TPO、CD56和GPC-3表達在甲狀腺乳頭狀癌中的診斷價值

席 民，胡向陽，鄭 麗，汪 巧

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TPO、CD56和GPC-3表達在甲狀腺乳頭狀癌中的診斷價值

席 民1,2，胡向陽1,3，鄭 麗4，汪 巧1,3

目的 探討甲狀腺過氧化物酶(TPO)、神經細胞黏附分子(CD56)與磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3) 蛋白表達在甲狀腺乳頭狀癌中的診斷價值。 方法 采用免疫組織化學Envision兩步法檢測80例甲狀腺乳頭狀癌和77例甲狀腺良性病變中TPO、CD56和GPC-3蛋白的表達。結果 80例甲狀腺乳頭狀癌中的TPO、CD56和GPC-3的陽性表達率分別為11.2%、8.8%、88.8%，77例甲狀腺良性病變中的陽性表達率分別為88.3%、93.5%、2.6%，兩者比較差異有統計學意義(P<0.05)。三項標記物中，以CD56診斷靈敏度最高，達93.5%；以GPC-3診斷特異度最高，達97.4%。甲狀腺乳頭狀癌中TPO、CD56和GPC-3蛋白的表達與患者性別、年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移等臨床病理參數間均無相關性。結論TPO、CD56和GPC-3在甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性病變的鑒別診斷中均有重要價值，聯合檢測尤其是聯合靈敏度最高的CD56及特異度最高的GPC-3，更能提高甲狀腺乳頭狀癌診斷的準確性。

甲狀腺乳頭狀癌；TPO；CD56；GPC-3

斷主要依據乳頭狀結構、砂礫體、毛玻璃樣核、核溝、核內包涵體等典型特征。然而，一些甲狀腺良性病變亦可伴有乳頭狀增生或毛玻璃樣核；一些非經典型PTC也可無典型核特征，從而給HE染色下區分PTC與某些甲狀腺良性病變帶來困難，故尋找能夠幫助鑒別診斷的分子標志物顯得十分必要。該研究采用免疫組織化學法檢測甲狀腺過氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)、神經細胞黏附分子(CD56)與磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican3，GPC-3)在PTC與甲狀腺良性病變中的表達狀況，探討其對二者鑒別診斷的價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源 選取安徽醫科大學第一附屬醫院2013年～2015年期間的PTC標本80例，男16 例，女64 例；年齡16～83歲，中位年齡50歲。伴有淋巴結轉移者24例，不伴有淋巴結轉移者56例。另收集同期手術切除的甲狀腺良性病變77例(結節性甲狀腺腫35例、甲狀腺腺瘤21例、橋本氏甲狀腺炎11例)，男14例，女63例；年齡22～76歲 ，中位年齡49歲。

1.1.2 主要抗體與試劑TPO、CD56、GPC-3單克隆抗體(均為即用型、鼠抗人抗體)、二抗及DAB顯色液等均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.2 方法 所有手術切除標本經組織處理，石蠟包埋后切片，切片厚度約4μm。采用Envision免疫組化兩步法檢測TPO、CD56、GPC-3抗體在PTC和甲狀腺良性病變中的表達狀況。選用已知陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結果判定TPO陽性定位于細胞質和細胞膜，CD56陽性定位于細胞膜和(或)細胞質，GPC-3陽性定位于細胞質和(或)細胞膜，陽性產物為棕黃色,當陽性細胞數占腫瘤細胞百分比≥10%，判定為陽性。

1.4 統計學處理 使用SPSS13.0軟件進行分析，采用χ2檢驗、校正χ2檢驗及Fisher精確概率法。靈敏度(%)=真陽性病例數/(真陽性病例數+假陰性病例數)×100%；特異度(%)=真陰性病例數/(真陰性病例數+假陽性病例數)×100%；準確度(%)=真陽性病例數+真陰性病例數/(癌總例數+良性總例數)×100%。

2 結果

2.1TPO在甲狀腺病變中的表達狀況TPO陽性表達部位定位于細胞質和細胞膜。TPO在77例甲狀腺良性病變中有68例呈陽性表達，陽性率為88.3%；在80例PTC中，僅9例呈陽性表達，陽性率為11.3%。TPO在PTC與甲狀腺良性病變間的表達差異有統計學意義(χ2=93.24，P<0.05)，見表1、圖1。TPO在PTC與甲狀腺良性病變鑒別診斷中的靈敏度、特異度、準確度分別為88.8%、88.3%、88.5%。

圖1 PTC和結節性甲狀腺腫中TPO的表達 免疫組化×100

A：TPO在PTC中陰性表達；B：TPO在結節性甲狀腺腫中陽性表達

2.2CD56在甲狀腺病變中的表達狀況CD56陽性表達部位主要位于細胞膜，亦可見細胞質表達。CD56在77例甲狀腺良性病變中有72例呈陽性表達，陽性率為93.5%；在80例PTC中，僅7例呈陽性表達，陽性率為8.8%，且表達部位多位于癌與周圍正常組織交界處。CD56在PTC與甲狀腺良性病變間的表達差異有統計學意義(χ2=112.75，P<0.05),見表1、圖2。CD56在PTC與甲狀腺良性病變鑒別診斷中的靈敏度、特異度、準確度分別為91.2%、93.5%、92.3%。

A：CD56在PTC中陰性表達 ；B：CD56在濾泡腺瘤中陽性表達

2.3GPC-3在甲狀腺病變中的表達狀況GPC-3陽性表達部位主要定位于細胞質。GPC-3在80例PTC中有71例呈陽性表達，陽性率為88.8%；77例甲狀腺良性病變中，僅2例呈陽性表達，陽性率為2.6%。GPC-3在PTC與甲狀腺良性病變間的表達差異有統計學意義(χ2=117.06，P<0.05)，見表1、圖3。GPC-3在PTC與甲狀腺良性病變鑒別診斷中的靈敏度、特異度、準確度分別為88.8%、97.4%、93.0%。

2.4PTC中TPO、CD56、GPC-3蛋白的表達臨床病理參數間的關系 甲狀腺乳頭狀癌中TPO、CD56失表達及GPC-3陽性表達在不同性別、年齡、腫瘤直徑以及有無淋巴結轉移間，差異均無統計學意義。見表2。

圖3 PTC和橋本氏甲狀腺炎中GPC-3的表達 免疫組化×100

A：GPC-3在PTC中陽性表達 ；B：GPC-3在橋本氏甲狀腺炎中陰性表達

表1 TPO、CD56、GPC-3在PTC和甲狀腺良性病變中的表達狀況(n)

3 討論

TPO是甲狀腺激素(T3、T4)合成的關鍵酶，在碘的活化、酪氨酸殘基的碘化、碘化酪氨酸殘基的偶聯過程中起著重要的催化作用。近年來，國內外學者陸續開始研究甲狀腺惡性病變中TPO的表達狀況，探討其實用價值，但結論尚存在爭議。大多數報道[1-4]指出TPO在甲狀腺惡性腫瘤中低表達或表達缺失，TPO免疫染色對區分甲狀腺良、惡性病變有較高的靈敏度及特異度，而Savinetal[5]卻持相反觀點，認為TPO檢測不能用于區分甲狀腺良惡性病變。本次研究中，TPO在PTC組中僅少數陽性表達，陽性表達率顯著低于甲狀腺良性病變組。因此，本研究顯示免疫組化檢測TPO表達可以作為一個較好的輔助手段應用于PTC與甲狀腺良性病變的鑒別診斷中，且TPO失表達狀況與PTC患者年齡、性別、腫瘤大小和淋巴結轉移等臨床病理參數無關。

表2 TPO、CD56、GPC-3表達與臨床病理參數間的關系

*P>0.05

CD56是免疫球蛋白超家族中的一員，在小細胞肺癌、甲狀腺腫瘤、前列腺癌等其他惡性腫瘤中的意義仍在研究探討中。研究[6-8]顯示CD56在甲狀腺乳頭狀癌中不表達或灶性弱表達，而在正常甲狀腺組織、濾泡性腺瘤、結節性甲狀腺腫和乳頭狀增生中高表達。本研究中，CD56在甲狀腺良性病變中大多呈強陽性表達，在PTC中較少表達，差異有統計學意義；且CD56 在PTC診斷中的靈敏度(91.2%)和特異度(93.5%)更優于TPO。研究結果提示在PTC與甲狀腺良性病變的鑒別診斷中，CD56可能具有更高于TPO的潛在價值。同時，CD56在其灶性表達的7例PTC中，表達部位均主要位于癌與周圍良性或正常組織交界處，提示CD56失表達可能與腫瘤組織侵襲能力有關，國外學者ElDemellawyetal[9]也在其先前報道中提及類似結論。此外，本研究未顯示CD56在PTC淋巴結轉移組與非淋巴結轉移組間表達差異有統計學意義，提示CD56失表達可能與腫瘤組織轉移能力無關。

GPC-3是硫酸類肝素糖蛋白聚糖家族的一員，最初主要是探討其在肝癌組織[10-11]中的表達及其意義；而有關GPC-3在甲狀腺癌中的報道甚少。Yamanakaetal[12]指出GPC-3在甲狀腺惡性腫瘤中呈強陽性表達，且表達模式與肝癌類似，而國內到目前為止尚無此類研究與報道。本研究檢測了80例PTC中GPC-3的表達狀況，陽性表達率為88.8%，顯著高于甲狀腺良性病變組(2.6%)；且特異度、準確度更高于TPO與CD56，提示GPC-3可作為甲狀腺癌診斷的一項可靠標志物。Yamanakaetal[12]亦指出GPC-3于腫瘤發展早期階段表達，可作為早期診斷的標志物，而本研究中，GPC-3表達與PTC患者腫瘤直徑、有無淋巴結轉移間均無相關性，故未能對這一觀點給出驗證。

綜上所述，TPO、CD56在PTC中失表達或弱表達，在甲狀腺良性病變中表達較高；GPC-3在PTC中高表達，在甲狀腺良性病變中較少表達。TPO、CD56和GPC-3在PTC與濾泡腺瘤、橋本及伴有乳頭狀增生的結甲等甲狀腺良性病變的鑒別診斷中均有重要價值，聯合檢測尤其是聯合靈敏度最高的CD56及特異度最高的GPC-3，更能提高PTC診斷的準確性。

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The diagnostic value of expression of TPO protein CD 56 protein and GPC -3 protein in papillary thyroid carcinoma

XiMin1,2,HuXiangyang1,3,ZhengLi4,etal

(1Dept of Pathology, Anhui Medical University, Hefei 230032;2Dept of Pathology, Chuzhou City Vocational College,Chuzhou 233100;3Dept of Pathology,The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022;4Dept of Pathology, The Second People's Hospital of Hefei,Hefei 230011)

Objective To evaluate the diagnostic value of TPO, CD56 and GPC-3 in papillary thyroid carcinoma(PTC).Methods Immunohistochemical staining was performed in 80 specimens of PTC and 77 specimens of papillary benign lesions to examine the expression of TPO protein, CD56 protein and GPC-3 protein.Results The positive ratios of TPO, CD56 and GPC-3 were 11.2%, 8.8% and 88.8% in PTC, respectively, and their positive ratios in benign lesions were 88.3%, 93.5% and 2.6%. There were all statistical difference between them(P<0.05). The one which had highest diagnostic sensitivity was CD56 and it could reach 93.5%; the one which had highest diagnostic specificity was GPC-3 and it could reach 97.4% in three makers. There were no relationships between expression of TPO, CD56 and GPC-3 and the clinicopothological features including patients′ gender, age, tumor diameter and lymph node metastasis in PTC.Conclusion To evaluate the expression of TPO, CD56 and GPC-3 protein may provide reference value for the diagnosis of PTC and benign lesions. GPC-3, the one which has highest diagnostic specificity, combined with CD56 which has the highest diagnostic sensitivity of PTC, may further improve diagnostic accuracy of the PTC.

papillary thyroid carcinoma; TPO; CD56; GPC-3

R736.1

A

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.032

2016-05-19接收

國家臨床重點專科建設項目經費資助(編號：3101005004021)

1安徽醫科大學病理學教研室，合肥 230032

2滁州城市職業學院病理教研室，滁州 233100

3安徽醫科大學第一附屬醫院病理科，合肥 230022

4合肥市第二人民醫院病理科，合肥 230011

席 民，男，碩士研究生；

胡向陽，女，副教授， 碩士生導師，責任作者，E-mail：yfhxy2013@163.com

甲狀腺乳頭狀癌(papillarythyroidcarcinoma,PTC)是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的類型，其病理診