滴滴涕單克隆抗體的制備及其評價

楊星星，畢思遠，朱 海，顧大勇

(1.廣東省深圳市易瑞生物技術有限公司，廣東 深圳 518102；2.深圳市檢驗檢疫科學研究院，廣東 深圳 518045 )

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滴滴涕單克隆抗體的制備及其評價

楊星星1，畢思遠1，朱 海1，顧大勇2*

(1.廣東省深圳市易瑞生物技術有限公司，廣東 深圳 518102；2.深圳市檢驗檢疫科學研究院，廣東 深圳 518045 )

以滴滴涕(DDT)的特征部分為基礎設計并合成了半抗原4-{4-[2,2,2-三氯-1-(4-氯-苯基)-乙基]-苯基}-丁酸(DDT-H1)、4-[4-(2,2,2-三氯-1-對甲苯基-乙基)-苯基]-丁酸(DDT-H2)，并采用活潑酯法制備免疫原 DDT-H1-BSA，以及混合酸酐法制備包被原DDT-H1-OVA、DDT-H2-OVA；用DDT-H1-BSA對小鼠進行免疫，通過細胞融合、篩選、克隆等步驟得到1株能穩定分泌DDT農藥抗體的單克隆細胞株。細胞株經擴大培養后，注射小鼠體內產生腹水，并將其用辛酸-硫酸銨和protein A柱子純化出單克隆抗體。其分泌的單克隆抗體免疫球蛋白亞類為IgG1，單抗腹水的效價為1.68×105，親和力Ka為5.238×1011L·mol-1，與其它幾種代謝物有一定的交叉反應。在此基礎上，利用獲得的單抗研究建立DDT的間接競爭酶聯免疫吸附檢測法(icELISA)。結果表明，所建立的間接競爭 ELISA 方法的線性范圍(IC20～IC80)為 6.6～521.8 ng/mL，可用于檢測農副產品、環境中殘留的DDT及其代謝物。

滴滴涕；單克隆抗體；酶聯免疫檢測；代謝物

有機氯農藥滴滴涕(DDT)作為廣譜殺蟲劑從20世紀50年代開始在全世界范圍內廣泛使用。這一類含氯原子的有機合成殺蟲劑，具有極高的脂溶性和穩定性，可在生物體內富集很高的濃度，且在環境中降解緩慢,其活性成分為p,p′-DDT，屬持久性有機污染物(POPs)[1-2]。DDT在沉積物中的兩種主要分解物為2，2-雙(4-氯苯基)-1，1-二氯乙烯(DDE)和2，2-雙(4-氯苯基)-1，1-二氯乙烷(DDD)，而DDD 本身也用作殺蟲劑。……