不同儲存保鮮的野地瓜果實中糖分的HPLC法測定

楊秀群，石登紅，余磊

（1.貴陽學(xué)院教學(xué)設(shè)備及實驗管理中心，貴州貴陽550003；2.貴陽學(xué)院生物與環(huán)境工程學(xué)院，貴州貴陽550003）

不同儲存保鮮的野地瓜果實中糖分的HPLC法測定

楊秀群1，石登紅2，余磊1

（1.貴陽學(xué)院教學(xué)設(shè)備及實驗管理中心，貴州貴陽550003；2.貴陽學(xué)院生物與環(huán)境工程學(xué)院，貴州貴陽550003）

研究高效液相色譜法測定野地瓜果實中糖分的方法。色譜柱為ZORBAXCarbohyarateAnalysisColumn（4.6mm× 150mm，5μm），柱溫35℃，流動相為70%乙腈水溶液，流速為1mL/min，示差折光檢測器檢測。本方法的相關(guān)系數(shù)在0.999 4以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.05%～2.15%，加標(biāo)回收率為83.88%～98.13%。3種糖都得到了較好的分離，方法靈敏、準(zhǔn)確。應(yīng)用此方法分析貴州不同地區(qū)及不同儲存保鮮的野地瓜果實中糖的種類及含量，結(jié)果顯示，不同地區(qū)野地瓜果實中糖的種類和含量有區(qū)別，可為野地瓜果實的風(fēng)味物質(zhì)評價，選種培育提供參考。冷凍干燥和加熱干燥后野地瓜果實中糖的種類不變，數(shù)量稍有變化，若不考慮其它營養(yǎng)元素是否損失的情況下，兩種方法均可作為野地瓜果實的儲存保鮮，這對野地瓜果實的儲存和加工具有指導(dǎo)意義。

儲存保鮮；高效液相色譜法；野地瓜；果糖；葡萄糖；蔗糖

野地瓜（Ficus tikoua Bur.）又名地果、地枇杷，桑科榕屬為匍匐木質(zhì)藤本。野地瓜果實香甜四溢，馥郁可人，故又稱為滿地香，植株具有綠化、藥用的功效，是集食用、藥用、綠化、觀賞于一體的多用途植物[1]。野地瓜果實營養(yǎng)價值高，內(nèi)含物質(zhì)獨特，且無農(nóng)藥和工業(yè)污染，被譽為“天然綠色食品”和“保健食品”[2-3]，具有開發(fā)利用價值。不少學(xué)者已對其開發(fā)利用展開研究。

果實風(fēng)味物質(zhì)的組成及其含量對果實內(nèi)在品質(zhì)有著重要影響，果實的品質(zhì)主要決定于糖的種類和數(shù)量[4]，準(zhǔn)確測定野地瓜果實中糖的組成對于研究野地瓜的風(fēng)味特征和儲存加工有指導(dǎo)意義。檢測果蔬中的糖含量的方法有分光光度法[5]、直接滴定法[6-7]、旋光法[8]、氣相色譜法[9-10]等。分光光度法僅能測定總糖，直接滴定法不能同時測定3種糖，且普通化學(xué)法使用化學(xué)試劑多，分離步驟繁瑣，數(shù)據(jù)精確度差[11]。氣相色譜法雖能分別進行各個糖組分的含量測定，但因糖的揮發(fā)性低，難氣化，需進行衍生化分析，檢測步驟繁瑣，不適合常規(guī)分析[12]。HPLC分析速度快，用樣品量少，重現(xiàn)性高，定性、定量準(zhǔn)確，可檢測果蔬糖的組分及其含量[13-17]。本研究以貴州境內(nèi)3個不同地區(qū)的野地瓜鮮果為試驗材料，采用高效液相色譜法（HPLC）分析糖分風(fēng)味物質(zhì)的組成和含量，比較糖組分和含量的差異，以期為野地瓜品質(zhì)評價和選種培育提供參考。對同一地區(qū)同一批次的野地瓜果實進行加熱烘干和冷凍干燥處理，對比研究加工后糖分的變化，為野地瓜果實的儲存保鮮、加工提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品來源于貴州省貴陽市貴陽學(xué)院校園內(nèi)，貴州省興義市晴隆縣連城鎮(zhèn)郊區(qū)，貴州省凱里市麻江縣郊區(qū)的野地瓜果實，選取顆粒飽滿、色澤鮮亮、無機械損傷的成熟新鮮果實（淡紅色）。

對同一地區(qū)同一批次的野地瓜果實均分成3組。第1組鮮果：蒸餾水洗凈后吸干表面水分，用勻漿機勻漿成果汁。第2組冷凍干燥果：取洗凈吸干后的野地瓜果實放在干凈的表面皿內(nèi)，置于凍干機中，蓋好凍干機后調(diào)節(jié)真空，使真空度為0.06 Pa，調(diào)節(jié)溫度為-49℃，冷凍48 h以上直至凍干，置于干燥器中保存，使用時用研缽研磨成粉狀。第3組加熱烘干果：用70℃的烘干機烘干至恒重（兩次稱量值≤±0.02 g），樣品置于玻璃干燥器中，使用時樣品研磨成粉狀。

1.2 儀器和試劑

Agilent1200HPLC高效液相色譜儀（配G1362A示差折光檢測器）：美國Agilent儀器公司；SK2200H超聲波清洗器：天津奧特賽恩斯儀器有限公司；101-1AB電熱鼓風(fēng)干燥箱：天津市泰斯儀器有限公司；FD-1B-50凍干機：北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司；ST16R離心機：美國thermo。葡萄糖、果糖、蔗糖為國產(chǎn)分析純；乙腈為sigma色譜純。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱取（精確至0.1mg）經(jīng)過（96±2）℃干燥2 h后的果糖0.5 g、葡萄糖0.5 g、蔗糖5 g，溶解、轉(zhuǎn)移、定容于25mL容量瓶中，三者的濃度分別為20、20、200mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液。取上述單一標(biāo)準(zhǔn)溶液，用雙蒸水稀釋成葡萄糖、果糖濃度分別為0.28、0.44、0.6、0.8、1.04mg/mL，蔗糖濃度分別為8、10、12、32、56mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 色譜分析條件

色譜柱：ZORBAX Carbohyarate Analysis Column（4.6mm×150mm，5μm）；柱溫：35℃；流動相體積比：乙腈∶水=7∶3；流速：1mL/min；進樣量：10.0μL；波長：210 nm。

1.3.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱取野地瓜果鮮果汁（冷凍干燥果粉或加熱烘干果粉）5 g，加入10mL 85%乙醇研磨，于37℃水浴浸提30min，超聲萃取30min，樣品置于高速離心機上10 000 r/min離心15min，取上清液，殘渣重復(fù)提取一次，合并上清液，用超純水定容于25mL容量瓶，用0.45μm濾膜過濾樣品，待測。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動相的選擇

根據(jù)糖分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點，通常選用極性較大的溶劑如水、乙腈等作流動相。由試驗可知，若單獨以水或乙腈為流動相，分離效果不理想，本試驗將乙腈和水混合，通過調(diào)節(jié)水和乙腈的體積比分別為8∶2，7∶3，6∶4，5∶5時，綜合考慮分離速度和分離情況，最終確定了以乙腈和水的體積比為7∶3作為流動相，達(dá)到較好的基線分離，同時考察了萃取溫度和萃取時間對提取量的影響，于37℃水浴浸提30min，超聲萃取30min分離效果較好。

2.2 樣品提取劑的選擇

用一定濃度的乙醇可以全部提取出葡萄糖和果糖，蔗糖易溶于水和乙醇水溶液，難溶于純乙醇溶液，如果乙醇濃度過低，野地瓜干果粉容易結(jié)成塊，不利于提取；如果乙醇濃度過高，影響對蔗糖的提取，為確

保野地瓜果粉能均勻分散在乙醇中，乙醇用量又不至于過大，本文結(jié)合張秀梅[13]的試驗方法，分別用10mL 95%、90%、85%、80%、75%的乙醇加熱-超聲提取，結(jié)果表明85%的乙醇提取效果較好。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別取10μL系列混合標(biāo)準(zhǔn)樣品進樣分析，以峰面積Y（mAUs）為縱坐標(biāo)，標(biāo)樣濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線，計算線性回歸方程及最低檢測限。結(jié)果見表1。

表1 回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍和檢出限Table1 Regression equation，correlation coefficientand linear rangeof sugars

2.4 精密度試驗

對待測的野地瓜果肉重復(fù)處理5次，測定峰面積，并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來考查該提取方法的精密度，得出3種糖的RSD依次為：果糖12.084 2%、葡萄糖12.147 7%、蔗糖22.612 0%，說明該提取方法符合處理精度要求。對同一樣品重復(fù)進樣5次，測量結(jié)果計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）考察測定方法的精密度，果糖、葡萄糖、蔗糖的RSD分別為1.95%、1.22%、2.32%，其精密度良好。

2.5 回收率試驗

采用樣品加標(biāo)樣回收法，已知濃度的樣品取9份，每3份分別加入果糖、葡萄糖、蔗糖的標(biāo)樣，按試驗方法平行測定3次，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 方法的精密度和回收率Table2 Resultsof precision and recoveries

試驗表明3種糖的平均回收率分別為94.80%、98.13%、83.88%，說明該方法具有較高的準(zhǔn)確度。2.6 野地瓜樣品分析

按照上述色譜條件，將不同地區(qū)，同一地區(qū)不同狀態(tài)的野地瓜樣品按1.5樣品處理的方法進行處理。取10.0μL進行液相色譜分析，測定果糖、葡糖糖、蔗糖的色譜峰峰面積，代入校正曲線計算出其含量，結(jié)果見表3。標(biāo)樣和樣品色譜圖見圖1。

表3 不同樣品測定結(jié)果Table3 Resultsof different sam ples tests

圖1 3種糖混合標(biāo)準(zhǔn)樣（a）及野地瓜樣品中糖（b）色譜圖Fig.1 The chrom atogram of three kindsof the sugar in Ficus tikoua Bur（right）andm ixed standard sample（left）

從圖1可知樣品中保留時間為3.473min是果糖，保留時間為3.685min是葡萄糖，保留時間為4.227min是蔗糖。從表3可見，野地瓜果實主要含果糖、葡萄糖、蔗糖3種糖分，其中蔗糖的含量比葡萄糖、果糖的高，蔗糖占總糖含量的69.53%～86.63%。不同地區(qū)野地瓜均含有果糖、葡萄糖、蔗糖，且蔗糖都占有較大的比重，但具體含量有區(qū)別，如貴陽、興義、凱里地區(qū)野地瓜的蔗糖含量分別為16.5057、25.5161、18.4713mg/g，可能是與不同地方的氣候條件和地理條件有關(guān)。對貴陽地區(qū)的野地瓜果實進行烘干和凍干后檢測，發(fā)現(xiàn)不管是

烘干或凍干的野地瓜，果糖和葡萄糖的含量都下降，但蔗糖的含量都增加了，可能是加工的過程中果糖和葡萄糖轉(zhuǎn)化為蔗糖了，還需進一步試驗驗證。

3 結(jié)論

3.1 建立高效液相色譜法測定野地瓜果實中的糖種類及含量

水和85%乙醇為提取劑，方法精密度（RSD）果糖為12.0842%、葡萄糖為12.1477%、蔗糖為22.6120%，分離效果好，不污染環(huán)境。高效液相色譜法檢測樣品中的糖含量，示差折光檢測器檢測，ZORBAX Carbohyarate AnalysisColumn（4.6mm×150mm，5μm）色譜柱，乙腈與水體積比為7∶3的流動相，流速：1mL/min；柱溫35℃，幾種糖分基本能基線分離，回收率高達(dá)83.88%以上，精密度（RSD）達(dá)1.05%～2.15%，適用于野地瓜果實中糖分的檢測。進一步豐富了高效液相色譜法檢測果蔬中的糖分的品種，為建立相關(guān)分析標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

3.2 對比研究貴州省內(nèi)不同地區(qū)的野地瓜果實中糖的種類和含量

3個地區(qū)野地瓜果實中都含果糖、葡萄糖和蔗糖，蔗糖的含量居首位，具體含量稍有差別。該方法客觀評價野地瓜果實的風(fēng)味物質(zhì)，為野地瓜的培育和選種提供參考，對野地瓜產(chǎn)品加工有指導(dǎo)意義。

3.3 分析不同狀態(tài)野地瓜果實中糖分的種類和含量的變化

對同一地區(qū)同一批次的野地瓜果實進行烘干和凍干處理，對比研究發(fā)現(xiàn)，糖分的種類沒有增減，但數(shù)量上稍有變化，其中果糖和葡萄糖的含量降低了，蔗糖的含量相對偏高了。不考慮其它營養(yǎng)元素是否損失的情況下，凍干和烘干基本可以使野地瓜果實得以保存，這一研究為野地瓜果實的儲存和加工具有指導(dǎo)意義。

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Determ ination of Sugars in Different Storage and Preservation of Ficus tikoua Bur.Fruit by HPLC

YANGXiu-qun1，SHIDeng-hong2，YU Lei1
（1.Teaching Equipmentand Laboratory ManagementCenterofGuiyang University，Guiyang550003，Guizhou，China；2.CollegeofBiologicaland EnvironmentalEngineeringofGuiyang University，Guiyang550003，Guizhou，China）

Determination ofsaccharides components in Ficus tikoua Bur.fruitwas studied by high performance liquid chromatography（HPLC）.The HPLC columnwas ZORBAX Carbohyarate Analysis Column（4.6mm× 150mm，5μm），the temperature of the column was about35℃，themobile phasewas 70%aqueous acetonitrile，the flow ratewas 1mL/min and use refractive index detector，the linear related coefficientwasmore than 0.999 4，the relative standard deviationswere1.05%-2.15%，while the recoverieswere83.88%-98.13%.The results showed that the three sugarswere separated relatively.Themethod was sensitive and accurate to determine the saccharides components in Ficus tikoua Bur.fruit.Application of thismethod to analyzed the saccharides components in Ficus tikoua Bur.fruitwhich came from the different region ofGuizhou and differentcondition of the same area.The results showed that：Ficus tikoua Bur.fruitsugar of the type and content therewere differences in different regions.This can be used asan indicator of Ficus tikoua Bur.fruitquality evaluation.It can be provide a reference for eveluation of flavorand selection nurture of Ficus tikoua Bur.fruit.Freeze-dried and heated and dried fruitsof Ficus tikoua Bur.speciesofsugarunchanged，but thenumberwasslightchanged. Twomethods can be used as storage preservation Ficus tikoua Bur.fruitexcludingwhether the lossofother nutrients case.Thishassignificance for the Ficus tikoua Bur.storage and processing.

storageand preservation；HPLC；Ficus tikoua Bur.；fructose；glucose；sucrose

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.23.033

2016-02-19

貴州省科學(xué)技術(shù)基金項目“野生植物野地瓜（Ficus tikoua Bur.）果實風(fēng)味物質(zhì)的研究”（黔科合J字LKG[2013]16號）；貴州省科學(xué)技術(shù)

基金項目“野地瓜（Ficus tikoua Bur.）引種試驗及其果實營養(yǎng)成分的研究”（黔科合J字[2010]2061號）

楊秀群（1985—），女（侗），實驗師，工程碩士，主要從事儀器分析實驗課程的教學(xué)，以及食品營養(yǎng)成分及農(nóng)藥殘留分析等方面的研究。