云南小粒咖啡中六六六、滴滴涕殘留量測定適宜方法研究

劉丹丹++何飛飛++張艷++郝淑美

摘要 采用國標法、國標改進法及固相吸附法3種不同的前處理方式提取凈化咖啡中的六六六、滴滴涕，建立了一種新型的高效、快速、靈敏度高的測定分析方法。結果表明，經過固相吸附法處理純化提取的六六六、滴滴涕加標回收率最高，達到112.7%，結果穩定，重復準確率高。因此，與國標法相比較，固相吸附法更適宜用于咖啡中六六六、滴滴涕的檢測。

關鍵詞 小?？Х?；六六六；滴滴涕；殘留量；測定方法；云南省

中圖分類號 S571.204；TS207.53 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）20-0094-02

隨著人們生活水平質量的提高，國內咖啡的需求量直線上升。目前，云南省已成為中國最大的咖啡生產基地，種植面積和產量都已占到全國的98%以上。但是，在咖啡的種植過程中由于受到各種病蟲害的傳播，并且在其生產加工中有可能受到污染。因此，咖啡飲品的質量安全問題備受人們的關注。

目前，六六六、滴滴涕等有機氯類農藥廣泛用于咖啡的栽培管理中，其殺蟲效果顯著，但其毒性大，不易分解，并且長期存在于土壤及植物體內，不僅嚴重污染環境，也導致了食品安全隱患問題。但由于咖啡的基質復雜[1-2]，顆粒較細，油脂及色素含量較高，給咖啡中的農藥殘留測定造成困難，國內外關于咖啡中農藥殘留的研究報道也非常有限[3]。

本研究分別采用國標法、國標改進法及固相吸附法3種方法萃取純化小?？Х戎械牧?、滴滴涕，利用氣象色譜檢測器進行分析，并通過比較加標回收率以便確認可準確用于測定咖啡中2種農藥殘留量的最適宜的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

氣相色譜儀（安捷倫；Agilent 7890A）；分析天平（島津；AUY220）；旋轉蒸發儀（東悅；R301）、石油醚（阿拉??；色譜純）、濃硫酸（阿拉丁）、氯化鈉（阿拉?。簧V純）、檸檬酸鈉（阿拉丁；色譜純）、無水硫酸鎂（阿拉丁；色譜純）、甲苯（阿拉??；色譜純）、檸檬酸氫二鈉（阿拉??；色譜純）、N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑（Agela；PA0100）、乙腈（阿拉?。簧V純）。

六六六、滴滴涕標準品：a-六六六、γ-六六六、？奩-六六六的濃度為0.005 mg/L；PP-DDT濃度為0.1 mg/L；P P-DDD：0.02 mg/L；OP-DDT濃度為0.05 mg/L；β-六六六和PP-DDE濃度為0.01 mg/L。以上標準品均購于阿拉丁試劑，分析標準品。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準溶液的配制。精密稱取標準品各10 mg，溶于苯中，分別移于100 mL容量瓶中，以苯稀釋至刻度，混勻，濃度為100 mg/L，貯于4 ℃冰箱中。

農藥混合標準工作液：分別量取上述各標準液于同一容量瓶中，以正己烷稀釋至刻度。a-六六六、γ-六六六、？奩-六六六的濃度為0.005 mg/L；P P′-DDD濃度為0.02 mg/L；OP′-DDT濃度為0.05 mg/L；PP′-DDT濃度為0.1 mg/L；β-六六六和PP′-DDE濃度為0.01 mg/L。

1.2.2 色譜條件。色譜柱為長2 m、內徑3 mm的玻璃柱，內裝涂以2% QF-1和1.5% OV-17混合固定液的0.149～0.177 mm硅藻土。檢測器溫度225 ℃；進樣口溫度195 ℃；柱溫185 ℃。載氣為高純氮，流速110 mL/min；進樣量為1～10 uL。外標法定量。

1.2.3 樣品前處理及測定。本試驗采用濃度為1.25 mg/kg六六六、滴滴涕的農藥對云南小?？Х确圻M行處理，采用3種不同的方法提取凈化六六六、滴滴涕進行氣相色譜法測定其含量。

國標法：根據國家檢測標準GB/T 5009.19-2008采用的方法對樣品進行提取純化，具體如下：

（1）稱取1 g咖啡粉，用37 μm（相當于400目）篩選，加入1 mL混合內標工作液進行處理。

（2）加入石油醚20 mL，震蕩30 min（150 r/min），然后過濾，旋轉蒸發儀蒸發至近干（溫度設置為65～70 ℃），定容至5 mL。

（3）加0.5 mL濃硫酸凈化，振搖0.5 min，于3 000 r/min離心15 min。取上清液進行測定。

國標改進法：

（1）稱取1 g咖啡粉，用37 μm（相當于400目）篩選，加入1 mL混合內標工作液進行處理。

（2）加石油醚∶丙酮（5∶1，v/v）20 mL，震蕩30 min（150 r/min），過濾，旋轉蒸發儀蒸發至近干（溫度設置為65～70 ℃），定容至5 mL。

（3）加0.5 mL濃硫酸凈化，振搖0.5 min，于3 000 r/min離心15 min。取上清液進行測定。

固相吸附法：

（1）稱取咖啡粉1 g（精確至0.1 mg）置于50 mL具蓋離心管中，加入10 mL水，振蕩，直至樣品被水充分浸潤，靜止10 min。

（2）移取乙腈10 mL和混合內標工作液1 mL到離心管中，于漩渦混合振蕩儀上以2 000 r/min 速度振蕩1 min，分別加入無水硫酸鎂4 g、氯化鈉1 g、檸檬酸鈉1 g、檸檬酸氫二鈉0.5 g和甲苯5 mL，立即于漩渦混合振蕩儀上以2 000 r/min 速度振蕩2 min，然后以4 000 r/min 離心10 min。

（3）移取5 mL樣品提取液上層清液于10 mL離心管中，加入無水硫酸鎂500 mg和N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑150 mg，于漩渦混合振蕩儀上以2 000 r/min 速度振蕩2 min，以6 000 r/min 離心2 min，上機測定。

1.2.4 加標回收率的測定。稱取小?？Х壬箻悠?.0 g，加入已知濃度的標準品混合液1 mL，得到回收率測試樣本，與樣品同方法進行處理，取1 μL上清液進行分析。

1.2.5 結果計算。試樣中六六六、滴滴涕及其異構體或代謝物的單一物質的質量分數計算公式如下：

W=（A1/A2）×m1/m2×V1/V2

式中，W為試樣中六六六、滴滴涕及其異構體或代謝物的單一物質的質量分數（mg/kg）；m1為單一農藥標準溶液的質量（ng）；m2為被測定試樣的取樣量（g）；A2為各農藥組分標準的峰值；A1為被測定試樣各組分的峰值（峰高或面積）；V1為被測定試樣的稀釋體積（mL）；V2為被測定試樣的進樣體積（uL）。

2 結果與分析

六六六、滴滴涕經提取、凈化后用氣相色譜法測定，與標準比較定量。六六六的4種異構體標準品的出峰順序為α-六六六、β-六六六、γ-六六六和δ-六六六；滴滴涕的4種異構體標準品的出峰順序為PP-DDE、OP-DDT、PP-DDT和PP-DDD。加標處理后樣品中六六六、滴滴涕農藥殘留量測定的結果如圖1所示。

小?？Х冉浲粷舛龋?.25 mg/kg）混合標準品處理后，2種農藥殘留量的測定結果差距較大。利用國標法測定的結果準確率較低，其次為國標改進法，固相萃取測定的方法準確率最高?；厥章蕼y試結果見表1，可以看出，3 種處理方法的平均回收率在79.8%～112.7%之間。由此可見，固相萃取純化回收得到的六六六、滴滴涕的殘留量最高，測量準確，可以減少萃取操作中的損失。

3 結論與討論

咖啡作為一種深受人們喜愛的飲品，對其需求量日益增加。據有關數據統計，我國咖啡消費者的數量越來越大，通過對咖啡農藥殘留進行檢測，既可以保障消費者的身體健康，也可以限制國外一些農殘超標的咖啡進入我國市場?？Х戎械霓r藥殘留主要是由于種植過程中使用或環境中攝入的，常用的殺蟲劑及殺菌劑有六六六、滴滴涕、樂果、百菌清、多菌靈、甲基托布津等[4]。這些農藥的種類繁多，性質各異，傳統的分析方法難以保證其檢測精度。

目前，利用離子-氣象色譜-質譜聯用的方法成為研究的熱點[5]，但是測定費用較高并且針對性較差。隨著現代檢測技術的進步，開發高效準確的農藥殘留檢測方法，以及嚴格的農藥限量標準尤其重要[6-9]。

本研究中采用3種不同的方法萃取凈化咖啡粉中六六六、滴滴涕，并通過氣相色譜檢測技術對其殘留量進行了測定。經過分析發現：國標法中液-液分配萃取純化材料用量大，需經多次純化才能得到合格凈化液，耗時長，操作麻煩，回收率低，六六六和滴滴涕的測定結果不穩定；改進的國標處理方法，六六六和滴滴涕不同異構體的結果差異很大；固相吸附法采用N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑凈化效果好，回收率高，材料節省并且沒有采用有毒物質，測定方法準確，精密度較高。因此，固相吸附法可作為測定六六六和滴滴涕的主要方法，比傳統檢測法更能滿足目前的要求。

4 參考文獻

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