北京地區(qū)連作草莓根際土壤中真滑刃線蟲的鑒定

李星月， 白春啟， 劉奇志， 李賀勤， 張 鴻

(1.四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所，農(nóng)業(yè)部西南作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610066； 2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，昆蟲與線蟲實(shí)驗(yàn)室， 北京 100193； 3.河南工業(yè)大學(xué) 糧油食品學(xué)院，糧食儲運(yùn)國家工程實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450001； 4.青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)與植物保護(hù)學(xué)院，山東省旱作農(nóng)業(yè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266109)

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北京地區(qū)連作草莓根際土壤中真滑刃線蟲的鑒定

李星月1，2， 白春啟3， 劉奇志2，*， 李賀勤4， 張 鴻1

(1.四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所，農(nóng)業(yè)部西南作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610066； 2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，昆蟲與線蟲實(shí)驗(yàn)室， 北京 100193； 3.河南工業(yè)大學(xué) 糧油食品學(xué)院，糧食儲運(yùn)國家工程實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450001； 4.青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)與植物保護(hù)學(xué)院，山東省旱作農(nóng)業(yè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266109)

對北京地區(qū)連作草莓土壤中占種群優(yōu)勢地位的真滑刃線蟲Aphelenchussp.，采用傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的手段進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，文中分離得到的真滑刃線蟲，蟲體形態(tài)與燕麥真滑刃AphelenchusavenaeBastian極為相似，且主要形態(tài)學(xué)測量值基本相符。在形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果的基礎(chǔ)上，結(jié)合ITS-rDNA區(qū)域序列擴(kuò)增結(jié)果與GenBank已注冊的序列比對分析，確定該線蟲為燕麥真滑刃線蟲。該線蟲的分類鑒定為其生物學(xué)及生態(tài)學(xué)特性的深入研究奠定了基礎(chǔ)，但由于該線蟲在連作草莓的根際土壤中大量存在，其是否對草莓的生長有不利影響值得進(jìn)一步探討。

連作草莓；分類鑒定；食真菌線蟲；燕麥真滑刃線蟲

草莓(FragariaananassaDuch.)是薔薇科草莓屬的宿根性多年生草本植物，原產(chǎn)于歐洲， 以其柔軟多汁、營養(yǎng)豐富而著稱，素有“水果皇后”的美稱[1]。草莓產(chǎn)業(yè)在我國長期以來保持著大規(guī)模的種植水平，并呈現(xiàn)出穩(wěn)定增長的趨勢。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國草莓種植面積已達(dá)10萬hm2，種植面積和產(chǎn)量均居世界第一位[2]。大面積的推廣種植使草莓成為許多植物寄生線蟲的適宜寄主，一些世界各地廣泛分布的種類或當(dāng)?shù)靥赜械木€蟲種類都影響著草莓的生長。線蟲對草莓的為害通常是一種隱蔽危害，大多只在根部或生長點(diǎn)附近寄生，起初通常表現(xiàn)為植株生長衰弱，但在嚴(yán)重時(shí)，會導(dǎo)致匍匐莖繁殖能力下降，產(chǎn)量明顯降低甚至絕收[3]。此外，土壤中食微線蟲以食細(xì)菌線蟲和食真菌線蟲為主，兩者同時(shí)也是土壤中線蟲主要營養(yǎng)類群，達(dá)到土壤自由生活線蟲80%[4-5]，不同的農(nóng)業(yè)系統(tǒng)中食細(xì)菌線蟲和食真菌線蟲在土壤中線蟲比例不同[6]，在不同管理的農(nóng)田土壤中食細(xì)菌線蟲的相對多度可達(dá)26.6%～76.6%，食真菌線蟲的相對多度可達(dá)2.5%～34.4%[7]。前期對不同連作年限草莓溫室土壤線蟲優(yōu)勢度及營養(yǎng)類群結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，草莓非連作地點(diǎn)土壤食真菌線蟲與連作地點(diǎn)土壤食真菌線蟲差異明顯[8]。為了進(jìn)一步分析研究該類線蟲，本研究以分離過程中在食真菌線蟲占絕對優(yōu)勢的真滑刃線蟲(Aphelenchussp.)為對象，以傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)為手段鑒定到種，明確了該類線蟲分類地位，為該線蟲的生物學(xué)及生態(tài)學(xué)特性研究奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑及溶液配制

試劑：2.5 mmol·L-1MgCl2，Tween-20，75% 乙醇，0.5 mol·L-1EDTA，Tris，HAc，dNTP，Proteinase K，Taq酶等(北京強(qiáng)辛博瑞生物技術(shù)有限公司)；線蟲固定液TAF：以每100 mL含 2 mL三乙醇胺、7 mL甲醛(38%～40%)和91 mL蒸餾水配制；也可采用固定液FA，以每100 mL含10 mL甲醛(40%)、1 mL冰醋酸和89 mL蒸餾水配制。

線蟲基因組提取緩沖液Ⅰ：以1 mL記，含PCR 水 (mili-Q 水) 885 μL，1×PCR 緩沖液含 MgCl2100 μL，1% Tween-20 10 μL，100 μg·mL-1Proteinase K 5 μL；PCR體系反應(yīng)液Ⅱ：以1個(gè)反應(yīng)體系記，含PCR 水 (mili-Q 水) 14.5 μL，1×PCR 緩沖液含 MgCl22.5 μL，dNTP 2 μL，上游引物1.5 μL，下游引物1.5μL，Taq酶0.2 μL，DNA模板2 μL；瓊脂糖凝膠Ⅲ：以200 mL記，含0.4 g瓊脂糖，40 mL 1×TAE，4 μL GoldViewTM；10×PCR 緩沖液： 100 mmol·L-1Tris-HCl (pH 8.3)，500 mmol·L-1KCl，15 mmol·L-1MgCl2；50×TAE： Tris 121 g，HAc 28.55 mL，0.5 mol·L-1EDTA 50 mL，pH 8.0。

1.2 線蟲的分離與培養(yǎng)

采用淺盤—貝曼漏斗法[9]，對2012—2013年北京市農(nóng)林科學(xué)研究院林業(yè)果樹研究所連作草莓根際采集的土壤進(jìn)行線蟲分離，再將其食真菌線蟲中的優(yōu)勢線蟲——真滑刃線蟲Aphelenchussp.單條分離出來，經(jīng)體表消毒后接種到已經(jīng)長滿灰葡萄孢真菌Botrytiscinerea菌絲的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)板上，進(jìn)行線蟲純化培養(yǎng)，用于線蟲形態(tài)學(xué)及分子鑒定[3]。

1.3 線蟲殺死固定與形態(tài)學(xué)鑒定

純化培養(yǎng)的真滑刃線蟲用熱水浴(65 ℃，3～5 min)殺死， 接著用4%甲醛固定液固定，將已固定的線蟲制成臨時(shí)玻片，置于光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)鑒定，并進(jìn)行測量和拍照。線蟲的鑒定分類參照《Soil and fresh water nematodes》[10]《中國土壤動物檢索圖鑒》[11]《植物線蟲分類學(xué)》[12]和《植物線蟲志》[13]等工具書，形態(tài)測量采用De Man公式[14]。中各字母代表如下：n(number of speciments)為所測線蟲個(gè)體數(shù)；L(body length)為蟲體體長，μm；W(greatest body width)為蟲體最大體寬，μm；T(tail length)為蟲體尾長，μm；St(stylet length)為口針總長，μm；a(body length/ greatest body length)為體長/最大體寬；b(body length/ distance from anterior end to junction of oesophagus and intestine)為體長/體前端至食道與腸連接處的距離；c(body/tail length)為體長/尾長；c’(tail length/anus body width)為尾長/肛門處體寬；V(distance form vulva to anterior end×100/body length)為體前端至陰門的距離×100/體長。

1.4 線蟲rDNA提取

取經(jīng)純化培養(yǎng)線蟲若干條，置于已用75%乙醇消毒的載玻片上，用滅菌水反復(fù)沖洗，然后挑取置0.5 mL Eppendorf中；將提取基因組rDNA 緩沖液Ⅰ加入上述Eppendorf中，然后放入-20 ℃冰箱中保持20 min(或-80 ℃冰箱中保持10 min)；取出Eppendorf在65℃水浴中保持1 h；將Eppendorf置于95 ℃水浴中保持1 min滅活蛋白酶K，立即放置冰浴冷卻；將上述Eppendorf在11 600g條件下，常溫離心2 min，收集上清液，即為線蟲rDNA懸浮液；將rDNA保存在-20 ℃用于PCR試驗(yàn)(若長期保存保存在-80 ℃)。

1.5 線蟲ITS區(qū)擴(kuò)增引物

選取4對ITS區(qū)通用引物，由北京六合華大基因科技有限公司合成，引物序列如下[15-17]：第1對引物。上游引物18S (5’-TTG ATT ACG TCC CTG CCC TTT-3’)，下游引物26S (5’-TTT AGC CGA GTG ATC CAC CG-3’)。第2對引物。上游引物rDNA2 (5’-TTG ATT ACG TTC CCT GCC CTT T-3’)，下游引物rDNA5.8S (5’-ACG AGC CGA GTG ATC CAC CG-3’)。第3對引物。上游引物S-ITS-1 (5’-TTG ATT ACG TCC CTG CCC TTT-3’)，下游引物P28S (5’-TTT CAC TCG CCG TTA CTA AGG-3’)。第4對引物。上游引物AB28 (5’-ATA TGC TTA AGT TCA GCG GGT-3’)，下游引物TW81(5’-GTT TCC GTA GGT GAA CCT GC-3’)。

1.6 PCR擴(kuò)增程序

預(yù)變性94 ℃，1 min；變性94 ℃，30 s；退火57 ℃，1 min；延伸68 ℃，1 min；共35個(gè)循環(huán)，最后1個(gè)循環(huán)結(jié)束后，延伸72 ℃，2 min。

1.7 瓊脂糖凝膠電泳

將rDNA的PCR產(chǎn)物，與2%瓊脂糖凝膠在100 V穩(wěn)壓電泳，分離30～40 min，完畢后在紫外透射儀上觀察、拍照。

1.8 PCR產(chǎn)物回收、純化、測序

切下瓊脂糖凝膠上的DNA條帶，用凝膠純化試劑盒進(jìn)行DNA回收純化，序列測定由北京六合華大基因科技有限公司完成。

1.9 數(shù)據(jù)分析

線蟲的形態(tài)學(xué)測量數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行分析。DNA擴(kuò)增產(chǎn)物序列測定后，采用Contig Express、DNAMAN等生物信息軟件結(jié)合GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) 數(shù)據(jù)庫Nucleotide Blast序列比對進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)鑒定

形態(tài)特征描述：未見雄蟲，雌蟲如圖1，身體向前逐漸變細(xì)，頭平圓，尾短柱狀，末端半圓。除頭部外體表有環(huán)紋，側(cè)區(qū)有12條側(cè)線?？卺槦o基部球，前食道呈筒狀，與卵形食道球相接，食道球直徑接近體寬，中間含有顯著月牙形瓣膜。食道腺位于食道球后，通過環(huán)繞有神經(jīng)環(huán)消化道與食道球連接。腸通過大約1.5倍體寬的峽部與食道球相連，食道腺后端，卵巢前伸，卵巢后為卵囊，約等于體寬。陰門橫裂，稍向前傾斜，位于體中后部72%～79%處，陰門唇突起。

測量值見表1。結(jié)合文獻(xiàn)描述比較，尾長/肛門處體寬c’值的測量為1.1±0.2(0.7～1.5)，略低于謝輝等1999年關(guān)于番茄、芥菜等寄主種群文獻(xiàn)描述值2.3(2.0～2.8)[14]，口針總長St的測量值18.1±0.9 (16.1～20.1)，略大于Goodey 等于1965年關(guān)于草皮寄主種群的描述值14.6(14～15)[18]，略大于謝輝等1999年關(guān)于番茄、芥菜等寄主種群文獻(xiàn)描述值15.0(13.0～15.6)[14]，其他測量特征值落在文獻(xiàn)描述特征值基本相符，因此，依據(jù)形態(tài)特征，鑒定為燕麥真滑刃(AphelenchusavenaeBastian， 1865)。分類地位：燕麥線蟲(AphelenchusavenaeBastian， 1865)，滑刃目(Aphelenchida)，滑刃亞目Aphelenchina，真滑刃總科(Aphelenchoidea)，真滑刃科(Aphelenchidae)，真滑刃屬(Aphelenchus)。

A～E. 本文的燕麥真滑刃線蟲，A—整體，B—前部，C—中部，D—陰門，E—尾部；F～G. Aphelenchus avenae Bastian, 1865[18]，F(xiàn)—整體，G—前部圖1 燕麥真滑刃線蟲(雌蟲)形態(tài)光學(xué)顯微鏡照片與文獻(xiàn)描繪圖比較Fig.1 Morphological comparison of Aphelenchus avenae (female)

表1 北京連作草莓土壤中真滑刃線蟲與其他文獻(xiàn)已描述的種群測量值比較

Table 1 Comparative female morphometrics ofAphelenchussp. from continuous-cropping strawberry rhizosphere soil in Beijing and other related species from literatures

特征值北京(本文)文獻(xiàn)Ⅰ[18]文獻(xiàn)Ⅱ[14]n201710L/μm755.6±61.1(627.6-883.6)670(551-858)640(560-740)W/μm27.0±4.6(17.4-36.6)——St/μm18.1±0.9(16.1-20.1)14.6(14-15)15.0(13.0-15.6)T/μm28.1±3.2(21.3-34.8)——a28.5±3.1(21.9-35.0)33(25-39)34(31-39)b5.3±0.4(4.4-6.2)8.3(7.2-9.2)6.6(6.0-7.1)c27.2±3.2(20.5-33.9)31(27-35)26(23-31)c'1.1±0.2(0.7-1.5)—2.3(2.0-2.8)V76.0±1.0(74-78)76.5(74-78)76(75-78)

注：—表示該文獻(xiàn)內(nèi)未檢測該指標(biāo)。

2.2 分子鑒定

ITS-PCR擴(kuò)增結(jié)果表明，如圖2，第1對引物和第3對引物擴(kuò)增產(chǎn)物大小均在1 000 bp左右，第2對引物和第4引物擴(kuò)增產(chǎn)物大小均在750 bp左右，在陰性對照中沒有PCR產(chǎn)物。將滑刃線蟲Aphelenchussp.用第2引物(rDNA2和rDNA5.8S)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列測定，產(chǎn)物大小為474 bp，再將該序列在GenBank上進(jìn)行Blast同源性檢索，發(fā)現(xiàn)同源性最高的為1999年Iwahori等在GenBank注冊的Aphelenchusavenae(登錄號AF119048.1，長度為683 bp)，相似度為100%，如圖3。與Holterman等在GenBank注冊的A.avenaeApheAve2品系(登錄號AY284640.1，長度為1594 bp)的相似度也為100%。與Okada和Kadota在GenBank注冊的A.avenaeAaF(登錄號AB368919.1，長度為631 bp)、Bert和Kumari在GenBank注冊的A.avenae33SR(登錄號JQ348399.1，長度為1 695 bp)的相似度均為99%。

M: DL2000標(biāo)準(zhǔn)DNA；1: 第1對引物；2: 第2對引物；3: 第3對引物；4: 第4對引物；5: 陰性對照圖2 北京連作草莓土壤中真滑刃線蟲4對引物的ITS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖Fig.2 Gel electrophoresis fragments of Aphelenchus sp. in continuous-cropping strawberry rhizosphere soil from Beijing by ITS-PCR

將滑刃線蟲Aphelenchussp.用第4對引物(AB28和TW81)擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行序列測定，產(chǎn)物大小為609 bp，再將該序列在GenBank上進(jìn)行Blast同源性檢索，發(fā)現(xiàn)同源性最高的為Iwahori等在注冊的A.avenae(登錄號AF119048.1，長度為683 bp)，僅有一個(gè)堿基不相同，相似度為99%，如圖4。

圖3 北京連作草莓土壤中真滑刃線蟲Aphelenchus sp.的ITS-rDNA(rDNA2和rDNA5.8S引物擴(kuò)增)序列對比結(jié)果Fig.3 Comparison of ITS-rDNA sequence of Aphelenchus sp. in continuous-cropping strawberry rhizosphere soil from Beijing and Aphelenchus avenae (ID: AF119048.1)from GenBank

圖4 北京連作草莓土壤中真滑刃線蟲Aphelenchus sp. 的ITS-rDNA(AV28和TW81引物擴(kuò)增)序列對比結(jié)果Fig.4 Comparison of ITS-rDNA sequence of Aphelenchus sp. in continuous-cropping strawberry rhizosphere soil from Beijing and Aphelenchus avenae (ID: AF119048.1) from GenBank

3 討論

本研究分離得到草莓連作土壤中的真滑刃線蟲與Goodey等[18]于1865年報(bào)道的燕麥真滑刃AphelenchusavenaeBastian極為相似，且2種線蟲的主要形態(tài)特征基本相符。結(jié)合該線蟲與文獻(xiàn)的形態(tài)測量值比較，雖然在形態(tài)鑒定過程中，形態(tài)測量數(shù)值與文獻(xiàn)報(bào)道的測量數(shù)值存在部分不一致，主要是線蟲的蟲體體長(L)和口針總長(St)較燕麥真滑刃略長，但是測量值基本在文獻(xiàn)報(bào)道測量數(shù)值的波動范圍內(nèi)，而這種線蟲的種群測量值之間的差異， 可能屬于種內(nèi)不同的地理種群之間的差異。通過ITS-rDNA區(qū)域序列擴(kuò)增結(jié)果分析，引物rDNA2/rDNA5.8S和AB28/TW81的特異性強(qiáng)，經(jīng)測序及序列比對與燕麥真滑刃的相似度很高，因此，結(jié)合形態(tài)鑒定特征，鑒定該真滑刃線蟲為燕麥真滑刃線蟲Aphelenchusavenae。

前期研究表明，燕麥真滑刃的食性是取食真菌的，分類地位為滑刃亞目Aphelenchina，真滑刃科(Aphelenchidae)[11，19]。燕麥真滑刃線蟲在世界各地都有分布，美國、法國、中國、意大利、印度、加拿大、菲律賓等國家都有報(bào)道過燕麥真滑刃線蟲，且該線蟲宿主范圍非常廣。在我國，前人在廈門地區(qū)草莓、絲瓜、油菜等植株根部都發(fā)現(xiàn)過燕麥真滑刃線蟲[3，8]。雖然，有研究表明多次于腐爛的植物組織中發(fā)現(xiàn)燕麥真滑刃線蟲，能夠在愈傷組織上繁殖，并可用煙草愈傷組織培養(yǎng)燕麥真滑刃線蟲，表明其能夠在健康組織存活并具有寄生性[20-21]，但進(jìn)一步的研究認(rèn)為該線蟲對高等植物并無危害[22]。

國內(nèi)外將燕麥滑刃線蟲作為食真菌線蟲的代表來研究線蟲對土壤氮礦化、植物生長及真菌的影響這方面的報(bào)道比較多[23-25]。有研究表明了燕麥真滑刃線蟲常被發(fā)現(xiàn)在腐爛根中是因?yàn)樗鼈円愿癄€根上的真菌菌絲為食[18]。它是一種食真菌的線蟲，但在一些極端情況下也能取食一些植物[3]。由此可以看出，該線蟲生物學(xué)特性還存在不同的觀點(diǎn)，因此其生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特性有待進(jìn)一步研究，而準(zhǔn)確鑒定該線蟲分類地位是重要環(huán)節(jié)之一。

此外，國內(nèi)外相關(guān)研究報(bào)道證明，與真滑刃屬(Aphelenchus)同為滑刃目(Aphelenchina)的滑刃屬(Aphelenchoides)線蟲，草莓滑刃線蟲(Aphelenchoidesfragariae)是為害草莓生產(chǎn)的重要病原之一， 會引起草莓春矮病的發(fā)生，且該病分布世界各地[3，8]。此外，徐建華等[26]對江蘇、浙江和上海主要草莓種植區(qū)的寄生線蟲種類和發(fā)生情況進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果鑒定出能引發(fā)草莓夏矮病的貝西滑刃線蟲(Aphelenchoidesbesseyi)。燕麥真滑刃線蟲在連作草莓的根際土壤中大量存在，是否對草莓的生長有不利影響也值得進(jìn)一步探索。

[1] 劉元靖， 周育， 陳文學(xué)， 等.草莓主要污染微生物類群抑菌清洗方法研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2015， 27 (8): 1422-1427.

[2] 任海英， 蔣桂華， 方麗， 等. 浙江省草莓炭疽病菌鑒定及生物學(xué)特性研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2011， 23 (5): 937-941.

[3] 陳嫻婷. 廈門地區(qū)草莓寄生線蟲種類調(diào)查及燕麥真滑刃線蟲(AphelenchusavenaeBastian， 1865)培養(yǎng)和發(fā)育的研究[D]. 廈門：廈門大學(xué)， 2008.

[4] SOHLENIUS B. Abundance， biomass and contribution to energy flow by soil nematodes in terrestrial ecosystems [J].Oikos， 1980， 34(2): 186-194.

[5] SOHLENIUS B， BOSTR?M S， SANDOR A. Carbon and nitrogen budgets of nematodes in arable soil [J].BiologyandFertilityofSoils， 1988， 6(1): 1-8.

[6] PARMELEE R W， ALSTON D G. Nematode trophic structure in conventional and no-tillage agroecosystems [J].JournalofNematology， 1986， 18(3): 403-407.

[7] 李琪， 梁文舉， 姜勇. 農(nóng)田土壤線蟲多樣性研究現(xiàn)狀及展望[J]. 生物多樣性， 2007， 15(2): 134-141.

[8] 白春啟. 設(shè)施草莓連作土壤線蟲因子及其土壤修復(fù)技術(shù)研究[D]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2012.

[9] 馮志新. 植物線蟲學(xué)[M]. 北京:中國農(nóng)業(yè)出版社， 2000: 170-172.

[10] GOODEY T， GOODEY J B. Soil and freshwater nematodes [M]. New York: Wiley， 1963.

[11] 尹文英. 中國土壤動物檢索圖鑒[M]. 北京: 科學(xué)出版社， 2000.

[12] 謝輝. 植物線蟲分類學(xué)[M]. 合肥:安徽科學(xué)技術(shù)出版社， 2000: 21-67.

[13] 劉維志.植物線蟲志[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社， 2004.

[14] 謝輝， 馮志新. 植物線蟲分類系統(tǒng)概述[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 1999， 14(增刊): 17-36.

[16] JOYCE S A， BURNELL A M， POWERS T O. Characterisation ofHeterorhabditisisolates by PCR amplification of segment of mtDNA and rDNA genes [J].JournalofNematology， 1994， 26(3): 260-270.

[17] VRAIN T C， WAKARCHUK D A， LEVESQUE A C， et al. Intraspecific rDNA restriction fragment length polymorphism in theXiphinemaamericanumgroup[J].FundamentalandAppliedNematology， 1992， 15(6): 563-73.

[18] GOODEY J B， HOOPER D J. A neotype ofAphelenchusavenaeBastian， 1865 and the rejection ofMetaphelenchusSteiner1943 [J].Nematologica， 1965， 11(1): 55-65.

[19] de LEY P， BLAXTER M. Systematic position and phylogeny[G]//LEE D L. The biology of nematodes. London: Taylor and Francis， 2002: 1-30.

[20] BARKER K R， DARLING H M. Reproduction ofAphelenchusavenaeon plant tissues in culture [J].Nematologica， 1965， 11(2): 162-166.

[21] BARKER K R. Parasitism of tobacco callus and Kentucky bluegrass byAphelenchusavenae[J].Phytopathology， 1963， 53(8): 870.

[22] SUTHERLAND J R. Failure of the nematodeAphelenchusavenaeBastian, 1865 to parasitize conifer seedling roots [J].PlantDiseaseReporter， 1967， 51: 367-369.

[23] INGHAM R E， TROFYMOW J A， INGHAM E R， et al. Interaction of bacteria， fungi， and their nematode grazers: effects on nutrient cycling and plant growth [J].EcologicalMonographs， 1985， 55(1):119-140.

[24] CHEN J， FERRIS H. The effects of nematode grazing on nitrogen mineralization during fungal decomposition of organic matter [J].SoilBiologyandBiochemistry， 1999， 31(9): 1265-1279.

[25] 吳紀(jì)華， 宋慈玉， 陳家寬. 食微線蟲對植物生長及土壤養(yǎng)分循環(huán)的影響[J]. 生物多樣性， 2007， 15(2): 124-133.

[26] 徐建華， 程瑚瑞， 方中達(dá). 草莓線蟲病研究Ⅰ江蘇草莓上發(fā)生的夏矮線蟲病[J]. 植物病理學(xué)報(bào)， 1989， 19(1): 11-16.

(責(zé)任編輯 張 韻)

Identification ofAphelenchussp. in continuous-cropping strawberry rhizosphere soil from Beijing

LI Xing-yue1，2， BAI Chun-qi3， LIU Qi-zhi2，*， LI He-qin4， ZHANG Hong1

(1.KeyLaboratoryofIntegratedPestManagementonCropsinSouthwest，InstituteofPlantProtection，SichuanAcademyofAgriculturalSciences，Chengdu610066，China; 2.LaboratoryofEntomologyandNematology，CollegeofPlantProtection，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China; 3.NationalEngineeringLaboratoryforGrainStorageandLogistics，SchoolofFoodScienceandTechnology，HenanUniversityofTechnology，Zhengzhou450001，China; 4.ShandongProvincialKeyLaboratoryofDrylandTechnology，CollegeofAgronomyandPlantProtection，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao266109，China)

Aphelenchussp.，a dominant nematode species in Beijing continuous-cropping strawberry soil， was identified in present study by morphological and molecular methods. The results showed that its morphology was extremely similar withAphelenchusavenaeBastian. Besides， the main morphological measurements ofAphelenchussp. andAphelenchusavenaeBastian were consistent. On the basis of morphological identification results， combining with ITS rDNA regional sequence amplification results with GenBank registered sequence alignment analysis， it was determined thatAphelenchussp. was a new strain ofAphelenchusavenae. The identification ofAphelenchussp. laid a solid foundation for the further study of its biology and ecology characteristics. SinceAphelenchussp. existed in large numbers in the rhizosphere soil of continuous-cropping strawberry， it’s needed to carry out further research to know whether it have adverse effect on the growth of strawberry or not.

continuous-cropping strawberry; taxonomic identification; fungivorous nematode;AphelenchusavenaeBastian

10.3969/j.issn.1004-1524.2016.06.18

2015-10-16

國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014BAD16B07-2)；農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201503127)

李星月(1987—)，四川內(nèi)江人，博士，助理研究員，從事有害生物綜合防治研究。E-mail：michelle0919lee@126.com

*通信作者，劉奇志，E-mail：lqzzyx163@163.com

S436.639

A

1004-1524(2016)06-1018-07

李星月， 白春啟， 劉奇志，等. 北京地區(qū)連作草莓根際土壤中真滑刃線蟲的鑒定[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，28(6)： 1018-1024.