銀黃消痤膠囊對兔耳痤瘡模型抗角化作用的實驗研究*

連莉陽 王 軍 李治牢 王曉莉

陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院皮膚科(咸陽 712000)

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·實驗研究·

銀黃消痤膠囊對兔耳痤瘡模型抗角化作用的實驗研究*

連莉陽 王 軍△李治牢 王曉莉

陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院皮膚科(咸陽 712000)

目的：探討銀黃消痤膠囊治療尋常痤瘡的作用機理。方法：將 60只雄兔隨機分為空白組、模型組、銀黃大、銀黃中、銀黃小及陽性對照組，每組各10只，后5組建立兔耳痤瘡模型，造模成功后，前兩組用純凈水灌胃,后四組分別用銀黃消痤膠囊大、中、小劑量及珍珠暗瘡片混懸液灌胃。2周后取兔耳痤瘡標本作組織學切片, 光鏡下觀察皮損病理變化。結(jié)果：銀黃大劑量組和陽性對照組均可明顯改善皮損角化過程，與模型組比較有顯著性差異，且銀黃大劑量組療效優(yōu)于對照組。結(jié)論：銀黃消痤膠囊治療尋常痤瘡機理是減輕皮損角化及真皮炎癥。

尋常痤瘡是一種由多因素引起的毛囊、皮脂腺的慢性炎癥性皮膚病，好發(fā)于青春期男女顏面、頸胸等部位，由于本病病程慢性，且具有一定的損容性，故對患者的身心健康產(chǎn)生一定影響。現(xiàn)代研究認為粉刺的形成與雄激素水平增高、毛囊導管角化異常、皮脂分泌過多、感染等因素有關(guān)。體內(nèi)雄激素水平升高或雌、雄激素比例失調(diào)，雄激素相對升高，可使皮脂腺腺體增殖，且合成、分泌皮脂增加；毛囊內(nèi)寄生菌如痤瘡丙酸桿菌可分解甘油三酯，產(chǎn)生的游離脂肪酸刺激毛囊及皮脂腺開口處上皮，使之增生及角化過度，皮脂排出不暢，形成粉刺。中藥銀黃消痤膠囊是我院制劑科研制的治療粉刺、面瘡、脂溢性皮炎、酒糟鼻的有效藥物，經(jīng)臨床使用，療效顯著，為進一步探討該藥物治療本病的作用機制，我們通過模擬兔耳痤瘡模型, 觀察該藥物對上皮角化、毛囊內(nèi)角化物質(zhì)、毛囊、皮脂腺擴張程度以及真皮層炎細胞浸潤的改善程度，從而為臨床治療提供實驗依據(jù)。

1 材 料

1.1 動 物 健康雄性家兔60只,體重(2.3±0.2) kg, 標準飼料喂養(yǎng)。西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，合格證號：scxk(陜)2014- 003。

1.2 藥物與器材 銀黃消痤膠囊(陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院制劑科，批準文號:陜藥制字Z 20160003)；復方珍珠暗瘡片(國藥準字 Z44021584)。黑色糊狀煤焦油購自咸陽市焦化廠；橄欖油,市售。BX- 51 型 olympus 光學顯微鏡；江蘇無錫朗伽 LOGENE- 1 形態(tài)學圖像分析儀。

2 方 法

將60只雄兔隨機抽取10只以橄欖油涂于雙耳內(nèi)側(cè)面作為空白組，其余50只按文獻[1]方法于每只家兔雙耳內(nèi)側(cè)面耳管開口處, 約3cm× 3cm范圍,外涂煤焦油每日1次,每次0.4ml,連續(xù)2周,制備動物痤瘡模型。兩周后將上述造模雄兔隨機分為模型組、銀黃消痤膠囊大、中、小劑量組和復方珍珠暗瘡片陽性對照組共5組,每組10只。每日灌飼藥物2次,每次5ml,給藥劑量為小劑量組0.3 g/kg、中劑量組0.6g/kg和大劑量組 1.2g/kg,分別相當于成人臨床等效劑量的3倍、6倍和12倍，陽性對照藥為復方珍珠暗瘡片，給藥劑量0.67 g/kg,相當于成人臨床劑量6倍,模型對照組和空白對照組給予等量純凈水灌飼，每日2次，每次5ml，連續(xù)給藥2周，末次給藥后24h在各組兔耳造模處用 1 cm 打孔器取下同一部位皮損，標本以 10%福爾馬林固定,石蠟包埋、壓平、蠟塊平切，HE 染色，在顯微鏡下觀察其角化程度。

3 結(jié) 果

光鏡下正常組兔耳表皮組織為 2～4 層(A)；模型組病理示: 表皮增厚至9-10層,角化過度，真皮淺層可見大量淋巴細胞等炎細胞浸潤，毛囊上皮不規(guī)則增厚, 毛囊腔中充滿粉紅色角化物質(zhì)(B-C)；毛囊口及毛囊擴張明顯, 且單個皮脂腺增大(D-E)；與空白對照組比較有顯著性差異。治療2 周后,銀黃大劑量組療效顯著，組織病理示：兔耳表皮變薄約5-6層,真皮淺層炎細胞數(shù)目顯著減少, 毛囊內(nèi)少量角化物質(zhì), (F) 毛囊擴張程度明顯減輕, 皮脂腺縮小(G-H)， 與模型組比較有顯著性差異，且療效優(yōu)于珍珠暗瘡片組，而銀黃小劑量組病理示：表皮仍較厚，毛囊角化明顯, 真皮層炎細胞較多, 毛囊擴張, 內(nèi)部充滿角化物, 皮脂腺未見明顯縮小，與模型組比較無顯著性差異，具體結(jié)果見表1、2。

實驗性粉刺的組織學評分標準 ①表皮增厚程度0:與正常組相同(0分);+ :細胞層數(shù)4-5層(1分);++ :細胞層數(shù)6-7層(2分);+ + + :細胞層數(shù)8-9層(3分)。②毛囊內(nèi)角化物質(zhì)多少:0:與正常組相同(0分);+ :角化物質(zhì)增多,但不致密,且為未充滿毛囊(1分);+ + :角化物質(zhì)致密,但未充滿毛囊;或角化物質(zhì)不致密,但充滿毛囊(2分);+ + + :角化物質(zhì)致密,充滿毛囊(3分)。③炎細胞浸潤程度0:與正常組相同(0分);+ :局灶性炎細胞浸潤,細胞散在(1分);+ + :局灶性炎細胞浸潤,細胞較密集,或出現(xiàn)多個浸潤灶(2分);+ + + :彌漫性炎細胞浸潤(3分)。④毛囊擴張程度:0:與正常組相同(0分);+ :輕度擴張(1分);+ + :中度擴張(2分);+ + + :高度擴張(3分)。

表1 銀黃消痤膠囊對兔耳痤瘡模型角化作用的影響

表2 銀黃消痤膠囊對兔耳痤瘡模型角化作用的影響

A 空白組；B模型組炎細胞浸潤、毛囊角栓；C模型組表皮增厚；D模型組毛囊擴張；E模型組皮脂腺增大；F銀黃大劑量組；G銀黃大劑量組毛囊；H銀黃大劑量組皮脂腺

圖1 各組皮下組織(HE染色×200)

4 討 論

銀黃消痤膠囊處方以《醫(yī)宗金鑒·外科心法要訣》中枇杷清肺飲為基礎(chǔ)加減化裁而成，全方由金銀花、黃芩、枇杷葉、黃連、連翹、野菊花、薏苡仁、白花蛇舌草、丹參、赤芍、川芎、生大黃、白芷、生甘草等十余味藥物組成, 方中金銀花、黃芩、枇杷葉為君藥，清肺泄熱解毒；黃連、連翹、白花蛇舌草、野菊花、薏苡仁清熱解毒、健脾利濕為臣藥，丹參、赤芍、川芎、涼血活血解毒，生大黃通腑瀉熱，使?jié)駸峄鸲緩南露撸_釜底抽薪之效[2-3]；白芷辛溫，歸大腸、肺胃經(jīng)，散風除濕，消腫止痛，同時佐制諸藥苦寒；甘草調(diào)和諸藥，上方共湊清熱解毒、活血散結(jié)之功效。藥理研究表明：金銀花、黃連、黃芩[4]等中藥具有廣譜抗病原微生物、抗過敏、抗炎等作用，并能增加巨噬細胞的吞噬功能,減少炎性滲出；白花蛇舌草在體內(nèi)能刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)增生和增強白細胞吞噬能力而抗菌消炎、調(diào)節(jié)免疫；丹參活血化瘀，改善微循環(huán)，減輕上皮角化，有效成分丹參酮則抗炎、抑菌、擬生理雌激素對抗雄激素，從而抑制皮脂分泌。銀黃消痤膠囊大劑量組和陽性對照組對表皮增厚、毛囊內(nèi)角化物質(zhì)、毛囊擴張程度以及真皮層炎細胞浸潤均有不同程度的減輕作用,大劑量組優(yōu)于陽性對照組。

[1] 顧麗貞，王彥云，李多嬌.清熱暗瘡片對兔耳痤瘡模型抗角化作用及血流變的影響[J].中成藥,2004, 26(3): 326-327.

[2] 楊紅蓮,段玉紅,胡錫琴.黃連“健胃”、“敗胃”的研究進展[J].陜西中醫(yī),2016,37(7):934.

[3] 王超玲,文穎娟.對《蘭室秘藏》中便秘用藥規(guī)律的探析[J].陜西中醫(yī),2016,37(7): 919.

[4] 彭 成.中藥藥理學[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社，2012：67.

(收稿2016-08-10；修回2016-09-05)

Experimental study on Chinese medicine Yinhuang capsule of eliminating acne in rabbit ear

First Affiliated Hospital of Shannxi College of Traditional Chinese Medicine(Xi’an 712000)

Lian Liyang Wang Jun Li Zhilao et al

Objective: To observe the anti-comedone effect of Yinhuang capsule of eliminating acne. Methods: Using the coal tar daubing to the area nearby the opening of male rabbit ear canal daily for two weeks. Then they were randomly divided into Yinhuang high dose ,middle dose, low dose ,and model groups，control groups , fedding with the drug solution, and water for two weeks. Results: Observing the pathological changes on the rabbit ear ,they were similar to the findings of acne in human beings under optic microscope .The high dose and control group were markedly alleviated symptoms after 4 weeks , but there is a little change in the other groups .Conclusions: Yinhuang capsule of eliminating acne could reduce the hair follicles keratinous plug and dermal inflammation.

Acne vulgaris @ Yinhuang capsule Animal experimentation

*陜西中醫(yī)藥大學青年基金項目(2015QN15)

陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑課題(2014-45)

△陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院病理科(咸陽 712000)

尋常痤瘡 @銀黃消痤膠囊 動物實驗

R758.73

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.12.052