全自動固相萃取—氣相色譜質譜法檢測動物性食品中五氯酚鈉殘留量

黃季維，梅玉琴，劉天潔，漆航

自貢市疾病預防控制中心，四川自貢643000

全自動固相萃取—氣相色譜質譜法檢測動物性食品中五氯酚鈉殘留量

黃季維，梅玉琴，劉天潔，漆航

自貢市疾病預防控制中心，四川自貢643000

目的建立全自動固相萃取—氣質法檢測食品中五氯酚鈉的方法。方法取20份豬肉、雞肉樣品，經乙酸乙酯—正己烷（50+50）混合液提取，氮氣吹干后加2 mL乙腈溶解；通過全自動固相萃取儀以1 mL/min過SLC固相萃取柱萃取，用4 mL乙腈洗脫SLC固相萃取柱上吸附的待測物，氮氣吹干，用乙酸酐—吡啶（50+50）衍生后，取有機相供氣相色譜質譜測定。結果樣品在0～200 μg/L范圍線性關系良好，相關系數r=0.999，最低檢出濃度0.3 μg/kg（5 g樣品）；10 μg/L加標樣品五氯酚鈉的回收率為108%，相對標準偏差（RSD）為5.3%；100 μg/L加標樣品五氯酚鈉的回收率為102%，RSD為3.5%；200 μg/L加標樣品五氯酚鈉的回收率為105%，RSD為4.8%。結論該方法簡便準確，適用于動物性食品中五氯酚鈉的檢測。

五氯酚鈉；動物食品；氣相色譜質譜儀；固相萃取

五氯酚鈉是一種高效的抗菌劑和木材防腐劑，同時也是一種良好的殺蟲劑和除草劑，因價格低廉，曾在世界范圍內廣泛使用；在我國，被長期用于消滅稻田內寄生血吸蟲的釘螺［1］。五氯酚鈉化學性質穩定，不易降解，五氯酚鈉廣泛使用易導致水體、環境污染并通過食物鏈進入人體導致急性慢性中毒。主要因其刺激細胞氧化過程，阻抑磷酸化過程，以致氧化過程受刺激所產生的能量不能通過磷酸化過程轉變為三磷酸腺苷和磷酸肌酸的形式予以貯存，而以熱能散發；因而對人體的呼吸系統、內分泌系統和生殖系統、神經系統、血液系統、皮膚、肝臟和腎臟等均有毒性［2-3］。許多國家對五氯酚鈉的使用以及產品中的殘留量進行了限定。它在1991年被美國聯邦列為31種最危險物質之一，美國環境保護署將其列為可疑致癌物質，限制使用；歐盟于1992年開始限制其使用；20世紀70～90年代奧地利、印度、印尼、新西蘭、瑞典、瑞士等國也相繼將其列入禁用范圍；2002年中國農業部發布了《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》和NY 5071-2002《無公害食品漁用藥物使用準則》，明確了規定了食品動物生產中禁用五氯酚鈉。目前檢測五氯酚鈉常用的方法有高效液相色譜法［4］、氣相色譜法［5］、分光光度法［6］，但面臨有機溶劑使用量大，定性、定量效果不準確，測定結果較粗放等缺點；新建立的全自動固相萃取—氣質法［7-8］對五氯酚鈉進行檢測，其精密度和準確度良好。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent Technologies 5975C氣相色譜質譜儀，LabTech全自動固相萃取儀，乙腈（色譜純，158032），乙酸乙酯（色譜純，131659），正己烷（色譜純，123838），乙酸酐（分析純，20030823），吡啶（分析純，20150226），三氯乙酸（分析純，2014110601）SLC固相萃取柱（500 mg/ 6 mL）

1.2 方法

1.2.1 五氯酚鈉標準使用液的配制吸取1.00 mL濃度為1 000 μg/mL標準儲備液（編號：24769XM）于100.00 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，再吸取1.00 mL，用純水稀釋至10.00 mL，得到100 ng/mL的標準使用液，4℃冰箱貯存，備用。

1.2.2 2，4-二溴酚內標使用液的配制稱取0.014 8 g2，4-二溴酚內標物，加10 mL丙酮配成1.48 mg/mL標準儲備液，再吸取1.00 mL標準儲備液，用丙酮定容至100.00 mL，得到14.8 μg/mL標準工作液，放置4℃冰箱貯存，備用。

1.2.3 氣相色譜質譜條件DB-5MS毛細色譜柱（30 m× 0.25 mm×0.25 μm），進樣口溫度：230℃，接口溫度：260℃，柱溫：初溫80℃，保持2 min，以10℃/min升至250℃，290℃后運行4 min。載氣：高純氦氣；流速：1.0 mL/min，進樣量：1 μL；電離方式：EI源，70 eK；離子源溫度230℃，進樣方式：不分流進樣。

1.2.4 樣品準備及提取用絞肉機絞碎樣品后，稱取5 g樣品于離心管中，加入30 μL，10 μg/mL 2，4-二溴酚內標液，20 mL 5%三氯乙酸溶液，用10 mL乙酸乙酯-正己烷混合液提取，斡旋提取2 min，然后在0℃10 000 rpm離心5 min，吸出上層有機相入具塞試管內，在60℃水浴內氮氣吹干后，加2 mL乙腈超聲溶解，10 000 rpm離心5 min，乙腈相待凈化。

1.2.5 樣品的凈化在全自動固相萃取儀安裝SLC固相萃取柱（500 mg/6 mL），加2 g無水硫酸鈉于萃取柱中，用4 mL乙腈活化柱子，連接好管路，樣品自動以1 mL/min的流速過活化好的SLC固相萃取柱，上樣完成以后再用4 mL乙腈洗脫，收集洗脫液于10 mL具塞的試管中，洗脫液60℃氮氣吹干，殘余物待衍生。

1.2.6 衍生向上述吹干的樣品中加1 mL乙酸乙酯—正己烷（1：4）衍生提取液，再加0.1 mL乙酸酐—吡啶（1：1）衍生液，密封于60℃烘箱內衍生15 min，取出冷卻后加2 mL碳酸鉀溶液，充分混勻，靜置分層，取有機相供氣相色譜質譜測定。

1.2.7 標準曲線的制作取10 μL、25 μL、50 μL、100 μL、200 μL，1.0 μg/mL五氯酚鈉標準使用液，分別加入30 μL，10 μg/mL 2，4-二溴酚內標液，1.0 mL衍生提取液，0.1 mL衍生液密封，同樣品一起衍生，獲得10～200 μg/L五氯酚鈉標準曲線。

1.2.8 樣品的測定將上述前處理后的測定液取1 μL進樣，以五氯酚鈉的保留時間定性，因內標物2，4-二溴酚的濃度固定不變，而待分析物五氯酚鈉的濃度是呈梯度的，這樣待分析物的響應值（峰面積）與內標物的響應值的比應該是呈梯度的，這個比值叫做RF，利用這個比值進行定量，而不是利用分析物的峰面積對分析物的濃度定量；將樣品峰面積響應值與內標物的響應值之比所得的值，根據標準曲線計算出五氯酚鈉的含量。

2 結果

2.1 色譜條件的確定

在該色譜條件下，五氯酚鈉衍生后的產物五氯苯乙酸酯以及內標物2，4-二溴酚在DB-5MS色譜柱上能夠有效分離，根據五氯苯乙酸酯保留時間及碎片離子進行定性、定量分析（圖1）。

圖1 五氯苯乙酸酯及2，4二溴酚總離子流圖

2.2 檢測限和線性范圍

以3倍的基線噪音計算，樣品中最低檢出限為0.3 μg/kg（5 g樣品），五氯酚鈉的濃度在0～200 μg/L時與峰面積呈良好的線性關系，相關系數r=0.999。

2.3 準確度和精密度實驗

取樣品分3組進行加標實驗，其加標樣品濃度分別為10、100、200 μg/L，同樣品操作步驟進行測定，結果發現加標樣品五氯酚鈉的回收率分別為108%、102%、105%，相對標準偏差（RSD）分別為5.3%、3.5%、4.8%，見表1。

表1 加標樣品中五氯酚鈉回收率和相對標準偏差

2.4 樣品檢測

取從市場采取的10份豬肉、10份雞肉經過上述提取，凈化，衍生過程，氣相色譜質譜法檢測，測定結果均低于方法的最低檢出限（0.3 μg/kg）。

3 討論

五氯酚鈉滅釘螺污染環境后，通過食物鏈或其他途徑進入畜體殘留于食品中，被人們食用后可引起急性中毒。大劑量的五氯酚鈉進入動物體內，可引起急性中毒死亡。小劑量的五氯酚鈉會長期污染環境，因此人們必須高度重視五氯酚鈉的毒害作用［9］，運用目前成熟，高效，穩定的檢測方法及時對各類容易污染的動物性食品進行高效的風險監測。新建立的全自動固相萃取—氣相色譜質譜法檢測動物食品中五氯酚鈉的方法，前處理自動化程度高，操作簡便，樣品在0～200 μg/L范圍線性關系良好，相關系數r=0.999，最低檢出濃度0.3 μg/kg（5 g樣品）；10 μg/L加標樣品五氯酚鈉的回收率為108%，相對標準偏差（RSD）為5.3%；100 μg/L加標樣品五氯酚鈉的回收率為102%，RSD為3.5%；200 μg/L加標樣品五氯酚鈉的回收率為105%，RSD為4.8%。結果穩定，重現性好，適用于動物性食品中五氯酚鈉的檢測。

［1］Health UDO，Services H.Agency for Toxic Substances and Disease Registry［J］.Toxicological Profile for Asbestos Update Agency for Toxic Substances and Disease Registry，1999，

［2］張彤晴，蔣麗娟，葛家春，等.五氯苯酚對漁業環境的危害與對策研究進展［J］.江蘇農業科學，2007（4）：256-259.

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［4］廖林川，顏有儀，林嵐，等.高效液相色譜法檢測生物樣品中五氯酚［J］.四川大學學報：醫學版，2004（3）：427-428.

［5］費志良，葛家春，吳軍，等.氣相色譜測定青蝦、草魚肌肉中五氯苯酚及其鈉鹽殘留總量的方法［J］.南京師大學報：自然科學版，2004（3）：70-73.

［6］肖振林，叢俏，曲蛟，等.紫外分光光度法測定土壤中五氯酚［J］.理化檢驗：化學分冊，2010（6）：660-662.

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［9］胡濱，陳一資，胡惠民.動物性食品中五氯酚鈉殘留及對人畜毒害的研究［J］.肉品衛生，2005（2）：27-29.

Full-automatic Solid-phase Extractions and Gas Chromatography-mass Spectrometry in Detecting the Sodium Pentachlorophenate Residual Quantity in Animal Food

HUANG Ji-wei，MEI Yu-qin，LIU Tian-jie，QI Hang
Disease Control and Prevention Center，Zigong，Sichuan Province，643000 China

Objective To establish a method of full-automatic solid-phase extractions and gas chromatography-mass spectrometry in detecting the sodium pentachlorophenate residual quantity in animal food.Methods 20 pieces of pork and chicken samples were selected and extracted by the ethylacetate and normal hexane（50+50）miscible liquid，and dissolved by 2mL acetonitrile after dry under nitrogen，the full-automatic SPE apparatus was adopted for extraction through SLC solid phase extraction column at a 1mL/min rate，the adsorptive determinands on the SLC solid phase extraction column was cleared by 4mL methyl cyanide，and measured by organic phase gas chromatography mass spectrometry after dry under nitrogen and derived from acetic anhydride-pyridine（50+50）.Results The linear relationship of samples was good between 0 and 200 μg/L，and the correlation coefficient r=0.999，and the lowest detecting concentration was 0.3 μg/kg（5g samples），the recovery rate of 10 μg/L spiked sample sodium pentachlorophenate was 108%，RSD was 5.3%，and the recovery rate of 10 μg/L spiked sample sodium pentachlorophenate was 102%，RSD was 3.5%，and the the recovery rate of 10 μg/L spiked sample sodium pentachlorophenate was 105%，RSD was 4.8%.Conclusion The method is easy and accurate，which is suitable for the detection of sodium pentachlorophenate residual quantity in animal food.

Sodium pentachlorophenate；Animal food；Gas chromatography mass spectrometer；Solid-phase extraction

R19

A

1672-5654（2016）10（c）-0074-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.30.074

2016-07-19）

黃季維（1988.7-），男，四川自貢人，碩士研究生，主要從事理化檢測工作。