不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖抗氧化活性研究

劉玉鳳,賈淑穎,劉飛飛,郝再彬,李 霞

(廣西高校食品安全與檢測重點實驗室,桂林理工大學化學與生物工程學院,廣西桂林 541004)

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不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖抗氧化活性研究

劉玉鳳,賈淑穎,劉飛飛,郝再彬,李 霞*

(廣西高校食品安全與檢測重點實驗室,桂林理工大學化學與生物工程學院,廣西桂林 541004)

采用氨基磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法進行多糖的硫酸化修飾,獲得不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖,通過測定硫酸化腸滸苔多糖對DPPH自由基,羥基自由基,超氧陰離子的清除能力和還原能力,考察了腸滸苔多糖取代度與抗氧化活性的關系。結果表明,取代度的大小受到硫酸化溫度、硫酸化時間、DMF用量、氨基磺酸用量等的影響,其中氨基磺酸用量的影響最顯著。隨著取代度增大,腸滸苔多糖的抗氧化性先增強后減小,取代度在0.8～1.2范圍內,腸滸苔多糖的抗氧化性較強,表明適度進行硫酸化修飾是提高腸滸苔多糖抗氧化活性的有效方式。

腸滸苔多糖,取代度,抗氧化活性

滸苔多糖是天然無毒的生物大分子物質之一,具有抗腫瘤、抗氧化、免疫活性調節、降血壓血脂等生物活性[1-4]。滸苔多糖的生物活性受其結構、分子量等的影響,通過對滸苔多糖結構修飾可以改變多糖的空間結構、分子量及取代基種類、數目和位置從而改變其生物活性[5]。結構修飾的方法有很多,包括化學法、物理法和生物法,其中硫酸化是一個頗為常用且有效的修飾手段[6]。多糖硫酸化常用的方法有濃硫酸法、氯磺酸-吡啶法、三氧化硫-吡啶法、氯磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法(DMF)、氨基磺酸-吡啶法、氨基磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法等[7-12]。這些方法的原理可以簡單的概括為:溶解或分散于一定溶劑體系中的多糖與相應的硫酸酯化試劑在一定的條件下反應,使得單糖殘基上的某些羥基接上硫酸基團[12]。研究表明,硫酸化修飾后可以改變多糖的抗氧化[13-15]、免疫[16]、抗病毒[17-19]、抗腫瘤[20-21]等生物活性,但只有適度的硫酸化才能得到生物活性較強的硫酸化多糖[22-23]。氨基磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法與其他方法相比,具有原料廉價,反應條件溫和,操作簡單的特點[12],所以本實驗采用此方法修飾腸滸苔多糖結構,并比較了腸滸苔多糖硫酸化后取代度大小對其抗氧化活性的影響,探究其變化規律,為腸滸苔多糖的開發利用提供實驗依據。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

本實驗材料腸滸苔(Enteromorphaintestinalis)采于中國浙江杭州灣。

氨基磺酸、硫酸鉀 天津博迪化工股份有限公司;無水乙醇、氯化鐵、三氯乙酸、N,N-二甲基甲酰胺(DMF) 西隴化工股份有限公司;2-脫氧-D-核糖 上海藍季生物;DPPH 東京化成工業株式會社;K3Fe(CN)6廣東興華化學廠有限公司;鄰苯三酚 天津市光復精細化工研究所;硫代巴比妥酸 國藥集團化學試劑有限公司;明膠 Sigma公司,分析試劑均為分析純。

EL303型電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;旋轉蒸發器RE-52A 上海亞榮生化儀器廠;UV760CRT型紫外可見分光光度計 上海傲譜分析儀器有限公司;DL-5-B型離心機 上海安亭科學儀器廠;XH-300A祥鵠電腦微波超聲波組合合成/萃取儀 北京祥鵠科技發展有限公司;FD-1B-50型冷凍干燥機 北京博醫康實驗儀器有限公司;RET basic(安全控制型)加熱磁力攪拌器 德國IKA公司;傅里葉紅外光譜分析儀Nicolet iS 10,美國Thermo Fisher公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 腸滸苔多糖提取 取腸滸苔樣品,按液料比1∶30加入去離子水,在功率500 W,浸提時間15 min,浸提溫度90 ℃的提取條件下微波提取2次。提取液離心,得到上清液。將上清液濃縮,加無水乙醇醇沉,然后離心,取沉淀,冷凍干燥,得腸滸苔粗多糖(Enteromorphaintestinalispolysaccharides,EIP)[24]。

1.2.2 硫酸化腸滸苔多糖的制備 腸滸苔多糖硫酸化參照劉昱均[12]等的報道采用氨基磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法并稍作調整。量取50 mL N,N-二甲基甲酰胺于三頸瓶中,加入100 mg腸滸苔多糖樣品,于KQ-500型超聲波清洗器在功率100 W,室溫的條件下超聲震蕩至多糖溶解。用恒溫磁力攪拌器攪拌升溫到80 ℃后,加入2.5 g氨基磺酸,升溫至100 ℃,在100 ℃條件下攪拌反應1 h。反應結束后,向瓶內加入冰水終止反應,調pH7,對流水透析3 d,蒸餾水透析1 d,凍干得硫酸化后腸滸苔多糖(Enteromorphaintestinalispolysaccharides A,EIPA)。

1.2.3 紅外光譜分析 分別稱取2 mg 對EIP和EIPA加入150 mg干燥的KBr于瑪瑙研缽中,在白熾燈下干燥研磨均勻,壓片成均勻透明、無明顯顆粒,于傅里葉紅外光譜分析儀Nicolet iS 10(光譜分辨率優于0.4 cm-1)進行紅外光譜分析,測定范圍為4000～400 cm-1。

1.2.4 EIP硫酸化單因素實驗 以取代度(DS)為考察指標,選取硫酸化溫度(A)、硫酸化時間(B)、DMF用量(C)、氨基磺酸用量(D)進行單因素實驗。實驗均重復3次。

硫酸化溫度(A):設定EIP 100 mg,氨基磺酸0.5 g,DMF 50 mL,硫酸化溫度為60、70、80、90、100 ℃,反應1 h。

硫酸化時間(B):設定EIP 100 mg,氨基磺酸0.5 g,DMF 50 mL,硫酸化溫度為100 ℃,硫酸化時間為1、2、3、4、5 h。

DMF用量(C):設定EIP 100 mg,氨基磺酸0.5 g,硫酸化溫度為100 ℃,DMF用量為20、30、40、50、60 mL,反應1 h。

氨基磺酸用量(D):設定EIP 100 mg,DMF 50 mL,硫酸化溫度為100 ℃,氨基磺酸用量為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g,反應1 h。

1.2.5 腸滸苔多糖硫酸根含量測定 腸滸苔多糖中硫酸根的含量采用BaCl2-明膠比濁法[25]測定。

1.2.5.1 標準曲線的制備 制備0.1 mg/mL K2SO4標準液;分別取0.0,0.2,0.4,0.6,1.2,1.6 mL(每管做3個平行)。加去離子水補到1.6 mL,加三氯乙酸(8%水溶液)1.4 mL,BaCl2明膠溶液1.4 mL,混合,靜置15 min。360 nm波長測吸光度,三組平行管取平均值,以硫酸鉀質量為橫坐標,吸光度平均值為縱坐標繪制標準曲線。

1.2.5.2 樣品中硫酸根含量的測定 實驗組:稱取樣品3 mg,放入帶蓋可密封的小瓶,加3 mL 1 mol/L HCl,100 ℃水解6 h,內容物50 ℃蒸干(用蒸發皿,無水乙醇促揮發),用2 mL去離子水溶解。取水解液0.4 mL加蒸餾水補到1.6 mL,加三氯乙酸(8%水溶液)1.4 mL,BaCl2明膠溶液1.4 mL,混合(同時做3組平行組),靜置15 min。360 nm波長條件下測定吸光度值A1。

對照組:對照組操作同上,每個樣品做一管,用1.4 mL的明膠溶液代替BaCl2明膠溶液。360 nm波長測定吸光度值A2。

所求吸光度A0=A1-A2,A1-A2目的是消除水解液中所含自外吸收物質的影響。由A0根據硫酸根標準曲線可計算出硫酸鉀的質量。

1.2.6 EIPA硫酸化取代度的計算 取代度計算公式:DS=(1.62×S)/(32-1.02×S)[12]。其中,S-樣品中硫的質量分數,(%)。

1.2.7 腸滸苔多糖的抗氧化活性測定 通過測定硫酸化腸滸苔多糖對DPPH自由基,羥基自由基,超氧陰離子的清除能力和還原能力來判斷腸滸苔多糖的抗氧化活性[26-27]。本實驗旨在比較不同取代度硫酸化腸滸苔多糖的抗氧化活性,選取取代度為0.43、0.56、0.61、0.72、0.81、0.90、0.95、1.00、1.14、1.42、1.53、1.66的硫酸化腸滸苔多糖進行抗氧化實驗。將抗壞血酸(VC)粉末、硫酸化前腸滸苔多糖凍干樣品EPI和硫酸化后不同取代度的腸滸苔多糖凍干樣品EPIA分別用去離子水配制成0、0.016、0.08、0.4、2、10 mg/mL等6種不同濃度。

1.2.7.1 DPPH自由基清除能力測定 量取配制好的待測樣品2.0 mL,加入2 mL 0.04 mg/mL DPPH溶液(無水乙醇做為溶劑),在室溫下混勻后避光反應0.5 h,在波長517 nm處測定其吸光值Ai;同時測定無水乙醇(2.0 mL)和DPPH(2.0 mL)混合液的吸光值Ac,無水乙醇(2.0 mL)和待測樣品(2.0 mL)混合液的吸光值Aj。則DPPH自由基清除率計算公式:K(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100

1.2.7.2 還原性能力測定 量取配制好的待測樣品0.5 mL于試管,依次加入0.5 mL的1% K3Fe(CN)6溶液與0.5 mL PBS溶液(0.2 mol/L,pH6.7),于50 ℃水浴反應20 min后立即冷卻,依次加入0.5 mL 10% TCA溶液,0.5 mL 0.1% FeCl3溶液和2.0 mL去離子水,充分搖勻,靜置10 min,在波長700 nm下搖勻測定其吸光度值A,以抗壞血酸作為陽性對照。

1.2.7.3 羥基自由基清除能力測定 取0.2 mL的FeSO4-EDTA混合液(10 mmol/L)于帶塞試管中,加入0.2 mL的α-脫氧核糖溶液(20 mmol/L),然后再加入0.2 mL配制好的待測樣品,并用磷酸緩沖液(pH7.4)定容至1.8 mL,然后加入0.2 mL的H2O2(10 mmol/L),40 ℃恒溫水浴1 h,加入1 mL 2.8%的三氯乙酸終止反應,再加入1 mL 1%硫代巴比妥酸,混勻之后于沸水浴中加熱10 min,冷卻后于532 nm處測光吸收值As。以去離子水為陰性對照,測定吸光值A0,抗壞血酸為陽性對照,測定吸光值Ac。則樣品的自由基清除能力(Scavenging Activity,SA)可表示為:SA(%)=[1-(As-A0)/(Ac-A0)]×100

1.2.7.4 超氧陰離子清除能力測定 精確量取4.5 mL Tris-HCl溶液(50 mmol/L,pH8.2)于試管,在25 ℃溫水中預熱20 min,之后依次加入同樣預熱條件下預熱的鄰苯三酚溶液(25 mmol/L)0.3 mL和配制好的待測樣品0.2 mL,并迅速混勻倒入比色皿,波長319 nm處測定吸光度At,每30 s測一次,測定8次。以去離子水作為空白對照,同樣操作條件下測定并計算出鄰苯三酚自氧化速率V0。以At為縱坐標,時間為橫坐標作圖,計算斜率Vt。超氧陰離子自由基清除率計算公式:Y(%)=(1-Vt/V0)×100

2 結果與分析

2.1 EIP和EIPA紅外光譜分析

將EIP和EIPA進行紅外表征,測定紅外光譜波長范圍為400～4000 cm-1,結果見圖1。

圖1 滸苔多糖紅外光譜Fig.1 IR spectrum of E. intestinalis polysaccharides

2.2 硫酸化單因素實驗

采用BaCl2-明膠比濁法測定腸滸苔多糖中硫酸根含量,以硫酸根含量為橫坐標,吸光度值為縱坐標繪制標準曲線,獲得標準曲線方程為y=2.2287x+0.0043,R2=0.9993。

采用氨基磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法按照單因素實驗設計硫酸化EIP,通過設計單因素實驗改變硫酸化條件以獲得不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖。由硫酸根標準曲線計算出EIPA的硫酸根含量以及取代度,以影響因素為橫坐標,取代度(DS)為縱坐標,結果如圖2所示。

由圖2可知,溫度在80 ℃時EIPA的取代度最高,達1.66。這說明硫酸化的最適溫度為80 ℃,溫度過低不利于腸滸苔多糖硫酸化,溫度過高可能會破壞糖鏈自身的結構[29]。圖中顯示硫酸化時間越長取代度越高,DMF用量越多取代度越低,可能是由于DMF用量少腸滸苔多糖分散密集,酸度適宜,使得取代度較高[30]。氨基磺酸的用量在2.0 g時的取代度最高,說明氨基磺酸用量太少,可能達不到反應所需的酸性環境,但酸性過酸是會引起腸滸苔多糖的降解[12]。分析實驗結果,硫酸化100 mg腸滸苔多糖在溫度80 ℃左右,加入20～40 mL DMF,2.0 g左右氨基磺酸,磁力攪拌反應4～5 h所得硫酸化腸滸苔多糖取代度比較高。

2.3 腸滸苔多糖的抗氧化活性測定

2.3.1 DPPH自由基清除能力 不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖對DPPH自由基的清除率結果見表1。

圖2 不同因素對取代度的影響Fig.2 Effects of different factors on the DS

表1 不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖對DPPH自由基的清除率(%)

Table 1 Scavenging rate of different DS of sulfated polysaccharides fromE.intestinalison DPPH free radicals(%)

取代度質量濃度(mg/mL)000160080421016601661±0102222±0253731±0565654±0616437±05815301399±0101195±0223266±0455046±0056137±05014201338±0512013±0923097±0935212±0536171±02111401314±0361971±0043160±0515827±0106587±02610001317±0501422±0282718±0425997±0396880±01109501141±0221930±0513674±0486359±0387288±01309001159±0381141±0692476±0865884±0176763±03808101120±0151365±0072527±0555824±0126559±0280720908±0641204±0102333±0685627±0426467±04606101019±0701705±0873486±0315134±0036144±0300560887±0621861±0442261±0564023±0374937±0640430738±0121120±0152300±0484052±0115648±044VC04173±0314483±0665499±0937984±0328987±045EIP0755±0162047±0343041±0574555±0294937±017

分析實驗結果可知,EIPA對DPPH自由基的清除隨著濃度的增大而增大,但在濃度大于2.0 mg/mL后其清除DPPH自由基的能力變化趨于平緩,相比于抗壞血酸VC,EIPA的清除能力略低。但硫酸化后,EIPA對DPPH自由基的清除效果比EIP明顯提高,并且隨著取代度的增加,EIPA對DPPH自由基的清除能力呈增大趨勢,質量濃度為2、10 mg/mL取代度為0.95時,對DPPH自由基的清除效果最好,當取代度大于0.95時,EIPA對DPPH自由基的清除能力有所下降。

2.3.2 還原能力測定結果 不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖的還原能力結果見表2。

表2 不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖的還原能力

Table 2 The reducing power of different DS of sulfated polysaccharides fromE.intestinalis

取代度質量濃度(mg/mL)0001600804210166000086±0001200698±0003201288±0007402744±0001008301±00055153000066±0000700565±0001100997±0002002556±0009103517±00056142000213±0006500613±0002701372±0003203858±0001008486±00144114000279±0003800621±0002101116±0007103951±0005409747±00066100000169±0005201330±0003803858±0003406670±0010113821±00097095000147±0000701175±0008802859±0005606345±0009915147±00123090000122±0003401203±0002002843±0005906479±0007711088±00049081000102±0002901028±0004402170±0002303691±0005209335±00103072000160±0001801176±0006702264±0009904096±0014107031±00028061000164±0001000891±0004301219±0001903413±0005606524±00078056000109±0001000382±0002301014±0000902039±0007805454±00034043000107±0001000335±0000900927±0003902126±0005403390±00050VC002968±0006106889±0005624828±0004426403±0006027103±00089EIP000055±0001500416±0000601225±0003402033±0005503592±00052

表3 不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖對羥基自由基的清除率(%)

Table 3 Scavenging rate of different DS of sulfated polysaccharides fromE.intestinalison hydroxyl free radicals(%)

取代度質量濃度(mg/mL)00016008042101660889±0641294±0113095±0714100±0784299±0101530551±038749±0331055±0073478±0133785±0231420636±014709±54818±0272891±0253167±0121140751±010758±043820±0043280±0893488±0561000864±0321190±0312155±0514278±0254785±0580950864±0101210±0312757±0144967±0585495±0790900676±021990±0241155±0103978±0504685±0330810676±012790±0401155±0183148±0234922±0620720614±007690±077955±0163378±0493385±0430610789±0461146±0382580±0434158±0674458±0920560363±005900±641355±0462778±0783050±0450430676±052290±571346±0522078±0112685±067VC05178±0786278±0567735±0549279±0879530±091EIP0301±003812±0311873±0383035±0103877±044

表4 不同取代度的硫酸化腸滸苔多糖對超氧陰離子的清除率(%)

Table 4 Scavenging rate of different DS of sulfated polysaccharides fromE.intestinalison superoxide anion(%)

取代度質量濃度(mg/mL)000160080421016601518±0232046±0342473±0442930±0473372±01815301990±0602047±0132193±0492663±0233260±05414201089±0471176±0151421±0672279±0182663±01311402030±0252379±0062496±0112936±0223658±04810002106±0112187±0482663±0142931±0193754±02409503037±0103267±0583522±0274013±0734536±04209002172±0562184±0032285±0322656±0223670±02908102006±0112116±0502192±0352301±0333754±01207201833±0092006±0462598±0082826±0243479±01006101028±0141076±0541248±0241761±0542616±04305601218±0031821±0462053±0052252±0262652±01404302188±0052256±0552294±0412507±0342574±067VC01808±0561965±0423153±0888821±0789947±050EIP0966±0051149±0361149±0072415±0292480±032

EIPA的還原能力與其吸光度值呈正相關,吸光度值越大其還原能力就越強。因此通過比較吸光度值的大小,可以反映出多糖的抗氧化活性大小。EIPA有一定的還原能力,而且在濃度范圍內,還原能力隨著其濃度的增大而增大。但與VC相比,EIPA的還原能力較低,但硫酸化后,EIPA的還原能力比EIP明顯增強,并且隨著取代度的增加,EIPA的還原能力增大,但當取代度大于某個值時(如質量濃度為10 mg/mL組,取代度大于0.95時),EIPA的還原能力也有所降低。

2.3.3 羥基自由基清除能力測定結果 硫酸化后滸苔多糖的羥基自由基清除率結果如表3所示。

分析實驗結果,EIPA對羥基自由基的清除呈線性增長,但在濃度大于2.0 mg/mL時后其清除羥基自由基的能力增長趨于平緩,硫酸化后多糖EIPA對羥基自由基的清除率適當濃度的適當取代度下(如質量濃度為10 mg/mL,取代度為0.95時)能達到抗壞血酸VC(清除率90%以上)的50%以上,相比于硫酸化前,其清除羥基自由基的能力有所提高。雖然EIPA對羥基自由基的清除效果比EIP有所提高,但提高幅度沒有對DPPH自由基的清除效果和還原能力大,隨著取代度的增加,EIPA對羥基自由基的清除能力增大,但不是取代度越大越好,取代度在0.95左右時,質量濃度為2、10 mg/mL EIPA對羥基自由基的清除效果較好,達50%左右。

2.3.4 超氧陰離子清除能力測定結果 不同取代度的硫酸化后滸苔多糖對超氧陰離子的清除率,結果如表4所示。

分析實驗結果可知,EIPA有一定的清除超氧陰離子的能力,并且清除超氧陰離子的能力隨著濃度的增大而增大,但在濃度達到2.0 mg/mL時其清除超氧陰離子的能力增長趨于平緩,清除率達40%左右。EIPA對超氧陰離子的清除效果比EIP有所提高,并且隨著取代度的增加,EIPA對超氧陰離子的清除能力增大,但當取代度大于0.95時,EIPA對超氧陰離子的清除能力有所下降。取代度在0.8～1.2范圍內,腸滸苔多糖的抗氧化性較強。

3 結論與討論

通過氨基磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法對腸滸苔多糖進行結構修飾,能增加其硫酸根的數量,改變其糖鏈的結構。硫酸化過程受到硫酸化溫度、硫酸化時間、DMF用量、氨基磺酸用量等的影響,從而影響腸滸苔多糖硫酸根增加的量,即取代度大小。其中,溫度過高,氨基酸用量過多都會使取代度降低。這可能是由于高溫會破壞多糖的結構[28],氨基磺酸用量過多使得反應環境過酸,腸滸苔多糖容易降解[12]。DMF用量多少直接影響腸滸苔多糖的分散和整個反應環境的酸堿度;增長時間有利于硫酸化反應,但這會使得生產成本增加,降低經濟效益。腸滸苔多糖硫酸化在溫度80 ℃左右,DMF用量范圍20～40 mL,氨基磺酸用量2.0 g左右,4～5 h的反應條件所得硫酸化腸滸苔多糖取代度比較高。

硫酸化修飾后腸滸苔多糖對于DPPH自由基、羥基自由基、超氧陰離子的清除能力和還原能力均能增強。這與Wang[14]等用氯磺酸法硫酸化修飾白沙蒿多糖并研究其抗氧化活性的實驗結果一致。在本實驗中,尤其是腸滸苔多糖對DPPH自由基的清除效果和還原能力的增幅比較大,質量濃度為2 mg/mL DPPH自由基的清除效果由原來的45.55%增加到了63.59%(取代度0.95),質量濃度為2 mg/mL的EIPA還原能力吸光值由0.3592增長到1.5147(取代度0.95),增強效果明顯。隨著取代度增大,腸滸苔多糖的抗氧化性先增強后減小,取代度在0.8～1.2范圍內,腸滸苔多糖的抗氧化活性較強。此取代度范圍對應的腸滸苔多糖硫酸化條件為60～70 ℃左右,DMF用量范圍20～40 mL,氨基磺酸用量1.0～1.5 g左右,反應4～5 h。這說明取代度并不是越大越好。適度的硫酸化修飾才是提高腸滸苔多糖抗氧化活性的有效方式。至于取代度過大為何會導致其抗氧化活性下降,其原因尚不得知,需要進一步分析其結構,研究其抗氧化機理才能最終確定。

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Antioxidant activity of sulfated polysaccharides with different substituting degrees fromEnteromorphaintestinalis

LIU Yu-feng,JIA Shu-ying,LIU Fei-fei,HAO Zai-bin,LI Xia*

(Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of Food Safety and Detection,College of Chemistry and Bioengineering,Guilin University of Technology,Guilin 541004,China)

Enteromorpha intestinalispolysaccharidesweremodifiedbysulfamicacid-N,N-dimethylformamidemethodtopreparedifferentsubstitutiondegree(DS).AndtherelationshipbetweenDSanditsantioxidantactivitywasevaluatedbydeterminingthescavengingabilityofDPPHradical,hydroxylfadical,superoxideanionradicalandreducingpower.TheresultsindicatedthattheDSwasaffectedbysulfatedtemperature,sulfatedtime,dosageofDMFanddosageofsulfamicacid.Thedosageofsulfamicacidwasthemostsignificantfactor.TheantioxidantactivityofE. intestinalispolysaccharideswasincreasedatfirstandthendecreasedwiththeincreasingofDS,andE. intestinalispolysaccharidesshowedgoodantioxidantactivitywhentheDSwasintherangeof0.8～1.2.ItsuggestedthatmoderatesulfatedmodificationwasthemosteffectivemethodtoimprovetheantioxidantactivityofE. intestinalispolysaccharides.

Enteromorpha intestinalispolysaccharides;substitutingdegrees;antioxidantactivity

2015-10-30

劉玉鳳(1990-)，女，碩士研究生，研究方向：天然產物的結構和生物活性，E-mail：liuyufengdyx@163.com。

*通訊作者:李霞(1981-)，女，博士，副教授，研究方向：生物大分子的結構和生物活性研究，E-mail：biology754@163.com。

國家自然科學基金(31200269)；廣西自然科學基金項目(2014GXNSFBA118134)；廣西壯藥產業化工程院科研項目(2014GXZYCYH03)；桂林理工大學博士科研啟動資金項目資助。

TS201

A

1002-0306(2016)19-0142-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.19.019