不明原因復發(fā)性流產(chǎn)患者月經(jīng)血和外周血NK細胞亞群水平變化及意義

賈新轉，張娜，郭麗娜，趙素英，董翠，魏蘭

（1河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院，石家莊050011；2河北省胸科醫(yī)院）

不明原因復發(fā)性流產(chǎn)患者月經(jīng)血和外周血NK細胞亞群水平變化及意義

賈新轉1，張娜1，郭麗娜1，趙素英1，董翠1，魏蘭2

（1河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院，石家莊050011；2河北省胸科醫(yī)院）

目的 觀察不明原因復發(fā)性流產(chǎn)（URSA）患者月經(jīng)血和外周血自然殺傷（NK）細胞亞群水平變化，并探討其臨床意義。方法 選擇URSA患者30例（URSA組）、健康女性30例（對照組）。于月經(jīng)周期第2天抽取兩組外周血，并留取月經(jīng)血，應用流式細胞術測定CD56、CD3、CD16、CCR7、CD45RO NK細胞水平。結果 與對照組比較，URSA組外周血CD56+CD3-CD16-NK細胞、CD56+CD16+CCR7+NK細胞、CD56+CD3-CD45RO-NK細胞水平升高，CD56+CD3-CD45RO+NK細胞水平降低，月經(jīng)血CD56+CD3-CD45RO+NK細胞水平降低（P均＜0.05）；兩組月經(jīng)血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+高于外周血；URSA組外周血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+、CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-高于對照組（P均＜0.05）。結論 URSA患者CCR7優(yōu)先表達于CD16+NK細胞，其外周血、月經(jīng)血CD45RO+NK細胞均較少，對月經(jīng)和外周血NK細胞亞群進行檢測有助于URSA的診。

不明原因復發(fā)性流產(chǎn)；月經(jīng)；自然殺傷細胞

復發(fā)性流產(chǎn)（RSA）是指連續(xù)2次或2次以上的自然流產(chǎn)，有60%～70%的RSA患者病因不明，即不明原因復發(fā)性流產(chǎn)（URSA）［1］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，自然殺傷（NK）細胞活性的改變在RSA中具有重要意義。在非孕女性的子宮內(nèi)膜與妊娠時蛻膜化的子宮膜中的NK細胞統(tǒng)稱為子宮自然殺傷（uNK）細胞，在妊娠起始、維持妊娠方面發(fā)揮重要作用，而uNK細胞數(shù)量增加或活性增強可能是導致早期流產(chǎn)的因素之一［2］。但由于uNK標本采集具有創(chuàng)傷性，且不易收集，使其檢測具有局限性。而月經(jīng)血易于收取，且可通過非侵入性方法收集。有研究發(fā)現(xiàn)，月經(jīng)血與子宮內(nèi)膜活體組織中NK細胞表面標記物的表達無統(tǒng)計學差異［3］，推測月經(jīng)血替代子宮內(nèi)膜活體組織檢測NK細胞水平具有可行性。本研究對URSA患者月經(jīng)血和外周血NK細胞亞群水平變化進行觀察，并探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料 選擇2014年8月～2015年8月在河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院生殖中心就診的URSA患者30例（URSA組），年齡25～30（27.87±1.74）歲，BMI（22.41±0.55）kg／m2，月經(jīng)周期（27.17±1.70）d。入選標準：①夫妻雙方染色體核型均正常；②盆腔彩超檢查排除生殖道器質性病變；③宮頸分泌物檢查排除生殖道感染：④生殖內(nèi)分泌激素檢查無異常，且無內(nèi)分泌疾病史；⑤抗磷脂抗體、抗核抗體等自身免疫抗體均陰性；⑥無血栓形成傾向或高凝狀態(tài)；⑦月經(jīng)周期規(guī)律，最近2個月內(nèi)未應用內(nèi)分泌或免疫調(diào)制劑（維生素D3和潑尼松龍）；⑧男方精液常規(guī)檢查無異常。同期選擇健康生育女性30例作為對照組，年齡25～30（28.27±2.46）歲，BMI（22.57±0.56）kg／m2，月經(jīng)周期（27.23±1.79）d。入選標準：≥1次活產(chǎn)且無流產(chǎn)病史，月經(jīng)周期規(guī)律，最近2個月內(nèi)未應用內(nèi)分泌或免疫調(diào)制劑，無自身免疫疾病、血栓形成傾向或高凝狀態(tài)、內(nèi)分泌疾病、重要臟器疾病。兩組年齡、BMI、月經(jīng)周期比較差異無統(tǒng)計學意義。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，研究對象均已簽署知情同意書。

1.2月經(jīng)血及外周血NK細胞亞群檢測 兩組均于月經(jīng)周期第2天，抽取空腹靜脈血3 mL，并留取月經(jīng)血5 mL（消毒陰道，將直徑1.5 mm一次性吸引管置入宮腔內(nèi)，吸引管末端接一次性5 mL注射器，輕微負壓吸取月經(jīng)血）。應用流式細胞術測定CD56、CD3、CD16、趨化因子受體7（CCR7）、CD45RO NK細胞水平。

1.3統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計量資料用±s表示，同組比較采用Wilcoxon秩檢驗，兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

兩組月經(jīng)血及外周血中NK細胞亞群水平比較見表1、2。與對照組比較，URSA組外周血CD56+CD3-CD16-NK細胞、CD56+CD16+CCR7+NK細胞、CD56+CD3-CD45RO-NK細胞水平升高，CD56+CD3-CD45RO+NK細胞水平降低，月經(jīng)血CD56+CD3-CD45RO+NK細胞水平降低（P均＜0.05）；兩組月經(jīng)血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+高于外周血；URSA組外周血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+、CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-高于對照組（P均＜0.05）。

表1　兩組外周血中NK細胞亞群水平比較（%，±s）

表1　兩組外周血中NK細胞亞群水平比較（%，±s）

組別nCD56+CD3-CD16+CD56+CD3-CD16-CD56+CD3-CD16-／CD56+CD3-CD16+CD56+CD16+CCR7-CD56+CD16+CCR7+CD56+CD16-CCR7+URSA組3044.67±6.0735.90±5.070.75±0.1923.19±6.1626.33±7.6934.78±7.57對照組3051.80±7.0521.89±4.720.82±0.2227.97±7.1715.55±3.9535.46±7.58組別nCD56+CD16-CCR7-CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-CD56+CD3-CD45RO+CD56+CD3-CD45RO-URSA組3018.27±5.841.49±0.671.14±0.221.33±0.3086.40±6.65對照組3021.63±7.762.41±0.690.63±0.216.13±1.0560.95±6.33

表2　兩組月經(jīng)血中NK細胞亞群水平比較（%，±s）

表2　兩組月經(jīng)血中NK細胞亞群水平比較（%，±s）

注：兩組各指標比較，P＞0.05。

組別nCD56+CD3-CD16+CD56+CD3-CD16-CD56+CD3-CD16-／CD56+CD3-CD16+CD56+CD16+CCR7-CD56+CD16+CCR7+CD56+CD16-CCR7+URSA組3012.47±4.5551.80±7.044.86±2.2410.16±4.407.56±1.9155.13±7.56對照組3013.27±4.0755.12±7.124.51±1.3811.23±4.357.46±2.0453.48±7.45組別nCD56+CD16-CCR7-CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-CD56+CD3-CD45RO+CD56+CD3-CD45RO-URSA組3027.97±7.177.86±2.620.89±0.393.82±1.5061.33±10.45對照組3030.73±5.417.82±2.900.76±0.358.38±1.9157.36±9.00

3　討論

生殖免疫相關研究［3］認為，胚胎植入是一種半同種異體組織移植，在正常妊娠時胚胎未被排斥，與蛻膜組織中正常免疫微環(huán)境有一定的關系。當這種免疫耐受被打破時就會發(fā)生病理妊娠，甚至流產(chǎn)。NK細胞是母-胎免疫中的優(yōu)勢細胞群，在妊娠過程中發(fā)揮重要作用［4］。趨化因子由白細胞和某些基質細胞分泌，對中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞具有趨化及激活作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子在生殖過程中（如月經(jīng)、排卵、胚胎種植及分娩）發(fā)揮重要作用［5］。

CCR7在NK細胞的趨化中發(fā)揮重要作用。CCR7+CD56brightNK細胞在外周免疫器官中起免疫調(diào)節(jié)作用，CCR7-CD56brightNK細胞在外周血中發(fā)揮細胞毒性作用。CCR7高表達的CD16-NK細胞可趨向富含CCR7配體、巨噬細胞炎性因子和次級淋巴組織趨化因子的子宮內(nèi)膜組織，與此相反，缺乏CCR7的CD16+NK細胞不能與其配體結合發(fā)揮作用［6］。本研究顯示，兩組月經(jīng)血CD56+CD16+CCR7-NK細胞和CD56+CD16+CCR7+NK細胞均在較低水平，兩組月經(jīng)血CD56+CD16-CCR7+NK細胞水平顯著高于CD56+CD16-CCR7-NK細胞；兩組月經(jīng)血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+均高于外周血。提示CD16-時，CCR7調(diào)控CD56+NK細胞優(yōu)先遷移至子宮內(nèi)膜；CD16+時，CCR7對CD56+細胞遷移至子宮內(nèi)膜不發(fā)揮作用。又有研究發(fā)現(xiàn)，CD16的表達可能決定NK細胞是否遷移到子宮內(nèi)膜［7］。健康女性的月經(jīng)血高表達CD56+CD16-NK細胞，而外周血高表達CD56+CD16+NK細胞［8，9］。本研究與其結果相似。

本研究結果發(fā)現(xiàn)，URSA組外周血CD56+CD3-CD16-NK細胞水平高于對照組；而對照組外周血CD56+CD16-CCR7+／CD56+CD16+CCR7+顯著高于URSA組。提示URSA患者CCR7優(yōu)先表達于CD16+的NK細胞亞群中。同時本研究發(fā)現(xiàn)，URSA組外周血CD56+CD16+CCR7+／CD56+CD16+CCR7-顯著高于對照組。URSA組外周血較對照組高表達CD16+NK細胞，但差異無顯著性。與之前報道［10］結果相似。本研究結果顯示，兩組月經(jīng)血CD45RO+NK細胞水平高于外周血。有研究結果顯示［11］，人類外周血CD56brightCD16-NK細胞表達CD45RO水平高于CD56lowCD16+NK細胞?；罨腃D56brightCD16-NK細胞表達CD45RO［12］，CD56brightCD16-CD45RO+NK細胞在母-胎界面發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，URSA組與對照組相比，前者外周血CD45RO-NK細胞水平較高，而外周血、月經(jīng)血中CD45RO+NK細胞較少。提示CD16-CCR7+CD45RO+NK細胞在成功妊娠中發(fā)揮重要作用。CD16-CCR7+CD45RO+NK細胞目前被認為可活化NK細胞亞群，在NK細胞從血液遷移至組織中，在與靶細胞形成復合物過程中發(fā)揮作用，但其在母-胎界面的作用機制目前仍不十分清楚，需進一步研究。且本研究首次將月經(jīng)血作為標本研究NK細胞亞群，樣本較少，有待于擴大樣本進一步研究探討。本研究結果顯示，URSA患者CCR7優(yōu)先表達于CD16+NK細胞，其外周血、月經(jīng)血CD45RO+NK細胞均較少，可能是其發(fā)病機制之一。對月經(jīng)和外周血NK細胞亞群進行檢測有助于URSA的診

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10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.024

R714.21

B

1002-266X（2016）21-0060-03

魏蘭（E-mail：1134979643＠qq.com）

（2015-11-14）