3578例ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測結果分析

劉萍

3578例ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測結果分析

劉萍

目的探討ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測對自身免疫性疾病的診斷意義。方法收集2011～2014年在我院就診并進行ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測的患者共3578例，分析檢測結果。結果以ANA、dsDNA和ENA抗體譜中≥1種抗體檢測結果陽性即為陽性標本，結果顯示女性陽性率顯著高于男性（P＜0.01）；ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測結果陽性可見于多種臨床疾病，以系統性紅斑狼瘡（SLE）、類風濕關節炎（RA）、混合性結締組織病（MCTD）、干燥綜合征（SS）多見，其中系統性紅斑狼瘡最常見；在SLE、RA、MCTD、SS檢測中，ANA對抗原的檢測較全面，覆蓋面廣，檢測陽性率高，但特異性不強；dsDNA在SLE的診斷中具有重要意義，特異性高，但敏感性差；ENA抗體譜檢測陽性率低，特異性強。三者進行聯合檢測，可以通過互補提高自身抗體的檢出率。結論自身免疫性疾病患者體內存在多種自身抗體，聯合檢測ANA、dsDNA和ENA抗體譜有助于自身免疫性疾病的診斷和鑒別。

ANA；dsDNA；ENA抗體譜；自身免疫性疾病

自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）是由于自身抗原表位反應的抗體或自身反應性淋巴細胞參與，由自身免疫反應引發，并導致一系列組織損傷或功能障礙的疾病。目前主要是通過臨床表現和實驗室檢查來診斷AID的類型。抗核抗體（ANA）、抗雙鏈脫氧核糖核酸抗體（dsDNA）、抗核抗體譜IgG（ENA抗體譜）的檢測是AID的常用實驗室檢測指標。為了進一步研究ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測對AID診斷的作用與意義，現對2011～2014年在本院進行ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測的3578例患者檢測結果進行分析。

1 資料與方法

1.1 資料來源2011～2014年在本院就診并進行ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測的患者共3578例，其中男1862例，女1716例。年齡1～93歲，平均37歲。收集患者的臨床資料和實驗室檢測結果，以出院診斷作為疾病診斷依據。

1.2 方法抽取患者空腹靜脈血5 ml（非抗凝管），3000 r/min離心5 min，吸出血清，2～8℃保存。ANA和dsDNA檢測采用美國Trinity Biotech Plc公司產品，ENA抗體譜采用德國歐盟醫學實驗診斷有限公司產品，嚴格按照操作說明書進行檢測。

1.2.1 ANA和dsDNA抗體檢測采用酶聯免疫法（ELISA）。純化的ANA抗原或dsDNA抗原包被在相應的固相微孔內，微孔分別加入陰性對照、校準品、陽性對照，用血清稀釋液1∶21稀釋的患者血清100 μl。室溫孵育30 min，洗板5次，每孔加入辣根過氧化酶結合的山羊抗人抗體結合物100 μl，洗板5次；每孔加入TMB染色底物液100 μl，室溫避光15 min，每孔加入1N H2SO4終止液100 μl。5 min后用酶標儀（美國雷博公司WellscanMk3）檢測標本450 nm波長的OD值。標本的OD值除以校準品OD值再乘以校正因子（校準品試劑瓶上有）的積，所得值即為免疫狀態指數（ISR）值。ISR值≥1.10，則結果為陽性。

1.2.2 ENA抗體譜檢測采用免疫印跡法（IBT），步驟如下：（1）對膜條進行預處理，然后加入患者血清進行溫育30 min，再清洗3遍；（2）加入酶結合物溫育30 min，再清洗3遍；（3）加入底物溫育10 min，然后用蒸餾水清洗膜條，風干后得到檢測膜條；（4）干透后的檢測膜條用臺式掃描儀（Canon LiDE110）掃描，并采用EUROLineScan軟件評價結果；（5）以檢測膜條字母端第一段區域為質控區，可見一條黑色質控帶，其余膜條包被抗原的部位為白色則結果為陰性，其余膜條包被抗原的部位出現線性黑色則為陽性；（6）用EUROLineScan軟件根據EuroimmunAg掃描儀對膜條的掃描結果評價出陽性程度，“+”越多表示陽性程度越強。

1.3 統計學方法使用SPSS13.0軟件進行統計分析，不同組間計數資料的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 檢測結果以ANA、dsDNA、ENA抗體譜中≥1種抗體檢測結果陽性即為陽性標本，陽性標本共855例，其中男性196例，女性659例，男女比例為1∶3.36，女性明顯多于男性。男性標本1862例，陽性率為10.5%；女性標本1716例，陽性率為38.4%，女性標本陽性率顯著高于男性（P＜0.01）。

2.2 陽性標本分析ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測結果陽性可見于多種臨床疾病，如多發性硬化、低蛋白血癥、淋巴結腫大原因待查、雙手麻木查因、腦挫裂傷、間質性肺炎、2型糖尿病、雷偌綜合癥、免疫性血小板減少、慢性腎衰竭尿毒癥期、血小板減少性紫癜、發熱待查、肺間質纖維化、膽囊結石伴膽囊炎、消化道出血、溶血性貧血、腹膜后淋巴結切除術后、肺部感染、慢性乙型病毒性肝炎（重型）、雙側胸腔積液、自身免疫性溶血性貧血、風濕性心臟病、重度貧血、先天性肝纖維化、幼年特發關節炎等，最常見的有系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎、混合性結締組織病、干燥綜合征，這4者均為自身免疫性疾病，其中系統性紅斑狼瘡的例數遠多于其他疾病（表1）。

表1 陽性率排前4位的疾病分布

2.34 種最常見自身免疫性疾病患者ANA、dsDNA、ENA抗體譜檢測結果分析從表2可見，在SLE、RA、MCTD、SS這4種患者中，ANA的陽性檢出率最高，dsDNA次之，ENA抗體譜中的各抗體檢出率各不相同。

3 討論

ANA是以自身真核細胞成分作為靶抗原的一組自身抗體的總稱，泛指各種核成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體［1］。由于ANA的重要性和復雜性，目前ANA的檢測方法繁多，最常用的是間接免疫熒光法、酶聯免疫吸附法、免疫印記法，檢測ANA的標準方法是間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）［2］。本研究選擇的是酶聯免疫吸附法，因為IIF作為自身免疫病篩查手段的一個重要缺陷是其診斷特異性不強［3］，有研究表明大約有20%健康人群的血清用IIF篩查AID會得出假陽性結果，其中大部分與血清中的抗DFS70抗體有關［4-5］。實際上在多種非自身免疫病甚至健康人群血清中都存在抗DFS70抗體，而AID如系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎等血清中卻較少出現該抗體［5-7］。此外，Mahler等［8］用IIF技術檢測345例抗核糖體P蛋白抗體陽性血清時，僅得到不足30%的陽性率，提示IIF技術用于檢測某些特定自身抗體的敏感性較差。而酶聯免疫吸附法可用于大批量標本測定，在結果判斷時對操作者經驗程度要求不高，不受非DNA結合蛋白影響，可以通過滴度體現出抗體濃度高低。

臨床上女性自身免疫性疾病患者明顯多于男性患者，本研究結果也是如此。這是因為雌激素是體液免疫增強劑，而雄激素是天然的免疫抑制劑。因此女性的免疫反應強于男性，更容易患一些自身免疫性疾病。雌激素及其代謝產物水平、雌激素受體基因多態性、雌激素受體介導的信號通路等，也與自身免疫性疾病密切相關［9］。

從表2可見，在這4種最常見的自身免疫性疾病中，ANA均有較高的檢測陽性率，且高于dsDNA和ENA抗體譜，但其特異性較差。原因在于ANA是以自身真核細胞成分作為靶抗原的一組自身抗體的總稱，是一種廣泛存在的自身抗體，不僅存在于細胞核內，還存在于細胞漿，細胞骨架以及細胞分裂周期，無器官特異性和種屬特異性。因此，ANA檢測實驗只能考慮作為自身免疫性疾病的篩查實驗。dsDNA在SLE檢測中意義較大，具有較高的特異性，其參與了SLE的病理過程。dsDNA與DNA結合，形成免疫復合物沉積在腎小球基底膜，dsDNA也可直接作用于腎小球抗原造成SLE患者的腎損害。隨著疾病活動的控制，dsDNA滴度可以下降或消失。因此，dsDNA是SLE疾病診斷和治療監測的一個重要指標。dsDNA對診斷SLE的特異性高，但敏感性差，本研究中，dsDNA的陽性率是68%，存在漏檢，故dsDNA陰性并不能排除SLE。另外，本研究中，ENA抗體譜中的抗核小體和SM檢測陽性只出現在SLE疾病患者中，亦具有高度特異性，可作為SLE血清學診斷的標志性抗體。但其特異性高，陽性率低，本研究中，抗核小體陽性率為10%，抗SM抗體的陽性率為12%。

表24 種自身免疫性疾病患者ANA、dsDNA、ENA抗體譜檢測結果［n（%）］

對SLE而言，ANA、dsDNA、ENA抗體譜在其診斷中有各自的特點，聯合檢測可減少因單項實驗發生的漏檢誤診情況，起到互補作用。RA疾病患者和SLE疾病患者有許多相似的臨床癥狀，例如關節疼痛、腫脹、晨僵等。RA作為自身免疫性疾病，在本研究的檢測中ANA的檢測亦有較高的陽性率（51%），dsDNA檢測的陽性率是25%，但ENA抗體譜檢測除SSA檢測有少量陽性（6%）外，其余皆為全陰。這對RA的鑒別診斷有重要作用。

在MCTD疾病患者的檢測中，ANA的檢測陽性率為47%，dsDNA檢測的陽性率較低（8%）。另外，ENA抗體譜中的JO-1抗體只在MCTD患者的檢測中表達出陽性，這對MCTD的鑒別診斷有重要作用。

本研究在SS疾病檢測中，ANA以及ENA抗體譜中SSA檢測的陽性率達到了100%，dsDNA檢測的陽性率是30%，三者聯合檢測對其診斷和鑒別具有重要意義。

SLE、RA、MCTD、SS作為臨床較常見自身免疫性疾病，在其檢測中，ANA對抗原的檢測較全面，覆蓋面廣，檢測陽性率高，但特異性不強。dsDNA在 SLE的診斷中具有重要意義，特異性高，但敏感性差。而ENA抗體譜檢測陽性率低，但特異性強。三者進行聯合檢測，可以通過互補提高自身抗體的檢出率。因此，在臨床應用時，同時進行ANA、dsDNA和ENA抗體譜聯合檢測，將有助于自身免疫性疾病的篩查、診斷和鑒別，同時減輕患者負擔。

［1］吳希國，劉秀珍，馬越.173例系統性紅斑狼瘡患者ANA、ENA和dsDNA抗體的聯合檢測分析［J］.中國衛生檢驗雜志，2012，22（4）:781-782.

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R 446.61

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1004-0188（2016）05-0559-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.05.036

2015-12-24）

510010廣州，廣州軍區廣州總醫院檢驗科