應用卵黃和血清進行新城疫抗體監測的比較

曹丹

（遼寧省沈陽市畜牧獸醫科學研究所，遼寧　沈陽　110034）

應用卵黃和血清進行新城疫抗體監測的比較

曹丹

（遼寧省沈陽市畜牧獸醫科學研究所，遼寧沈陽110034）

為檢測卵黃抗體代替血清抗體對蛋雞新城疫免疫評估的可行性，本試驗選取180日齡健康產蛋母雞30羽，按照常規免疫程序，分別于180、182、186、194、210、242和306日齡共7次采集卵黃樣品和對應的血清樣品，以HI方法檢測血清和卵黃免疫新城疫免疫抗體水平。結果表明，卵黃抗體的效價略低于血清抗體效價，但升降趨勢相同。利用spss 12.0軟件對7個不同日齡蛋雞抗體數據進行檢驗，差異不顯著（P＞0.05）。由此可得，在產蛋雞180～300日齡內，卵黃抗體與血清抗體差異不顯著，有一定的相關性，可以采用卵黃替代血清進行免疫抗體檢測。

蛋雞；新城疫；卵黃；血清；免疫抗體；相關性

新城疫（ND）也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由NDV病毒引起的雞和火雞急性高度接觸性傳染病，常呈敗血癥癥狀。主要特征是呼吸困難、下痢、神經紊亂、黏膜和漿膜出血，是嚴重危害養雞業得主要疾病之一，為A類傳染病[1]。因此，控制新城疫的發生和流行具有重要意義。當前主要通過檢測禽類血清中新城疫抗體水平來進行免疫效果的評估，控制新城疫疫病的發生。在臨床上需要對免疫雞群的血清抗體水平進行多次監測，采血不但會給雞群造成較大的應激反應，引起生產性能的下降，而且費時費力，采樣效率不高。

蛋雞進行雞新城疫疫苗免疫接種后，體內B細胞通過對抗原的識別、活化、增殖，最后分化成漿細胞并分泌抗體，產生的抗體進入血液后，血液中的抗體能從輸卵管上皮層分泌濾泡分泌到卵黃內[2]。因此，若能用卵黃抗體代替血清抗體檢測，不僅可以省去采血給雞群造成的應激反應，而且操作更為方便。本試驗以產蛋雞為研究對象，對新城疫血清抗體與卵黃抗體產生水平的相關性進行對比，以確定用檢測卵黃抗體代替血清抗體對產蛋雞進行新城疫免疫評估的可行性，從而為ND的抗體檢測提供新的方法。

1　材料與方法

1.1試驗動物從沈北道義蛋種雞場選取個體差異不顯著的產蛋雞30羽（180日齡），按照表1新城疫免疫程序常規免疫，單籠飼養。

表1　蛋種雞場采用新城疫免疫程序Tab le1　The imm unization procedure o f NDV vaccine

1.2疫苗按照常規免疫，雞新城疫Lasota疫苗、雞新城疫油乳劑滅活疫苗：哈爾濱維科生物技術開發公司生產。

1.3血凝抑制試驗用抗原和血清雞新城疫標準陽性血清：哈爾濱維科生物技術開發公司生產，批號（20140312）。

雞新城疫4單位抗原：自制。

0.75%新鮮雞紅細胞懸液，現用現做；氯仿（三氯甲烷）；阿氏液；PBS溶液。

1.4試驗材料主要儀器及耗材：96孔V型微量板；單道及多道微量移液器（配有吸頭）；微型振蕩器；離心機；離心管、試管、一次性注射器。

2　樣品制備

2.1血清樣品采集試驗蛋雞于180日齡（產蛋穩定）當天開始采樣，分別在182、186、194、210、242和306日齡采集血清，采血每天收集雞蛋，采血當天產蛋作為檢測用蛋（30枚），對應編號，用作待檢血清和待檢雞蛋，共采樣7次。

2.2卵黃樣品的制備卵黃采用生理鹽水稀釋法：將卵黃與蛋清分離，用無菌采血器刺破卵膜，直接從卵黃囊抽取卵黃。將采集的卵黃與等量生理鹽水作1∶1稀釋，混合制成卵黃檢樣備用。

2.3H H I I抗體效價測定血清樣品按《GB/T 16550-2008新城疫診斷技術》規定方法檢測。卵黃樣品參照血清樣品進行HI效價測定。

3　結果與分析

3.1卵黃與血清H H I I抗體效價差異性比較見表2。

表2　產蛋期新城疫血清抗體和卵黃抗體監測結果Table2　HI(log2)antibody titer of the serum and egg yolk antibody for NDV

由表2可知，新城疫病毒卵黃抗體的平均效價為8.39，血清抗體平均效價為8.70。從本次試驗結果來看，進行新城疫常規免疫后，卵黃抗體的效價略低于血清抗體效價。但升降趨勢相同，具有一定的相關性。

利用spss12.0軟件對7個不同日齡蛋雞抗體數據進行t檢驗，差異不顯著（t＜0.05，P＞0.05）。由此可得，在產蛋雞180～300日齡內，卵黃抗體與血清抗體差異不顯著，有一定的相關性，可以采用卵黃替代血清進行免疫抗體檢測。

3.2卵黃—血清抗體效價消長規律及相關性分析見圖1。

圖1　血清抗體和卵黃抗體效價監測結果Fig.1　HI antibody titer of the serum and egg yolk antibody for NDV

由圖1可得，新城疫病毒卵黃抗體的效價與血清抗體較為相近，升降趨勢相同，曲線變化基本一致。試驗期間，血清抗體效價的曲線，位于上線，始終高于卵黃抗體水平。由此可得出，與血清相比，卵黃抗體有一定的滯后性。

4　結果與討論

雞體內的免疫球蛋白分布于淋巴液、血清和組織液中，還能通過卵泡膜進入卵黃，為雛雞提供母源抗體。本次試驗測定了常規免疫新城疫疫苗后，血清抗體效價和卵黃抗體效價基本一致，升降趨勢相同，成正平行關系，卵黃抗體可以代替雞血清對蛋雞進行ND的免疫監測，這與孟艷等（2007）[3]、席文平等（2007）[4]研究均認為蛋雞卵黃抗體效價與血清效價的差異不顯著，具有相關性的報道相一致。但由于卵黃形成需要一定的時間，因此卵黃抗體與血清抗體檢測結果相比，存在一定的滯后性。

在具體試驗操作中，需要對卵黃樣品處理后，才能進行HI方法檢測。常用的卵黃提純制備有氯仿萃取法、PBS直接稀釋法、生理鹽水直接稀釋法和PEG沉淀法。本文經過篩選后，采用生理鹽水直接稀釋卵黃樣品，簡便實用，且與血清效價差異不大，可以運用到生產實踐中。用卵黃抗體代替血清對蛋雞進行ND的免疫監測，不僅減少抓雞產生的應激，避免采血驚嚇造成的產蛋量下降，而且檢測卵黃抗體方法簡便實用，節省人力和時間，養雞戶更易于接受。

[1]范文穎，周寅，顧祥國.雞新城疫的診斷和防控[J].畜牧與飼料科學，2009，30（9）：154-156.

[2]劉瑞生，張洪波，薛掌林，等.雞新城疫血清抗體和卵黃抗體效價比較研究[J].畜牧獸醫雜志，2013，2：100；

[3]孟艷，楊秀女，武秋雙，等.蛋禽卵黃和血清禽流感抗體的差異及相關性[J].今日畜牧獸醫，2007，6：3-5.

[4]席文平，李吉軒，岳建新，等.禽流感血清抗體與卵黃抗體消長規律比較研究[J].中國畜牧獸醫，2007，34（1）：103-105.

The feasibility of immune evaluation Newcastle disease of judging yolk antibody instead of serum antibody

Cao Dan
(Shenyang Instituent of Animal Husbandry and Veterinary,LiaoningShengyang110034)

To study the feasibi l ity of immune evaluation Newcast le disease of judging yolk antibody instead of serum antibody,eggs and samples were col lected f rom 30 180-day-age heal thy laying hens and the layers immunized with NDV vaccine according to the routine vaccination program.

The serum and eggs were col lected on 180、182、186、194、210、242 and 306 days,which number of samples were cor responding.The antibody level in the serum and egg yolks was detected with the haemagglutination inhibition(HI)test.The resul t showed that the egg yolk antibody titers sl ight ly lower than serum antibody titers,but the t rends of decreasing and increasing of theirs were the same.The antibody titers were analyzed by using spss 12.0,theirs were not remarkably di f ferent（P＞0.05）.The mentioned-above resul t indicated that the antibody level in the egg yolks and serum of 180 to 300 day old laying hens were not dif ferent,but theirs have some cor relation. It suggested that eggs yolk could be detected with theHItest instead of serum.

Laying hen;Newcast le disease;Egg yolk;Serum;Immune antibody;Correlation

S858.31

B

1672-9692(2016)01-0015-03

2015-11-11

曹丹（1979-），女，碩士研究生，高級畜牧師，研究方向為動物營養與飼料科學。