鼻咽癌組織中BLU／ZMYND10α蛋白的表達變化及意義

韋祝新，張增峰，梁珍麗，陳霜，羅殿中

（1廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021；2廣西醫科大學）

鼻咽癌組織中BLU／ZMYND10α蛋白的表達變化及意義

韋祝新1，張增峰2，梁珍麗2，陳霜1，羅殿中1

（1廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021；2廣西醫科大學）

目的 探討BLU／ZMYND10α蛋白在人鼻咽癌組織中的表達及其與鼻咽癌發生發展的關系。方法 選取鼻咽癌蠟塊標本90例（其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮）和正常鼻咽黏膜組織蠟塊標本18例，采用組織微陣列技術結合免疫組化法檢測標本中BLU／ZMYDD10α蛋白表達，分析BLU／ZMYDD10α蛋白陽性表達率與鼻咽癌患者臨床病理特征的關系。結果 鼻咽癌組織中BLU／ZMYDD10α蛋白陽性表達率低于癌旁正常鼻咽上皮組織、正常鼻咽上皮組織（P均＜0.05），鼻咽癌組織BLU／ZMYDD10α蛋白在細胞核伴或不伴細胞質陽性表達率低于正常鼻咽上皮組織和癌旁正常鼻咽上皮組織（P均＜0.05）。鼻咽癌組織中BLU／ZMYND10α蛋白表達與患者性別、腫瘤組織學分類、淋巴結轉移和TNM分期無關（P均＞0.05）。結論 BLU／ZMYND10α蛋白在鼻咽癌組織中呈低表達，其低表達可能促進鼻咽癌的發生。

鼻咽腫瘤；組織微陣列；BLU／ZMYND10α蛋白；免疫組織化學

鼻咽癌（NPC）是我國南方和東南亞地區的高發惡性腫瘤，其發病機制仍未完全清楚。NPC的發生、發展與多個癌基因和抑癌基因的激活和失活密切相關［1］。最近文獻報道，BLU／ZMYDD10α基因與某些惡性腫瘤的發生有關［2，3］，然而BLU／ZMYDD10α基因在NPC組織中的表達尚未見報道。本研究采用組織芯片結合免疫組化技術對正常鼻咽上皮組織、癌旁和NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白水平進行檢測，同時分析NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白的表達與患者臨床病理特征之間的關系，以探討BLU／ZMYDD10α在NPC發生發展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料 選擇2003年2月～2008年12月廣西醫科大學第一附屬醫院病理科保存的NPC蠟塊標本90例（其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮），患者男69例、女21例，年齡13～75（43.12±3.21）歲；患者均未行放化療。WHO的NPC組織學分類［4］：分化型83例，未分化型7例。90例NPC患者中，有69例經臨床檢查、頭頸部MRI和（或）CT、淋巴結活檢病理診斷證實頸淋巴結轉移57例，無淋巴結轉移12例。TNM分期采用2003年修改的國際抗癌聯盟（UICC）、美國腫瘤聯合會（AJCC）聯合制定修改的標準，90例NPC患者中，有58例有完整臨床資料，TNM分期如下：Ⅰ期2例，Ⅱ期18例，Ⅲ期20例，Ⅳ期18例。同時選取正常鼻咽黏膜組織蠟塊標本18例，男10例、女8例，年齡16～73（41.89 ±3.73）歲）；其性別、年齡與NPC患者比較差異無統計學意義。

1.2不同鼻咽上皮組織中BLU／ZMYDD10α蛋白檢測 組織微陣列采用美國Beecher公司的組織陣列儀制作。兔抗人多克隆抗體BLU／ZMYDD10α蛋白抗體購自Santa Cruz公司，抗兔免疫組織化學超敏SP試劑盒、正常非免疫羊血清和DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司。組織蠟塊標本采用全自動切片機連續切片，切片厚4 μm。采用免疫組織化學SP染色法，首先將標本芯片切片脫蠟，水化后置于3%H2O2中室溫封閉30 min后，滴加1∶500濃度的兔抗人多克隆抗體BLU／ZMYDD10α置于密封濕盒中4℃過夜；取出，滴入即用型生物素標記二抗，以標記過氧化物酶的鏈霉菌抗生物素蛋白，DAB顯色后，蘇木素復染，采用中性樹膠封片。陽性對照為確診的肺腺癌切片，陰性對照以PBS代替一抗。采用盲法由2位資深病理醫師顯微鏡下觀察，高倍鏡下（×400）計數1 000個（要求避開壞死區及其周邊部位）細胞，視野中棕黃色細小顆粒為細胞陽性。陽性細胞數＞20%為BLU／ZMYDD10α蛋白陽性表達［5］。

1.3統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計數資料用百分比表示，比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1不同鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白表達 正常鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白陽性表達率為94.4%（17／18），癌旁正常鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白陽性表達率為91.7%（22／24），NPC組織BLU／ZMYDD10α蛋白陽性表達率為64.4%（58／90）。NPC組織BLU／ZMYDD10α蛋白陽性表達率低于癌旁正常鼻咽上皮、正常鼻咽上皮組織（P均＜0.05）。

2.2不同鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白表達定位 正常鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白單純在細胞質陽性表達率為5.6%（1／18），在細胞核伴或不伴細胞質陽性表達率為94.4%（17／18）；癌旁正常鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白單純在細胞質陽性表達率為12.5%（3／24），在細胞核伴或不伴細胞質陽性表達率為87.5%（21／24）；鼻咽癌組織BLU／ZMYDD10α蛋白單純在細胞質陽性表達率為48.9%（44／90），在細胞核伴或不伴細胞質陽性表達率為51.1%（46／90）。正常鼻咽上皮和癌旁正常上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白在細胞核伴或不伴細胞質陽性表達率高于NPC組織（P均＜0.05）。

2.3不同臨床病理特征NPC患者的BLU／ZMYDD10α蛋白表達 見表1。

表1　不同臨床病理特征NPC患者的BLU／ZMYDD10α蛋白表達比較（例）

3　討論

研究發現，BLU／ZMYDD10α基因定位于細胞質和（或）細胞核［6，7］，主要編碼糖酵解限速酶的蛋白，能夠催化磷酸甘油轉化為磷酸烯醇式丙酮酸；同時編碼的c-myc啟動子結合蛋白（MBP-1），在細胞核內無酶活性，具有負向調控c-myc表達功能［8，9］。研究發現，原癌基因c-myc參與調控細胞的生長和分化，這可能是MBP-1抑制腫瘤細胞生長的主要原因［10］。BLU／ZMYDD10α基因位于人染色體1p35～p36，當此段基因缺失時，成神經細胞瘤、惡性黑色素瘤、嗜鉻細胞瘤、乳腺癌和肝癌等惡性腫瘤均可發生［11］。文獻報道，轉染BLU／ZMYDD10α cDNA，以染色體1p缺失的成神經細胞瘤株誘導細胞凋亡可減少低存活的癌細胞數目，因此成神經細胞瘤特征為染色體1p缺失［12］。缺失1p的成神經瘤細胞在體外被導入轉錄的BLU／ZMYDD10α mRNA后，生長受到抑制，類似于導入293細胞系，提示MBP-1具有普遍的抑制腫瘤活性。研究發現，前列腺癌細胞被導入腺病毒介導外源的MBP-1后，癌細胞可發生凋亡［9］。BLU／ZMYDD10α在非小細胞肺癌中普遍表達下調，且表達下調程度越嚴重預后越差［13］。

本研究發現在正常鼻咽上皮和癌旁正常鼻咽上皮組織中BLU／ZMYDD10α蛋白正常表達，而NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白表達下調，說明其表達下調與NPC的發生可能有關。但是，BLU／ZMYDD10α的表達水平與患者臨床特征如性別、組織學分類、淋巴結轉移及TNM分期等無關。有報道BLU／ZMYDD10α蛋白在非小細胞肺癌［8］和與HBV相關的肝腫瘤［14］中高表達，且腫瘤惡性程度與表達水平呈正相關。此類瘤細胞較正常細胞代謝率更高，而BLU／ZMYDD10α蛋白具有糖分解酶活性，當細胞代謝升高時，則呈現BLU／ZMYDD10α的高表達狀態。

研究顯示，BLU／ZMYDD10α蛋白位于細胞內不同部位，其功能活性也有不同。定位于細胞質時，具有糖酵解限速酶的酶活性；而在細胞核時，具有抑制腫瘤細胞生長的作用。本文發現，NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白在細胞核伴或不伴細胞質的陽性表達低于正常鼻咽黏膜上皮、癌旁正常鼻咽上皮組織。在正常鼻咽上皮、癌旁正常鼻咽上皮組織，大量BLU／ZMYDD10α蛋白為細胞核伴或不伴細胞質表達，而NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白單純在細胞質表達量較高，細胞核伴或不伴細胞質BLU／ZMYDD10α蛋白表達相對降低，導致在NPC上皮組織細胞核中抑制腫瘤細胞生長的MBP-1減少或缺失，c-myc活性增強，促進腫瘤的發生。

綜上所述，鼻咽癌細胞中BLU／ZMYDD10α蛋白細胞核伴或不伴細胞質表達下調，其表達變化與鼻咽癌發生相關，因此其為臨床研究鼻咽癌發病機制提供了新的方向，同時也為鼻咽癌的早期診斷提供了新的分子靶標。

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10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.015

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1002-266X（2016）21-0040-03

廣西壯族自治區衛生廳科研課題（z2014046）。

張增峰（E-mail：zfzhangphd＠163.com）

（2015-12-15）