白介素-33和白介素-35在乙型肝炎治療前后的變化及意義

賴道權 鄧勇 邱艷 邱自輝 歐書強 陳宇 鄧崢

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·臨床與基礎研究·

白介素-33和白介素-35在乙型肝炎治療前后的變化及意義

賴道權 鄧勇 邱艷 邱自輝 歐書強 陳宇 鄧崢

目的 探討白介素(IL)-33和IL-35在乙型肝炎治療中的意義。方法 收集40例慢性乙型肝炎(CHB)患者治療前血清，并同時收集成功隨訪規律恩替卡韋分散片抗病毒治療6月后患者血清，另外選擇18例健康體檢者的外周血清，采用ELISA方法檢測外周血IL-33和IL-35水平表達情況。結果 正常組和CHB組IL-33水平分別為5.1±2.9 pg/mL和11.7±7.6 pg/mL，IL-35水平分別為28.9±24.7 pg/mL和271.8±480.4 pg/mL，兩組間相比差異均有統計學意義(t值分別為3.438和2.140，P值分別為0.002和0.039)。抗病毒治療6月后血清IL-33和IL-35水平均明顯下降，分別為7.1±3.8 pg/mL和46.1±29.4 pg/mL，差異有統計學意義(t值分別為2.345和2.044，P值分別為0.025和0.048)。結論 IL-33和IL-35在乙型肝炎患者血清中高表達，且治療好轉后均明顯下降，提示IL-33和IL-35參與乙型肝炎的發病過程。

肝炎；乙型；IL-33；IL-35

乙型肝炎病毒(HBV) 是一種不直接引起細胞破壞的嗜肝 DNA 病毒，其引起肝臟損傷的機制主要和機體免疫系統介導有關，宿主免疫系統識別HBV 并觸發免疫應答導致肝細胞損害，臨床表現為肝功能血清轉氨酶升高。目前一般認為 HBV 感染后細胞因子在肝臟組織損害過程中扮演著重要角色[1]，這些細胞因子的變化對引起肝組織病理損害起至關重要的作用[2]。然而，HBV感染后，哪些細胞因子參與以及如何參與肝臟組織損害過程尚未完全闡明。故本研究通過檢測慢性乙型肝炎(CHB)患者血清IL-33和IL-35水平，探討其是否參與了CHB疾病的發生及發展。

資料和方法

一、病例選擇

選擇江西省萍鄉市第二人民醫院2013年10月至2015年10月肝病科門診及住院CHB患者40例，再選擇其中使用恩替卡韋分散片規范抗病毒6個月后成功隨訪，且HBV DNA下降的乙型肝炎患者19例作為試驗組，收集治療前血清及抗病毒治療6月后血清，其中男性14例，女性5例，年齡23～54歲，平均(34.4±8.2) 歲。并選擇同期健康體檢者18例，即健康對照組(HC)，其中男性12例，女性6例，年齡23～53歲，平均年齡(34.8±11.1)歲。所有患者診斷及抗病毒治療均符合2010年制定的《慢性乙型肝炎防治指南》標準[3]，近3個月未接受過免疫調節劑(如胸腺肽、糖皮質激素)、保肝及抗病毒治療，排除合并藥物性、酒精性、自身免疫性、原發性肝癌及甲、丙、丁、戊型等病毒的重疊感染病例。所有參與研究的患者均簽署了知情同意書，且通過本院倫理委員會批準。

二、檢測方法

ELISA檢測血清細胞因子，待全部標本收集完畢后取上述凍存的血清標本室溫凍融后通過ELISA雙抗體夾心法檢測細胞因子IL-33和IL-35水平(購自美國 MAR -KET公司)，操作嚴格按照試劑盒提供的說明書進行，在酶標儀450 nm處讀取數據。乙型肝炎病毒標志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)采用化學發光法定量檢測，購自上海華科生物工程股份有限公司。生化儀(Dimension Rxl Max)檢測ALT、AST、TBil、DBil等生化指標，HBV DNA檢測儀器購自廈門安普利生物有限公司，恩替卡韋分散片由江蘇正大天晴藥業集團股份有限公司生產。

三、統計學處理

結 果

一、HC組和CHB組間年齡差異無統計學意義(P>0.05)

HC組和CHB組間生化學指標(TBil、DBil、ALT、AST)差異均有統計學意義(均P<0.05)。CHB組IL-33和IL-35水平均高于正常組，見表1。

表1 HC組和CHB組間年齡分布、TBil、ALT、AST、IL-33、IL-35水平比較(±s)

二、CHB組抗病毒治療IL-33和IL-35均較治療前明顯下降，且均P<0.05，但仍高于HC組，但均P>0.05，見表2。

表2 治療前后IL-33和IL-35水平比較(±s)

注：與HC組比較t分別為1.796和1.914；P分別為0.081和0.064

討 論

HBV感染后的臨床轉歸取決于病毒的毒力、數量和宿主的免疫應答能力。機體的免疫應答能力是防御病毒感染及病毒感染后清除的關鍵因素，其中細胞因子在病毒性肝炎中的作用愈來愈被重視，根據T淋巴細胞分泌的細胞因子不同，可以將其分為Th1、Th2、Th17和Treg細胞。大量研究表明，Th1/Th2和Th17/Treg類細胞因子的表達失衡是病毒性肝炎慢性化和不良臨床轉歸的影響因素。

IL-33是一種核內蛋白質,同時又能被釋放到細胞外，扮演著雙重角色，不但作為核內轉錄因子參與基因表達的調控，還作為細胞因子影響信號通路的轉導[4]。細胞受損或壞死而非凋亡后，IL-33被動分泌到胞外，啟動宿主免疫系統，誘導免疫應答，激活特定免疫細胞促進炎癥介質，促炎因子的釋放，發揮類似高遷移率組蛋白的警報素作用[5]。

研究證實[6]，正常肝組織的肝竇內皮細胞和門靜脈血管內皮細胞的細胞核內有IL-33表達。Mchedlidzet等[7]研究提示，肝纖維化進程中IL-33與固有免疫應答之間有重要的關系，其他研究者[8]也證實IL-33作為固有細胞免疫反應的協同刺激因子促進肝內iNKT細胞增殖與激活，增加γ干擾素的生成，參與肝臟病理生理調節過程。本研究顯示，CHB患者組IL-33水平明顯高于正常對照組，提示IL-33參與了CHB的發病過程。研究發現IL-33/ST2通過阻止Th1/Th17細胞介導肝免疫反應對伴刀豆球蛋白誘導的肝炎具有保護作用[9]，提示CHB患者發病后，IL-33水平反應性升高，起到保護肝臟作用有關。另外，通過恩替卡韋分散片抗病毒治療24周后復測上述CHB患者IL-33水平，發現患者血清IL-33水平明顯下降，但仍稍高于正常者水平。與Wang等[10]經過12周的阿德福韋抗病毒治療后，伴隨著HBV DNA的含量減少，IL-33顯著下降結果一致。

IL-35是最近發現的抗炎細胞因子，能夠調節免疫反應，從而阻止及延緩免疫性疾病的發生和發展。研究表明[11]，在人體內其大部分是由調節性 T 細胞分泌，并且是該細胞發揮免疫調節作用所必須的關鍵細胞因子[12]。Liu F等[13]研究發現，CHB患者外周血CD4+T 細胞中IL-35 的表達呈現差異性，提示IL-35在病毒感染中發揮誘導免疫耐受的重要作用。本研究顯示，CHB組IL-35水平明顯高于HC組，提示IL-35參與了CHB疾病的發病過程，與石銀月等[14]研究一致。另外，通過恩替卡韋分散片抗病毒治療24周后復測上述CHB患者IL-35水平發現，患者血清IL-35水平明顯下降，但仍稍高于正常者水平，提示CHB且控制后IL-35可逐漸恢復到正常水平，可能對維持機體正常免疫調控起到一定的作用。

因此，IL-33和IL-35在CHB的發病過程中起到了重要的作用，檢測其血清水平的變化，有利于進一步明確HBV的發病機制和預后，從而有助于指導臨床治療。

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(本文編輯：易玲)

江西省衛生計生委科技計劃課題(20154043)

337000 江西省萍鄉市第二人民醫院感染科

鄧勇，Email: 490698443@qq.com

2016-01-07)