治方法和技術。本試驗通過D型肉毒毒素對青海田鼠的半數致死量(LD50)的測定，青海田鼠喜食性餌料的篩選以及害鼠對D型肉毒毒素的適口性、再與適口性等試驗，取得了現地滅鼠中所需的相關技術參數。

5.2 本試驗中我們測得D型肉毒毒素對青海田鼠的灌胃半數致死量分別為5.01萬MLD/kg體重，5.11萬MLD/kg體重，6.81萬MLD/kg體重，平均為5.64萬MLD/kg體重，該數據與高原上另外兩種主要害鼠高原鼠兔的敏感性(5 010 MLD/kg體重)，高原鼢鼠相比較(5 840 MLD/kg體重)其敏感性相對較差，但仍然屬于敏感范圍，因此本實驗首先從理論上證明了D型肉毒毒素作為防治高原鼢鼠具有一定的可行性。為進一步證實藥物在現地鼠害防治中的使用效果，還需進行小區滅鼠實驗作為參考。

[1] 汪詩平.青海省“三江源”地區植被退化原因及其保護策略[J].草業學報，2003，12(6)：1-9.

[2] 周立志，李迪強，王秀磊，等.三江源自然保護區鼠害類型、現狀和防治策略[J].安徽大學學報：自然科學版，2002，26(2)：87-96.

[3] 李德浩.青海經濟動物志[M].西寧：青海人民出版社，1989：689-691.

[4] 王祖鄖，羅松達衛，于曉濤，等.青海省青海田鼠鼠疫自然疫源地的發現與研究[J].中國地方病學雜志，2004，23(1)：69-72.

[5] 張宇衛，祁生源.青海省農田主要害鼠種類調查報告[J].青海農技推廣，2015(2)：15-17.

Type D botulinum rodenticide；

Research on Prevention and Control of QinghaiVoles by Type D Botulinum Rodenticide

Li Shengqing Zhang Xiyun Hu Guoyuan Fan Yuxia Liu ShengcaiLi Zhining Li Xiuping Wang Tingting Huang Rong Liu Huaixin

We used Horn’s method to measure the effect of type D botulinum rodenticide on Qinghai voles.The results showed that the gastricLD50was 50 100 MLD/kg body weight.The 95% confidence limit was 30 800-81 400 MLD/kg body weight.Qinghai voles proved sensitive to type D botulinum rodenticide.Type D botulinum rodenticide had good selective palatability to Qinghai voles with feeding coefficient 0.92.Selectiveness palatability was high with a feeding coefficient of 1.15.Repeat palatability was high with a feeding coefficient of 1.15.Type D botulinum rodenticide proved effective for control of Qinghai voles.

稿件運行過程

2016-03-25

修回日期：2016-06-15

發表日期：2016-11-10

青海田鼠；

半數致死量；

再遇適口性

Qinghai voles ；

Median lethal dose；

Repeating palatability

Q958.1

A

2310-1490(2016)04-297-04

采用霍恩氏法測得D型肉毒梭菌毒素對青海田鼠的灌胃半數致死量LD50=5.01萬MLD/kg體重，95%可信限為3.08～8.14萬MLD/kg體重，表明D型肉毒滅鼠劑對青海田鼠敏感；實驗以小麥做基餌，測得青海田鼠對小麥基餌的D型肉毒滅鼠劑有選擇適口性良好，攝食系數為0.92；無選擇適口性很好，攝食系數為1.15；再遇適口性良好，攝食系數為1.15。該項試驗研究為利用D型肉毒梭菌生物毒素進行大面積青海田鼠的防治提供了基礎數據。

李生慶，男，36歲，博士研究生，副研究員；主要從事動物疫病防治及生物毒素草地鼠害防治研究。E-mail：lsq.8008@163.com