琥珀酸去甲文拉法辛緩釋微丸膠囊的制備及微丸體外釋藥研究

陳 才，何 芳，龍 銳（重慶醫科大學附屬第一醫院藥學部，重慶 400016）

琥珀酸去甲文拉法辛緩釋微丸膠囊的制備及微丸體外釋藥研究

陳 才＊，何 芳，龍 銳#（重慶醫科大學附屬第一醫院藥學部，重慶 400016）

目的：制備琥珀酸去甲文拉法辛（DVS）緩釋微丸膠囊，并對微丸體外釋藥特性進行研究。方法：采用醇溶上藥法制備DVS微丸，并進行微丸質量評價及粉體學性質研究。用乙基纖維素和羥丙甲基纖維素作為包衣材料，流化床包衣制備DVS緩釋微丸，干燥后裝入腸溶空心膠囊中，制得緩釋微丸膠囊。考察緩釋微丸的體外釋藥特性、不同干燥時間（1～24 h）和人工胃液對其釋藥的影響。結果：DVS微丸和DVS緩釋微丸的膜表面均光潔、有散在分布的小孔。DVS微丸中DVS的含量為19.56%（RSD＝0.53%，n＝10），上藥率為94%，堆密度為0.792 1 g/ml，圓整度為7.84°，休止角為21.3°。DVS緩釋微丸經不同時間干燥后的釋藥差異無統計學意義（P＞0.05），經人工胃液處理3 h后累積釋放度降低；DVS緩釋微丸釋藥規律符合一級動力學過程。結論：本方法成功制成具有緩釋作用的DVS緩釋膠囊，且制備過程中可不進行干燥。

琥珀酸去甲文拉法辛；緩釋微丸；流化床包衣；體外釋藥；制備

抑郁癥是一種以持久且顯著的情感低落、思維緩慢、認知功能受損、精神運動性遲緩為主要特征的心境障礙。2013年世界衛生組織（WHO）的統計結果表明，世界范圍內的抑郁癥和惡劣心境者的發病率高達12.8%[1]。其中重度抑郁癥（Major depressive disorder，MDD）在美國和全世界范圍內的發病率分別為16%～17%和3%～17%，已成為全世界范圍內第四大致殘因素，預計至2020年將繼缺血性心血管疾病后，成為第二大致殘因素[2]。然而，目前臨床上仍無治療效果可預測、效率較高和緩解率較好的抗抑郁藥。

琥珀酸去甲文拉法辛（Desvenlafaxine succinate，DVS）是首個美國FDA批準上市，用于治療重度抑郁癥的選擇性5-羥色胺-去甲腎上腺素再攝取抑制劑（Serotonin-norepinephrine reuptake inhibitors，SNRIs）[3]，其作用機制與鹽酸文拉法辛類似，能高效、選擇性地抑制對突觸前膜5-羥色胺和去甲腎上腺素的再攝取，具有耐受性強、安全性好、口服生物利用度高等特點[4]。DVS在50～400 mg/d的劑量范圍內，藥動學呈線性分布[5]，治療MDD有效且耐受性較好[6-9]。DVS血漿蛋白結合率為30%，表觀分布容積為3.4 L/kg。臨床研究表明，約45%的DVS以原型通過尿液排泄，其余的主要經Ⅱ相反應葡萄糖醛酸化而生成葡萄糖醛酸結合物，經腎臟排泄，小部分在肝臟中經細胞色素P450（CYP）3A4代謝生成氮氧雙去甲基文拉法辛[10]。目前，DVS在美國上市的為緩釋制劑，每日只需口服1次，國內還沒有DVS的相關劑型上市。為了滿足國內患者的需求，本研究采用微丸包衣技術制備DVS緩釋膠囊，并進行體外釋放度研究，以開發符合《中國藥典》規定的、工藝簡單且具有自主知識產權的DVS緩釋膠囊。

1 材料

1.1 儀器

UV-2401型紫外-可見分光光度計（日本島津公司）；A-120-CSi型電子天平（西班牙Cobos公司）；Mini-Glatt型流化床（德國Glatt公司）；3號膠囊填充板（重慶朗斯制藥機械有限公司）；S4800型掃描電鏡（日本Hitachi公司）；TCL-16型高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

DVS對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100005-201406，純度：100%）；DVS原料藥（重慶康刻爾制藥有限公司，批號：130501，純度：99.9%）；蔗糖丸芯（上海卡樂康包衣技術有限公司，批號：A1302）；腸溶空心膠囊（浙江紹興康可膠囊有限公司，批號：20140216）；乙基纖維素（EC，上海Colorcon公司，批號：69010682）；羥丙甲基纖維素（HPMC，日本旭化成株式會社，批號：CW1201）；聚乙烯吡咯烷酮K30（PVP K30，上海伯奧生物科技有限公司，批號：20130305）；聚乙二醇6000（PEG6000，四川瀚華藥用輔料公司，批號：1201121）；奎二酸二丁酯（DBS，國藥集團化學試劑有限公司）；DVS緩釋膠囊（自制，批號：20130601、20130602、20130603，規格：每粒50 mg）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 DVS緩釋微丸膠囊的制備

2.1.1 DVS微丸的制備 采用醇溶上藥法制備DVS微丸。首先將PVP K30和NaCl完全溶解于去離子乙醇中，在攪拌條件下，將DVS溶于乙醇溶液中。蔗糖丸芯作為空白載體，采用Mini-Glatt型流化床底噴裝置將乙醇溶液包裹至空白蔗糖丸芯表面[11-12]。制備DVS微丸的處方：空白蔗糖丸芯200 g，DVS 77 g，PVP K30 100 g，NaCl 1.8 g，95%乙醇2 000 ml。DVS微丸的工藝參數：進風容積75～100 m3/h，進風溫度55℃，物料溫度45～60℃，噴霧壓力2.2 bar，插入噴嘴直徑1.2 mm，流速2.5 ml/min。

2.1.2 DVS緩釋微丸膠囊的制備 將PEG6000和HPMC分別加入去離子水中，攪拌使其完全溶解。將EC加入乙醇中，靜置過夜使其完全溶解。然后在攪拌條件下，將水溶液加入乙醇溶液中，攪拌至呈澄清的乙醇水溶液。在攪拌條件下，將DBS加入乙醇水溶液中，攪拌4 h。采用Mini-Glatt型流化床底噴裝置將乙醇水溶液均勻包裹至DVS微丸表面，制得DVS緩釋微丸。流化床中干燥，然后置于腸溶空心膠囊中，制得DVS緩釋微丸膠囊[11-12]。制備DVS緩釋微丸的處方：DVS微丸350 g，EC 20 g，PEG6000 5 g，HPMC 50 g，DBS 3 ml，乙醇800 ml，去離子水100 ml。DVS緩釋微丸的工藝參數：進風容積90～110 m3/h，進風溫度50℃，物料溫度35～45℃，噴霧壓力2.0 bar，插入噴嘴直徑1.2 mm，流速2.5 ml/min。

2.2 方法學考察

2.2.1 標準曲線的繪制 精密稱取DVS對照品20.0 mg，置于100 ml量瓶中，加入適量的0.9%NaCl溶液溶解并定容至刻度，搖勻后作為貯備液。分別精密量取適量貯備液，加入0.9% NaCl溶液，制成含DVS分別為10、20、40、60、80、100 μg/ml的對照品溶液，在282 nm波長處檢測吸光度（A）。以A對質量濃度（c）進行線性回歸，得回歸方程為A＝0.009 4c+0.007 7（r＝0.998）。結果表明，DVS檢測質量濃度的線性范圍為10～100 μg/ml。

2.2.2 回收率試驗 精密稱取DVS原料藥適量（約相當于DVS標示量的50%、80%、100%）各3份，按“2.1”項下方法制成緩釋微丸，加入適量的0.9%NaCl溶液稀釋后，于282 nm波長處測定吸光度，根據回歸方程計算得相應質量濃度，再計算低、中、高質量濃度供試品的平均回收率分別為100.24%、99.55%、100.89%，RSD分別為1.25%、1.05%、1.33%（n＝3）。

2.2.3 穩定性試驗 按“2.1.2”項下方法制備DVS緩釋微丸，加入0.9%NaCl溶液稀釋后，放置0、2、4、6、8、12、24 h測定吸光度。結果顯示，吸光度的RSD＝0.73%（n＝7）。

2.2.4 精密度考察 精密量取適量“2.2.1”項下的DVS對照品貯備液于量瓶中，分別稀釋成低、中、高質量濃度（40、50、60 μg/ml）的對照品溶液，于282 nm波長處測定吸光度。同日內測定6次，考察日內精密度；每天1次，連續測定6 d。考察日間精密度。結果顯示，低、中、高質量濃度對照品溶液吸光度的日內RSD分別為0.77%、0.82%、0.46%（n＝6），日間RSD分別為1.07%、0.82%、0.94%（n＝6）。

2.3 藥物含量測定

取DVS微丸研細，精密稱取適量（約相當于DVS 5 mg），置于100 ml量瓶中，加少0.9%NaCl溶液，超聲20 min，冷卻至室溫，再加0.9%NaCl溶液釋至刻度，搖勻后水系濾膜過濾。取續濾液適量，于282 nm波長處測定吸光度，根據回歸方程計算DVS微丸中DVS的含量。

2.4 DVS微丸的質量評價及粉體學性質的研究[13]

2.4.1 含量均勻度 分別稱取10批次的DVS微丸適量，按“2.3”項下方法測定微丸中DVS的含量，考察微丸的含量均勻性。結果顯示，10批次樣品DVS的含量分別為19.62%、19.54%、19.66%、19.52%、19.44%、19.70%、19.44%、19.66%、19.41%、19.60%，平均含量為19.56%，RSD＝0.53%（n＝10）。結果表明主藥含量均勻度較好。

2.4.2 上藥率 上藥率是指微丸中實際藥物含量與理論含量的比值。根據含量均勻度檢測結果可知，上藥丸心實際藥物含量為19.56%。按照“2.1.1”項下方法制備得到上藥微丸370 g，計算DVS含量＝370×19.56%＝72.4 g，上藥率＝上藥量/處方量×100%＝72.4/77×100%＝94%。結果表明DVS微丸上藥率高、藥物損失量小。

2.4.3 堆密度 稱取一定質量（m）的微丸，置于100 ml量筒內，上下振動至體積不再發生變化，測定其體積（V），測定3次。按堆密度（d）＝m/V計算，結果d＝0.792 1 g/ml（n＝3）。

2.4.4 圓整度 將一定數量的微丸置一平板上，將平板一側抬起，測量在微丸開始滾動前傾斜平面與水平面的夾角，即為圓整度（φ）。φ越小，微丸的圓整度越好。結果，微丸的φ＝7.84°（n＝3）。

2.4.5 流動性 休止角（α）大小可反映微丸的流動性，同時又可間接反映其圓整度。采用固定漏斗法，微丸自漏斗上自由落下，在半徑為r的圓盤上形成堆集體，測定堆集體的高度（h），α＝arctan h/r。α≤30°為自由流動，α越小，流動性越好。結果，微丸的α平均值為21.3°（n＝3）。

綜上可見，DVS微丸圓整性和流動性都較好，可用于包衣。通過掃描電鏡觀察優化處方后制得的緩釋微丸的表面形態，可見DVS微丸和DVS緩釋微丸的膜表面光潔，有散在分布的小孔。DVS微丸和DVS緩釋微丸的電鏡掃描圖見圖1。

圖1 DVS微丸和DVS緩釋微丸的電鏡掃描圖Fig 1 Electron microscope scanning of DVS pellet and DVS sustained-release pellet

2.5 體外釋放試驗

取DVS緩釋微丸，采用轉籃法測定，以0.9%NaCl溶液900 ml為釋放介質，轉速為100 r/min。經1、2、4、6、8、10、12、18、24 h分別取釋放液10 ml，同時補加等量釋放介質，釋放液經水系濾膜過濾，取適量續濾液作為供試品溶液。精密稱取DVS對照品適量，加0.9%NaCl溶液制成質量濃度為50μg/ml的溶液，作為對照品溶液。取上述溶液在282 nm波長處測定吸光度，計算累積釋放度。

2.6 熱處理時間對DVS緩釋微丸膠囊體外釋藥的影響

在60℃恒溫箱中，將DVS緩釋微丸分別放置1、2、4、6、8、10、12 h后取出，按“2.5”項下方法進行體外釋放試驗，測定吸光度，計算累積釋放度，繪制釋放曲線。結果顯示，熱處理不同時間對DVS緩釋微丸的累積釋放度無明顯影響（P＞0.05），因此，流化床中的干燥時間選擇1 h。熱處理不同時間對DVS緩釋微丸釋藥的影響見圖2。

圖2 熱處理不同時間對DVS緩釋微丸釋藥的影響Fig 2 Effects of drying time on drug release of DVS sustained-release pellets

2.7 模擬胃酸對DVS緩釋微丸體外釋藥的影響

在開始體外釋放試驗前，分別將DVS緩釋微丸于人工胃液（0.1 mol/L的HCl溶液）中浸泡1、2、3 h，然后再置于900 ml 0.9%NaCl溶液中，按“2.5”項下方法進行體外釋放試驗。考察其在0.9%NaCl溶液中24 h內的釋放行為，分別在1、2、4、6、8、10、12、18、24 h測定吸光度。DVS緩釋微丸經人工胃液處理不同時間后的釋藥曲線見圖3。

圖3 DVS緩釋微丸經人工胃液處理不同時間后的釋藥曲線Fig 3 Release curves of DVS sustained-release pellets after treated with artificial gastric juice for different time

由圖3可知，與“2.6”項下熱處理1 h的釋放曲線比較，DVS緩釋微丸在人工胃液中處理1、2、3 h時的累積釋放度稍有所下降。常見口服藥物在胃中的停留時間為0.5～3 h，為了防止胃液對微丸中藥物釋放速度和釋放量的影響，故將DVS緩釋微丸裝于腸溶空心膠囊中。

2.8 DVS緩釋微丸體外釋藥機制考察

對DVS緩釋微丸的體外釋放試驗數據分別按照零級、一級和Higuchi釋藥動力學方程進行擬合，結果表明，DVS緩釋微丸的體外釋藥過程符合一級動力學方程，即藥物的釋放速率呈濃度依賴性。DVS緩釋微丸體外釋曲線擬合結果見表1（表中C為累積釋放度，t為釋放時間）。

表1 DVS緩釋微丸體外釋曲線擬合結果Tab 1 Fit results of release curves in vitro of DVS sustainedrelease pellets

3 討論

與片劑等劑型相比較，微丸屬于多劑量劑型。制備過程是將一個劑量的藥物幾乎均勻地分散至上百個微丸，因此，偶有單個微丸的破損不會導致大的釋藥量的變化。胃空速率等生理因素不易影響微丸的藥物釋放速率，且微丸能更均勻地分布至胃腸道，故微丸具有良好的療效重現性[13]。

在處方優化過程中，采用單因素篩選法對EC用量、HPMC用量、PEG6000用量、DBS用量、包衣增質量等因素進行了考察。試驗結果表明，增加EC的量會延遲藥物從微丸中釋放；增加HPMC的量會導致藥物初始釋放的時間延遲，并且釋放速率增加；加入適量PVP K30和PEG6000以控制并調節釋藥速率，其用量越大，藥物從微丸中釋放的速率越快；增塑劑DBS經4 h攪拌后包衣膜的穩定性最好；包衣增質量越大，釋藥速度越慢。最后，綜合以上各因素的試驗結果，獲得最佳處方。

不同熱處理時間對DVS緩釋微丸中藥物釋放的影響無顯著性差異（P＞0.05），說明在包衣過程中藥物和高分子聚合物之間無相互作用。

另外也優化了流化床的工藝參數，以無黏連、無靜電現象和進液速度快為標準進行優化，篩選了霧化壓力、物流溫度、進氣流量、進風溫度以及進液速度等參數，其中霧化壓力和物料溫度兩個參數尤其重要，最后獲得本試驗的最優工藝參數。

經流化床制得的緩釋微丸具有緩釋特征。本研究為DVS緩釋制劑的制備生產提供了試驗基礎。

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（編輯：鄒麗娟）

Study on Preparation of Desvenlafaxine Succinate Sustained-release Pellets Capsules and Drug Release in vitro of Pellets

CHEN Cai，HE Fang，LONG Rui（Dept.of Pharmacy，the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）

OBJECTIVE：To prepare Desvenlafaxine succinate（DVS）sustained-release pellets capsules，and to investigate the release property in vitro of pellets.METHODS：The pellets containing DVS were prepared by alcohol solution.The quality and micromeritics of DVS pellets were studied.Using ethylcellulose（EC）and hydroxypropyl methyl cellulose（HPMC）as coating materials，DVS sustained-release pellets were prepared by fluid-bed，and then put into enteric hollow capsule.The release property in vitro of DVS sustained-release pellets，and the effects of different drying time（1-24 h）and artificial gastric juice on drug release were investigated.RESULTS：DVS pellets and DVS sustained-release pellets were smooth and had scattered ostiole in surface.The content of DVS in DVS pellets was 19.56%（RSD＝0.53%，n＝10），and drug-loading rate was 94%；bulk density was 0.792 1 g/ ml；roundness degree was 7.84°；angle of repose was 21.3°.There was no statistical significance in the difference of drug release for DVS sustained-release pellets after dried for different time（P＞0.05），and accumulative release rate decreased 3 h after treated with artificial gastric juice；the release regularity of DVS sustained-release pellets fitted to first-order kinetic equation.CONCLUSIONS：DVS sustained-release capsules are prepared successfully by this method，and can be not dried during preparation.

Desvenlafaxine succinate；Sustained-release pellet；Fluid-bed coating；Drug release in vitro；Preparation

R943

A

1001-0408（2016）31-4436-04

2016-05-25

2016-07-02）

＊藥師。研究方向：新藥設計與合成、藥物新劑型。電話：023-89012410。E-mail：175508404@qq.com

#通信作者：主管藥師，博士。研究方向：醫院藥學。電話：023-89012410。E-mail：lrzj820@aliyun.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.31.34