囊胚形態對凍融單囊胚移植臨床結局的影響

柳亞南，薛俠，張四林，趙皖秋，師娟子

(西北婦女兒童醫院生殖中心，西安 710003)

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囊胚形態對凍融單囊胚移植臨床結局的影響

柳亞南，薛俠，張四林，趙皖秋，師娟子*

(西北婦女兒童醫院生殖中心，西安 710003)

目的 探討囊胚形態對凍融單囊胚移植臨床結局的影響，以便低質量囊胚更好地為臨床所用。 方法 回顧性分析2013年1～12月本生殖中心行凍融單囊胚移植(FET)的患者資料，高質量凍融單囊胚移植 231例為A組，低質量凍融單囊胚移植154例為B組。B組按年齡再次分組：≤30歲為B1組(102例)、>30歲且≤35歲為B2組(32例)、>35歲為B3組(20例)，對臨床結局進行比較。 結果 高質量與低質量凍融單囊胚移植患者的臨床妊娠率(71.00% vs.42.86%)及出生率(54.55% vs.32.47%)有顯著性差異(P<0.05)，而流產率和多胎妊娠率無顯著性差異(P>0.05)。不同年齡組的低質量凍融單囊胚移植患者的組間內膜厚度、妊娠率和流產率均無顯著性差異(P>0.05)。 結論 質量差的囊胚移植妊娠率雖低但仍有機會。

囊胚形態； 凍融單囊胚移植； 妊娠率； 流產率； 多胎妊娠率

Methods：A retrospective analysis of SVBT cycles including 231 high-quality SVBT cycles(group A)and 154 low-quality SVBT cycles(group B)between January 2013 and December 2013 was performed.The patients were subdivided to group B1(≤30 years，n=102)，B2(>30 and≤35 years，n=32)，and B3(>35 years,n=20).The clinical outcomes were compared among the groups.

Results：The clinical pregnancy rate(71.00% vs.42.86%)and live birth rate(54.55% vs.32.47%)were significantly different between high-quality and low-quality SVBT groups(P<0.05)，while the early miscarriage rate，the multiple pregnancy rate were comparable between the groups(P>0.05).There were no statistically differences in pregnancy rates，early miscarriage among the three groups with different ages(P>0.05).

Conclusions：Although the pregnancy rate is lower in low-quality blastocyst transfer，vitrified-warmed transfer still has a chance of pregnancy.

(JReprodMed2016，25(11)：1002-1005)

基于形態學參數，胚胎質量是體外受精治療成功、卵裂胚胎質量和種植率、妊娠結局之間關聯的主要預測方法[1-2]。囊胚形態和植入率、臨床妊娠率、活產率之間有特別強的相關性[3-4]。多數IVF中心會選擇優質的囊胚移植或者凍存，對于低質量囊胚不進行凍存，例如比利時有中心對囊胚的凍存標準是：D5：有內細胞團，滋養外胚層A或者B級的早期或者囊胚腔充滿、擴張和孵化囊胚；D6：內細胞團A級，滋養外胚層A或者B級的囊胚腔充滿、擴張和孵化囊胚[5]。加拿大一生殖中心的凍存標準：3BB及其以上的囊胚才予凍存[6]。因此關于低質量囊胚冷凍復蘇后的臨床結局研究的也比較少。然而低質量囊胚與高質量相比的臨床結局究竟有何不同，我們是否可以把低質量囊胚充分利用，以達到期望的結局。

資料與方法

一、研究對象

收集2013年1～12月本院生殖中心實施凍融單囊胚移植(FET)的患者資料。年齡≤40歲，子宮內膜正常的患者，自愿選擇凍融單囊胚移植，患者雙方簽署知情同意書。高質量囊胚231例為A組，低質量囊胚154例為B組。B組按年齡再次分組：≤30歲為B1組，>30且≤35歲為B2組，>35歲為B3組。

二、研究方法

1.促排卵方案、胚胎培養及評分：取卵周期中卵巢刺激依據患者個體差異采用長方案、短方案、超長方案、微刺激等。黃體中期開始垂體降調，達標后啟動促性腺激素，根據陰道B超監測卵泡發育及血清內分泌情況調整促性腺激素(Gn)用量。當B超監測有2個主導卵泡平均直徑≥18 mm時，停用Gn，肌內注射人絨毛膜促性腺激素(HCG，麗珠醫藥)5 000～10 000 U，36 h后經陰道B超引導下穿刺取卵，回收的卵母細胞用培養基置于37℃、5%CO2培養箱中培養。根據IVF和ICSI適應征，選擇授精方式。受精18 h觀察原核，D3觀察記錄卵裂情況及胚胎形態，選擇優質胚胎和可用胚胎，經患者同意后，進行移植、冷凍或者繼續囊胚培養。于D5或D6，采用Gardner評分法進行囊胚評分[7](圖1)，并將發育成囊胚的胚胎冷凍保存。本研究中，我們把3、4、5、6，AA、AB、BA、BB和AC定義為高質量囊胚；把 3、4、5、6，BC、CB和CA定義為低質量囊胚。

A組:4AA、4AB、4BA、4BB、6BB；B組：3CC圖1 囊胚形態及評級 ×400

2.胚胎冷凍：采用Crytop玻璃化冷凍法進行囊胚冷凍：將冷凍的囊胚室溫下移至E液(Kitazato，日本)中平衡10～13 min；然后轉移至玻璃液VS液中平衡30～60 s；迅速把囊胚放到Crytop環的前端，然后迅速浸入液氮。

3.胚胎復蘇：囊胚復蘇：囊胚于移植日上午復蘇，冷凍復蘇的胚胎進行輔助孵化，借此提高胚胎的著床率，我中心人工輔助孵化采用的激光打孔法。Crytop玻璃化解凍法：在37℃下，將Crytop從液氮中取出，把Crytop的前端立即全部插入37℃的TS液(Kitazato，日本)中，胚胎將從載體上自動脫落，反復洗滌1 min；迅速將胚胎移入DS液中平衡3 min后，再將胚胎移入WS1液平衡5 min；然后迅速將胚胎移入WS2液平衡5 min；最后移入囊胚培養液中等待移植。

4.胚胎移植：囊胚解凍后培養箱培養，觀察囊胚腔重新擴張判斷為囊胚存活。

5.隨訪：所有患者定期進行電話隨訪。胚胎移植后12 d根據尿妊娠試驗判斷是否生化妊娠，移植術后21～28 d根據超聲判斷臨床妊娠，孕12～13周超聲下初次進行胎兒畸形篩查。

三、統計學分析

結 果

一、患者一般情況

A、B兩組患者的年齡、不孕年限和移植時內膜厚度比較均無統計學差異(P>0.05)(表1)。

二、高、低質量凍融單囊胚移植結局比較

A組凍融單囊胚移植患者的臨床妊娠率為71.00%(164/231)、流產率為14.63%(24/164)、多胎妊娠率為1.83%(3/164)、出生率為54.55%(126/231)；B組凍融單囊胚移植患者的臨床妊娠率為42.86%(66/154)、流產率為15.15%(10/66)、多胎妊娠率為4.55%(3/66)、出生率為32.47%(50/154)。兩組比較臨床妊娠率和出生率有顯著性差異(P<0.05)(表2)，但低質量單玻璃化囊胚移植也可以獲得較高的臨床妊娠率和出生幾率。

三、不同年齡組的低質量凍融囊胚移植結局比較

低質量凍融囊胚移植患者中，B1組臨床妊娠率為44.12%(45/102)、流產率為15.56%(7/45)；B2組臨床妊娠率為50.00%(16/32)、流產率為6.25%(1/16)；B3組臨床妊娠率為25.00%(5/20)、流產率為40.00%(2/5)。3組間的內膜厚度、妊娠率和流產率的差異均無統計學意義(P>0.05)(表3)。

表1 高、低質量單玻璃化囊胚移植患者的一般情況比較(x-±s)

表2 高、低質量單玻璃化囊胚移植的臨床結局比較[ n(%)]

注：與B組相比，*P<0.05

表3 不同年齡組的低質量單玻璃化囊胚移植患者的臨床結局比較[(x-±s)，n(%)]

討 論

在輔助生殖技術治療中，現大部分中心選擇囊胚移植[8-9]，因為從胚胎培養到囊胚淘汰了具有遺傳缺陷和非整陪體率高的胚胎、囊胚和子宮內膜更同步，能有效提高種植率和妊娠率[10-11]。因此我院將不能新鮮周期移植患者的胚胎和移植后剩余胚胎，在D5或D6發育成囊胚的進行玻璃化冷凍保存，待患者需要時再進行復蘇。玻璃化是液態的物質在一定的降溫速率下，由液相直接轉變為一種玻璃狀的固體狀態的過程，內部沒有晶體結構。對于保存胚胎的溶液來說，這種玻璃狀態由于內部沒有冰晶形成，能保持其溶液狀態的分子和離子分布[12]。

我們采用回顧性分析發現：囊胚質量好，妊娠率高，囊胚質量差，妊娠率低，雖然有統計學差異，但是低質量凍融單囊胚移植也可達到42.86%的臨床妊娠率和32.47%的出生率，而兩組流產率和多胎妊娠率無顯著性差異。可能是由于樣本量較小引起的偏倚所致，低質量囊胚移植的三個年齡組的妊娠率、流產率無統計學差異，但已有不少研究證實不管是相同質量的卵裂期胚胎還是囊胚移植，其臨床妊娠率與流產率均與年齡相關。我們會進一步搜集數據研究。Alfarawati等[13]研究發現染色體非整倍體與囊胚ICM和TE 評分相關。從形態上來講，低質量囊胚具有高的染色體單體和異常發生率。Savio等[14]通過PGS研究發現染色體整倍性和正常囊胚 ICM 和 TE形態的聯系：高質量囊胚增加整倍性，低質量囊胚貌似低的整倍性。

囊胚的質量能顯著影響妊娠結局，既往有關新鮮周期囊胚移植與復蘇囊胚移植的報道同樣顯示移植囊胚質量是成功率的重要預測因子[15]，我們也得到相似的結果(71.00% 和 42.86%)。

質量差的囊胚也有妊娠機會，不應放棄冷凍。Oron等[6]小樣本研究的結果表明，移植質量差的胚胎對比質量好的胚胎，并不會增加不良產科和圍產期結局，雖然妊娠率相對低些，但是一旦臨床妊娠，可以達到和高質量胚胎相似的活產率(77.8% 和80.6%)。與我們的研究目的相符。

總之，質量差的囊胚不應該丟棄，凍融后移植有妊娠的機會。所以不具有高質量囊胚的患者，可以把低質量囊胚充分利用，而不是放棄。這樣可以減少患者的移植周期，更減輕了患者的經濟負擔。關于樣本量較小引起的偏倚，我們會進一步研究。

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[編輯：侯麗]

Blastocyst morphology influences clinical outcomes of single vitrified-warmed blastocyst transfer

LIU Ya-nan，XUE Xia，ZHANG Si-lin，ZHAO Wan-qiu，SHI Juan-zi*

TheARTcenter，NorthwestWomen’sandChildren’sHospital，Xi’an710003

Objective：To investigate the influence of blastocyst morphology on the clinical outcomes of single vitrified-warmed blastocyst transfer(SVBT).

Blastocyst morphology； Single vitrified-warmed blastocyst transfer； Pregnancy rate； Early miscarriage rate； Multiple pregnancy rate

10.3969/j.issn.1004-3845.2016.11.010

2016-01-18；

2016-02-15

陜西省衛生廳科研項目(2012D6)

柳亞南，女，河南許昌市人，碩士，臨床檢驗診斷學.(*