庫車縣豬高致病性藍耳病血清學調查研究

魏魯予

(新疆阿克蘇地區庫車縣獸醫站，新疆阿克蘇 842000)

庫車縣豬高致病性藍耳病血清學調查研究

魏魯予

(新疆阿克蘇地區庫車縣獸醫站，新疆阿克蘇 842000)

通過對庫車縣生豬規模場進行調查采樣，進行豬高致病性藍耳病血清學檢測，分析本縣區域內斷奶仔豬、育肥豬、母豬、公豬高致病性藍耳病抗體效價，為全縣養殖戶的合理使用該疫苗提供參考依據。

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豬高致病性藍耳病是一種高度接觸性傳染病，豬是唯一的自然宿主，不同年齡、各種品種和用途的豬均可感染，但以妊娠母豬和1月齡以內的仔豬最易感染?；疾∝i和帶毒豬是本病的主要傳染源。

目前，豬高致病性藍耳病病毒仍是優勢流行毒株[1]，流行數年之后，其致病性和毒力仍未降低，危害大且引發疫情，一旦豬場發病，仍然呈現高發病率、高死亡率、母豬流產，特別是中、小型豬場與散養戶多發。主要侵害豬免疫系統細胞，引起局部免疫抑制，常導致繼發感染，豬群中若存在高致病性藍耳病，則豬群中發生流產、早產、死胎及木乃伊胎兒等癥狀[2]。由于高致病性藍耳病能破壞豬體免疫系統，并引起繁殖障礙和呼吸問題，常給養豬業帶來巨大損失，因此，各國科技工作者對該病的研究也在不斷深人。近年來不少豬場采取強制免疫、普遍免疫和頻繁免疫的不合理、不科學的免疫方法。

本實驗通過對庫車縣37個豬場進行采樣，分離血清394份，進行血清學抗體檢測，進而判斷在不同的飼喂階段豬高致病性藍耳病抗體水平的高低，為進一步推進豬高致病性藍耳病防控工作提供了一定的科學依據。

1 實驗材料

1.1 儀器設備

酶標儀、小型離心機、微量振蕩器、微量移液器、稀釋板、漩渦振蕩器等。

1.2 試劑

LSI豬繁殖和呼吸綜合征抗體檢測試劑盒（北京天之泰生物科技有限公司提供），包括包被PRRS抗原的96孔板、洗液（×10）、樣本稀釋液（×3）、酶標復合物、底物TMB、底物終止液希硫酸、陽性對照血清、陰性對照血清、蒸餾水。

2 實驗方法

2.1 試劑的準備

洗液（×10）：取1份清洗液加入9份的滅菌水或去離子水中，配好的液體在7天內用完；

樣本稀釋液（×3）：配制時用1體積的樣品稀釋液中加入2倍體積的蒸餾水，配好的液體在2d內用完；

2.2 樣本的準備

樣本需用樣本稀釋液進行200倍稀釋：先吸取5μl樣本加入95μl的樣本稀釋液中，混勻；再吸取5μl稀釋了20倍的液體加入ELISA反應板孔，再加入45μl的樣本稀釋液。

2.3 操作步驟

（1）將試劑放在室溫，并輕搖或者倒置混勻；

（2）將樣本和對照加入板孔中，加入50μl陽性和陰性對照，及200倍稀釋的樣品在反應板孔。陽性對照和陰性對照雙份；

（3）蓋上膜，在37℃作用60min；

（4）去膜，用300μl洗液洗滌3遍，并在吸水紙上將平板弄干；

（5）在每個孔中加入50μl酶標抗體；

（6）蓋上膜，在37℃作用60min；

（7）去膜，用300μl洗液洗滌3遍，并在吸水紙上將平板弄干；

（8）加入50μl底物，輕搖板2s；

（9）將平板放在黑暗中在20～25℃作用10min；

（10）加入50μl終止液，輕搖板混勻；

（11）在450nm下讀數并記錄結果。

2.4 試驗結果判定

（1）試驗成立條件：陽性對照的平均值OD450＞0.6，

而且陽性對照平均值/陰性對照平均值＞0.4

（2）結果解釋 結果用IPRC表示，計算公式是：

IPRC＝【（OD450樣品－OD450陰性對照平均值）/（OD450陽性對照平均值－OD450陰性對照平均值）】×100。

IPRC≤20.0，陰性；IPRC＞20.0，陽性。

3 結果

通過間接ELISA實驗對37個豬場的394份血清進行豬高致病性藍耳病抗體檢測，全縣豬高致病性藍耳病體合格率達到74.4%，其中斷奶仔豬、育肥豬、母豬、公豬抗體合格率分別為66.7%、71%、89.8%、77.8%，具體結果見表1。

表1 豬高致病性藍耳病血清學抗體效價表

圖1 豬高致病性藍耳病抗體檢測結果

4 討論

通過對394份血清學抗體檢測，可以看出，本縣在母豬水平上高致病性藍耳病防疫水平較好，其次是公豬，在斷奶仔豬方面，高致病性藍耳病防疫較弱，對此病的防疫不能忽視。

具體綜合防治措施如下：（1）建立穩定的種豬群，堅持自養自繁的原則，如引種，引入后必需建立隔離區，一般需隔離檢疫3-4周，健康者方可混群飼養[3]。（2）建立健全規?；i場的生物安全，實行封閉式管理，生產流通實現全進全出。（3）在科學的管理基礎上做好飼喂、環境控制、防疫、檢疫、隔離、消毒等工作，以提高豬群對其他病原微生物的抵抗力，從而降低繼發感染的發生率和由此造成的損失。（4）定期對豬舍和飼養區域進行消毒，保持豬舍、飼養管理用具及環境的清潔衛生。（5）做好藥物控制豬群的細菌性繼發感染的敏感階段。建議在妊娠母豬產前和產后階段、哺乳仔豬斷奶前和斷奶后、轉群等階段按預防量適當在飼料中添加一些抗菌藥物，以防治豬群的細菌性繼發感染。（6）對發病豬場要嚴密封鎖，對發病豬場周圍的豬場也要采取一定的防范措施，避免疫病擴散。對流產的胎衣、死胎及死豬做好無害化處理，產房徹底消毒，隔離病豬，對癥治療，改善飼喂條件等。

[1] 李公美，錢愛東，高云航，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒致病機制及防制研究進展[J].中國獸藥雜志，2008，42（10）：40-44.