口香糖中多種色淀類色素的檢測方法

房英杰，顏顯輝，于軍強(qiáng)

（榮成出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 榮成 264300）

口香糖中多種色淀類色素的檢測方法

房英杰，顏顯輝，于軍強(qiáng)

（榮成出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 榮成 264300）

建立口香糖中的檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅的液相色譜分析方法。該方法利用二極管陣列檢測器中的多波長檢測模式，對色素進(jìn)行有效分離，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，質(zhì)量濃度在0.2～10.0 mg/kg時，各組分校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均大于0.999，方法的檢出限（S/N=3）為0.01～0.04 mg/kg，樣品加標(biāo)回收率均在70%～87%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.1%～6.6%，方法的靈敏度和精密度均符合相關(guān)要求，該方法具有快速、準(zhǔn)確、操作簡單等特點(diǎn)，適用于口香糖中色淀類色素的檢測。

口香糖；高效液相色譜；二極管陣列檢測器

隨著食品工業(yè)的發(fā)展，色素由于可有效改善食品的色澤，被廣泛應(yīng)用于食品加工業(yè)中[1]。食用色素是以食品著色為目的的一類食品添加劑[2]，我國對色素的使用范圍及使用量在GB 2760-2014中有明確規(guī)定[3]。色素在口香糖中的使用通常以色淀的方式添加，色淀由于水溶性差，檢測時提取困難。因此，研究一種可行的口香糖色素（含色淀）的檢測方法，可有效地控制色素的含量，保障消費(fèi)者的安全。本研究在參考各種文獻(xiàn)[4-6]的基礎(chǔ)上，建立了一種適合于口香糖中色素的測定方法。

1　試驗(yàn)材料

1.1儀器

超聲波清洗儀，HSC-12A；半自動固相萃取儀，美國supelco公司；Agilent 1260液相色譜儀，美國Agilent公司；ODS色譜柱，ZORBAX SB-C18，5 μm，150 mm×4.6 mm；漩渦混合器，IKA MS3；純水儀，密理博；電子天平，MELLTER AB204-S；離心機(jī)，日立；冰箱。

1.2試劑及溶液

檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)品、日落黃標(biāo)準(zhǔn)品、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品、靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品、誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)品和檸檬黃鋁色淀，濃度36%～39%；日落黃鋁色淀，濃度38%～42%；亮藍(lán)鋁色淀，濃度28%～31%；靛藍(lán)鋁色淀，濃度30%～～36%；誘惑紅鋁色淀，濃度38%～42%；赤蘚紅鋁色淀，濃度38%～42%。以上各試劑均購自美國卡樂康公司。

甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；乙酸銨，優(yōu)級純；氫氧化鈉，分析純；PEP-plus 500 mg/6 mL固相萃取小柱，艾杰爾；C18固相萃取小柱500 mg/6 mL；乙酸銨，分析純；氫氧化鈉，分析純；氮?dú)狻?/p>

2　試驗(yàn)方法

2.1樣品提取

稱取2.0 g樣品于50 mL離心管中，加入15 mL 60 ℃0.02 moL/L氫氧化鈉溶液，再加入5 g海砂，渦旋混勻1 min，再以3 500 r/min離心10 min，取上清。殘渣加入10 mL提取液重復(fù)提取一次，以3 500 r/min離心10min，取上清與第一次提取液合并混勻。將上清液轉(zhuǎn)移至125 mL的容量瓶中，加入30 mL正己烷，振蕩混合1 min，靜置分層后棄去正己烷層。下層液體加入30 mL的正己烷，振蕩混合1 min，靜置分層后取下層12.5 mL液體作凈化處理。

2.2樣品的凈化

采用PEP-plus 500 mg/6 mL固相萃取小柱凈化，固相萃取小柱分別用5 mL甲醇，5 mL水淋洗，12.5 mL提取液過柱，再用2 mL水淋洗柱子，吹干固相萃取小柱內(nèi)的液體，用3 mL 5%氨水甲醇洗脫。洗脫液置40 ℃水浴中氮吹至1～2 mL，加水定容至5 mL，取1.5 mL溶液置1.5 mL離心管中，10 000 r/min轉(zhuǎn)離心5 min，取上清液上機(jī)測定。

2.3儀器條件

流速：1.5 mL/min；柱溫：25℃；色譜柱：ZORBAX SB-C18，5 μm，150 mm×4.6 mm；進(jìn)樣量：20 μL；流動相：A為pH7.5的1%的乙酸銨溶液，B為甲醇∶乙腈=80∶20（體積比）；梯度洗脫程序?yàn)椋?～2.0 min，100% A；2.0～22.0 min，100%～48%A；22.0～40.0 min，48%～10%A；40.0～43.0 min，10%～100%A。二極管陣列檢測器檢測波長變化程序?yàn)椋?～8.5 min，427～610 nm；11.0～14.0 min，485～505 nm；18～23 min，630～530 nm。

3　結(jié)果與討論

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

在0.2、0.4、1.0、4.0 mg/kg和10.0 mg/kg 5個濃度范圍內(nèi)，檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅6種色素均具有較好的線性，相關(guān)系數(shù)均為0.9998。

3.2分離條件

本研究中采用梯度洗脫的方式對色素進(jìn)行分離，從圖1可看出，檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅6種色素基線完全分離，峰形尖銳對稱。

圖1　6種色素液相色譜圖

3.3檢測波長的選擇

目前國家標(biāo)《食品中合成著色劑的測定》（GB/T 5009.35-2003）采用的檢測波長為254 nm，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《食品中的誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測 高效液相色譜法》（SN/T 1743-2006）也采用這一檢測波長。本實(shí)驗(yàn)中，采用DAD檢測器對目標(biāo)色素的最大吸收波長進(jìn)行掃描，從掃描的結(jié)果可看出，檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅的紫外區(qū)外最大吸收波長分別為：427、610、485、505、630 nm和530 nm。

3.4回收率

從表1中可看出，在0.5、1.0、5.0 mg/kg 3個濃度下，檸檬黃的回收率在73.2%～77.0%，靛藍(lán)的回收率在78.6%～82.4%，日落黃回收率在78.6%～82.4%，誘惑紅回收率在80.5%～86.3%，亮藍(lán)回收率在70.8%～74.1%，赤蘚紅回收率在72.6%～74.3%，6種色素均具有較好的回收率。

表1　不同添加濃度下6種色素的回收率表

3.5精密度

從表2中可看出，在0.5、1.0、5.0 mg/kg 3個濃度下，檸檬黃精密度在4.0%～5.6%，靛藍(lán)精密度在5.0%～6.3%，日落黃精密度在3.1%～4.8%，誘惑紅精密度在5.5%～6.6%，亮藍(lán)精密度在3.5%～5.3%，赤蘚紅精密度在4.6%～5.1%，6種色素均具有較好的精密度。

表2　不同添加濃度下6種色素的精密度表

3.6檢出限

以1.0 mg/kg的色素標(biāo)準(zhǔn)品添加空白樣品，根據(jù)3倍信噪比計算檢出限，檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅的檢出限分別為0.01、0.04、0.01、0.02、0.01 mg/kg和0.02 mg/kg。

4　結(jié)語

口香糖中的檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅6種色素在0.2～10.0 mg/kg內(nèi)均具有良好的線性，加標(biāo)回收率在70%～87%，本方法具有靈敏度高、重復(fù)性好等特點(diǎn)，適用于口香糖中色素的測定。

[1]霍艷敏，王 駿，張 卉，等.高效液相色譜法同時測定冰淇淋中的10種合成色素[J].分析測試學(xué)報，2011（6）：670-673.

[2]顧宇翔，葛 宇，印 杰，等.飲料和糖果中32種水溶性色素的HPLC篩選性檢測[J].食品工業(yè)，2012（8）：142-145.

[3]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會. GB 2760-2014 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

[4]張國華，孫磊龍，楊志華.高效液相色譜測定雪糕中色素[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013（9）：2043-2045.

[5]李 偉，穆永娟，吳 凡，等.飲料中色素含量的高效液相色譜-二極管陣列測定法[J].職業(yè)與健康，2015（12）：1618-1621.

[6]王 妍，于忠飛，王麗麗.高效液相色譜法測定山楂糕中色素的方法探討[J].分析與測試，2012（5）：45-47.

Detection Method of Multiple Lake Pigments in Chewing Gum

Fang Yingjie, Yan Xianhui, Yu Junqiang
（Rongcheng Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Rongcheng 264300, China)

Liquid Chromatography analysis method for tartrazine、indigo blue、sunset yellow、temptation red、brilliant blue and erythrosine in chewing gum is established. This method uses multi wavelength detection mode in diode array detector and the pigments is separated effectively. The experimental result shows that the concentration between 0.2～10.0 mg/kg, the correlation coefcient of standard curve is greater than 0.999.The detection limits（S/N=3）for the method is 0.01～0.04 mg/kg. The rate of recovery for samples is 70%～87%; RSD is 3.1%～6.6%. The sensitivity and precision of the method met the relevant requirements. With rapidly, accurately, simple operation, this method is applicable to detection of multiple lake pigments in chewing gum .

Chewing gum; HPLC; Diode array detector

TS207.3

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.18.043