宮頸細胞HPV E6/E7 mRNA檢測在宮頸病變診斷中的價值研究*

蒙志平，黎勇明，楊 玲，吳 險，梁金艷，林麗文，梁 婷，黃川英

(廣西壯族自治區貴港市人民醫院檢驗科 537100)

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·論 著·

宮頸細胞HPV E6/E7 mRNA檢測在宮頸病變診斷中的價值研究*

蒙志平，黎勇明，楊 玲，吳 險，梁金艷，林麗文，梁 婷，黃川英

(廣西壯族自治區貴港市人民醫院檢驗科 537100)

目的 探討宮頸細胞人乳頭狀瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA檢測對于診斷宮頸病變的應用價值。方法 選取2014年10月至2015年10月在該院婦產科因宮頸炎性反應、陰道異常出血或排液門診患者就診的407例患者，行新柏氏液基細胞學檢測(TCT)和HPV E6/E7 mRNA檢測，對TCT結果異常的34例患者行病理科組織病理學檢查，以病理報告為“金標準”。統計分析HPV E6/E7 mRNA檢測對宮頸病變的應用價值。結果 TCT檢測出異常患者34例，占總患者數的8.35%，無上皮內瘤變或惡性病變(NILM)患者373例，占總患者數的91.65%；HPV E6/E7 mRNA檢測異常患者87例，占總患者數的21.37%。2組差異有統計學意義(P<0.05)。TCT 不同結果與HPV E6/E7 mRNA 拷貝數的比較表明，從意義不明的不典型鱗狀細胞(ASC-US)到不能排除高度上皮內病變的不典型鱗狀上皮(ASC-H)、鱗狀上皮內低度病變(LSIL)、鱗狀上皮內高度病變(HSIL)，隨著細胞學診斷級別的升高，HPV E6/E7 mRNA 陽性率同步升高(P<0.05)。結論 宮頸細胞HPV E6/E7 mRNA診斷可較大程度降低過度檢查和治療的可能性，診斷宮頸上皮內瘤變(CIN)Ⅱ+的準確性較高，可降低宮頸病變的漏診率，其對于宮頸病變的診斷有較高的臨床應用價值。

宮頸病變； 人乳頭狀瘤病毒； 宮頸活檢； 診斷價值

宮頸癌是一種惡性腫瘤，也是迄今為止已明確致癌因素的癌癥之一。此類癌癥主要是指發生于陰道處及鱗狀上皮細胞、宮頸管內膜柱狀上皮細胞交界處的腫瘤。宮頸癌由多因素綜合作用而產生，其發病率已經僅次于乳腺癌，在女性惡性腫瘤疾病中占第2位。其發病趨勢呈年輕化，發病率逐年上升。某些患者在患上宮頸病變后因為臨床癥狀較不顯著，造成對病情嚴重程度的錯誤估計，進而逐漸發展為較嚴重的情況。雖然目前對于宮頸病變的檢測不斷完善，許多地區的宮頸浸潤癌發病率和病死率已大幅下降，但在我國，該病的診斷水平卻仍然需要提高。已有研究表明，高危型人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染是導致宮頸癌的主要病因，其E6、E7等基因能夠表達出干擾正常細胞周期、染色體穩定，并促使其凋亡的蛋白質，使女性的宮頸疾病不斷惡化，最終演變成宮頸癌。所以，在病變早期進行治療、再治療過程中，不斷隨訪對于宮頸癌防治有一定的積極意義。這不僅對患者治療過程中的風險預估、篩查、術后病情觀察具有應用價值，更能夠提高宮頸癌高危人群的生命質量。

近年來，臨床通常采用諸如HPV DNA檢測等方法對宮頸病變進行篩查，雖能一定程度降低宮頸癌的發生率，但因HPV DNA檢測是1種病因檢測，對致癌基因轉錄和活動等方面的預測作用較低。而HPV E6/E7 mRNA檢測，可有效地預測病毒的活動程度及病變程度，從而制訂更好的治療方案。本研究探討了高危型HPV E6/E7 mRNA在宮頸病變的臨床診斷價值，現將試驗結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年10月至2015年10月在本院婦產科因宮頸炎性反應、體檢發現宮頸贅生物、白帶增多、白帶帶血、性交后異常出血或排液門診患者共407例，患者年齡21～67歲，平均年齡為(40.2±9.5)歲，所有患者宮頸均完整，身體健康狀況良好，均自愿進行新柏氏液基細胞學檢測(TCT)和HPV E6/E7 mRNA檢測。2項檢測結果均為“陰性”判定為正常；對TCT結果異常的34例患者行病理科組織病理學檢查，以病理報告為“金標準”進行最終比較分析。排除標準：(1)患者自身患有免疫抑制疾病；(2)作者患有精神疾病不愿配合治療；(3)患者自身患有慢性疾病；(4)患者有宮頸上皮內瘤變(CIN)治療史。本次試驗所有女性患者在其年齡、學歷、宮頸疾病分級等方面的差異均無統計學意義(P>0.05)。本次試驗研究已通過本院醫學倫理委員會批準，每位女性患者均簽署個人知情同意書。

1.2 方法 TCT檢測。以專用拭子，緊貼宮頸口稍用力順時針旋轉5周，放入專用、含有細胞保存液的試管瓶中。采用膜式液基超薄細胞學和離心沉淀檢測技術，按宮頸細胞學TBS分類系統進行分級，即:無上皮內瘤變或惡性病變(NILM)、意義不明的不典型鱗狀細胞(ASC-US)、不能排除高度上皮內病變的不典型鱗狀上皮(ASC-H)、鱗狀上皮內低度病變(LSIL)、鱗狀上皮內高度病變(HSIL)和鱗狀細胞癌(SCC)。

HPV E6/E7 mRNA檢測。用專用宮頸刷于宮頸外口及頸管內旋轉5圈，折斷刷柄，置于專用保存液瓶中待用，根據科蒂亞(新鄉)試劑盒檢測要求，經過信號放大、加入標記熒光物質底物后，在配套冷光儀光度計上檢測。檢測結果為拷貝數，經公司計算軟件自動判斷結果。

1.3 診斷標準 依據陰道鏡病理活檢為“金標準”，將診斷結果為高級別宮頸病變(CINⅡ+級及宮頸浸潤癌)及慢性宮頸炎、CINⅠ級患者。宮頸細胞檢查診斷，本院采用TCT行宮頸細胞學檢查方式(根據2001年國家制訂的TBS分類系統)，可對患者做出描述性診斷報告。具體分類如下：(1)TCT正常：患者皮膚無上皮內病變或者惡性的改變(但是也包括自身存在的炎性反應或者正常情況)；(2)TCT異常：鱗狀細胞發生異常且人體腺細胞異常等情況。

1.4 統計學處理 本次研究數據采用SPSS16.0軟件進行統計分析，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 TCT及HPV E6/E7 mRNA對患者的陽性檢出率 TCT異常患者共34例，占總患者數的8.35%；NILM患者373例，占總患者數的91.65%；HPV E6/E7 mRNA檢測異常患者87例，占總患者數的21.37%。2組差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 2種方法檢測結果的比較 TCT 不同結果與HPV E6/E7 mRNA 拷貝數的比較表明，從ASC-US 到ASC-H、LSIL、HSIL，隨著細胞學診斷級別的升高，HPV E6/E7 mRNA 陽性率同步升高(P<0.05)。見表1。

表1 TCT及HPV E6/E7 mRNA的標本結果[n(%)]

3 討 論

我國針對宮頸癌臨床診斷主要采用 “三階梯篩查”方案，其基礎為“細胞學”，依靠進一步陰道鏡檢查或宮頸活組織的病理學檢查等。但上述檢查均基于形態學，檢測出的細胞形態結果其實是HPV感染后的結果，而部分細胞可能受到細菌或者其他微生物影響而未表現出典型癥狀，加上檢驗或者試驗過程中的操作誤差、制片誤差、計算誤差及閱片主觀性，都會制約“細胞檢測”的準確性，容易造成較高的漏診率。已有研究表明，宮頸癌與CIN的主要誘發因素為HPV的持續感染，而歐美國家已將高危型HPV作為聯合檢測的最初篩選方式。定期檢查高危型HPV感染能有效判斷宮頸癌的發病風險，這已成為1種有效的調查手段。但是，目前仍未解決HPV持續感染的無癥狀性、低特異性和可逆轉性，意味著HPV DNA檢測方式有可能檢驗出無意義感染，不僅增加患者經濟負擔，還影響患者心態，從而最終影響到患者的生命質量及治療情況。

宮頸癌是嚴重的臨床婦科疾病，病因復雜但具有一定規律性，同時涉及飲食習慣、家族史及基因缺陷等原因[1-3]，基因障礙在上述致病因素中占據主要地位。宮頸癌的形成是惡性腫瘤細胞在患者子宮口和陰道內部異常聚集，導致惡性腫塊[4-6]。隨著臨床診斷技術的發展和民眾護理意識的增強，近年來宮頸癌診斷率和治療率有所提高[7-12]。但宮頸病變仍然難診斷、難治療，且易發展為惡性腫瘤，甚至危及生命。HPV DNA檢測是診斷宮頸病變的有效途徑之一，能較好地診斷患者腫瘤情況，對于宮頸病變的治療有一定作用，但HPV DNA檢測對高危宮頸病變診斷不靈敏。HPV E6/E7 mRNA檢測對腫瘤情況加劇時高度表達的E6/E7較為靈敏，是診斷宮頸癌的有效方式。本次研究采用HPV DNA檢測和HPV E6/E7 mRNA檢測對宮頸病變患者進行診斷，目的在于探討HPV E6/E7 mRNA檢測的診斷效果和臨床應用價值。

本研究結果表明，TCT異常患者34例，占總患者數的8.35%，NILM患者373例，占總患者數的91.65%；HPV E6/E7 mRNA檢測異常患者87例，占總患者數的21.37%。2組差異有統計學意義(P<0.05)；TCT 不同結果與HPV E6/E7 mRNA 拷貝數的比較表明，從ASC-US 到ASC-H、LSIL、HSIL，隨著細胞學診斷級別的升高，HPV E6/E7 mRNA 陽性率同步升高(P<0.05)。HPV E6/E7 mRNA檢測對于高危宮頸病變有較高陽性檢出率(83.3%)，而在一般宮頸病變中的陽性檢出率較低。表明不同宮頸病變級別HPV E6/E7 mRNA拷貝值差異有統計學意義，HPV E6/E7 mRNA 表達隨宮頸病變級別升高呈上升趨勢。

綜上所述，宮頸細胞HPV E6/E7 mRNA診斷可較大程度降低過度檢查和治療的可能性，診斷CINⅡ+的準確性較高，可降低宮頸病變的漏診率，對于宮頸病變的診斷有較高臨床應用價值。提示高危型HPV E6/E7 mRNA若呈陽性，需引起重視，以防漏診宮頸癌。但是，此種方式能否真正作為宮頸病變診斷的首選方案進行大范圍使用，仍需要進行更大樣本的檢驗，方可得出結論。

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Diagnostic value of the HPV E6/E7 mRNA of cervical cells in the detection of cervical lesions*

MENGZhiping,LIYongming,YANGLing,WUXian,LIANGJinyan,LINLiwen,LIANGTing,HUANGChuanying

(DepartmentofClinicalLaboratory,People′sHospitalofGuigangCity,Guigang,Guangxi537100,China)

Objective To investigate the diagnostic value of the human papilloma virus(HPV) E6/E7 mRNA of cervical cells in the detection of cervical lesions.Methods A total of 407 patients with cervical inflammation and abnormal vaginal bleeding were selected from October 2014 to October 2015 in the department of obstetrics and gynecology.By thinprep cytologic test(TCT),cervical cells of the patients were detected.And the E6/E7 mRNA of cervical cells was also detected.In addition,abnormal TCT results of 34 patients were inspected by pathological examination again,and the results of the pathological examination were the gold standard.Value of HPV E6/E7 mRNA in detection of cervical lesions was analyzed.Results There were 34 cases having abnormal TCT results,which accounted for 8.35% in all the patients.There were 373 cases without intraepithelial neoplasia or malignant lesion,which accounted for 91.65% in all the patients.And 87 cases had abnormal HPV E6/E7 mRNA detection results,which accounted for 21.37%.The difference between the two groups had statistical significance(P<0.05).Along with the levels of cytohistologic diagnosis,the positive rates of the HPV E6/E7 mRNA in the testing of atypical squamous cells of undetermined significance(ASC-US),atypical squamous cells of highly intraepithelial lesion(ASC-H),low-grade squamous intraepithelial lesion(LSIL) and high-grade squamous intraepithelial lesion(HSIL) were also increased(P<0.05).Conclusion Cervical HPV E6/E7 mRNA detection may reduce the excessive examination and treatment and it has the higher accuracy of cervical intraepithelial neoplasia(CIN) Ⅱ+,at the same time,it can reduce the rate of misdiagnosis of cervical lesions.The method has higher clinical value in the diagnosis of cervical lesions.

cervical lesions; HPV; cervical biopsy; diagnostic value

廣西壯族自治區貴港市科學技術局項目(140837)。

蒙志平，男，主管技師，主要從事免疫學和分子診斷學方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.014

A

1673-4130(2016)21-2987-03

2016-02-06

2016-04-26)