正交試驗(yàn)優(yōu)選麩煨肉豆蔻片的炮制工藝

袁子民，劉歡，王靜，賈天柱，陳劍鋒

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600；2.遼寧成大方圓醫(yī)藥有限公司，遼寧 沈陽(yáng) 110005

正交試驗(yàn)優(yōu)選麩煨肉豆蔻片的炮制工藝

袁子民1，劉歡1，王靜1，賈天柱1，陳劍鋒2

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600；2.遼寧成大方圓醫(yī)藥有限公司，遼寧 沈陽(yáng) 110005

目的 優(yōu)選切片后肉豆蔻的最佳炮制工藝。方法 以煨制溫度、煨制時(shí)間和加麩量為考察因素，以總木脂素、揮發(fā)油和脂肪油的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)，優(yōu)選麩煨肉豆蔻片的炮制工藝。結(jié)果 肉豆蔻片的最佳炮制工藝為100 g肉豆蔻加40 g麥麩，110～120 ℃煨制20 min。結(jié)論 該工藝合理，可靠，可為肉豆蔻炮制新工藝的研究提供依據(jù)。

肉豆蔻片；麩煨；揮發(fā)油；脂肪油；總木脂素；正交試驗(yàn)

1 儀器與試藥

SartoriusCP225D十萬(wàn)分之一分析天平，SG3300型超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司），U-3010型紫外可見分光光度計(jì)（日本日立公司），UW220H型電子分析天平（日本島津公司），電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）。

肉豆蔻（浙江中醫(yī)藥大學(xué)飲片廠提供，產(chǎn)地印度尼西亞，批號(hào)090414），經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)賈天柱教授鑒定為肉豆蔻科植物肉豆蔻Myristica fragrans houtt.的干燥成熟種仁。肉豆蔻片，自制（肉豆蔻潤(rùn)后，切成厚片，3～5 mm）。去氫二異丁香酚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)11838-201102）；甲醇、石油醚為分析純，水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制工藝試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，選取麩煨溫度（A）、麩煨時(shí)間（B）、麥麩加入量（C）3個(gè)因素分別進(jìn)行三水平考察（見表1）。分別取肉豆蔻片200 g，與麥麩同置炒制容器內(nèi)，按L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)后，篩

肉豆蔻為肉豆蔻科植物肉豆蔻Myristica fragrans houtt.的干燥成熟種仁，具有溫中行氣、澀腸止瀉功效。主要成分為揮發(fā)油、木脂素、脂肪油等[1-2]。肉豆蔻生品需要炮制后作為藥用，自古有“去其油用其熟”之說(shuō)，目前炮制方法很多，藥典收錄方法為麩煨肉豆蔻[3]，但亦有切片煨或打碎后煨者[4-5]。為改變傳統(tǒng)工藝，利于工業(yè)化生產(chǎn)，進(jìn)一步增強(qiáng)減毒增效的作用，本研究采用肉豆蔻切片后再進(jìn)行麩煨的炮制新工藝，傳統(tǒng)麩煨為肉豆蔻未切片整個(gè)直接麩煨，切片后麩煨能夠增加麩煨的受熱面積，利于揮發(fā)油中肉豆蔻醚、黃樟醚毒性成分[6]及脂肪油的去除，同時(shí)還能提高飲片的穩(wěn)定性，避免存放過(guò)程中黃曲霉素的污染。因此，本研究采用正交試驗(yàn)法對(duì)肉豆蔻切片后麩煨的炮制新工藝進(jìn)行優(yōu)選，確定最佳炮制工藝，為麩煨肉豆蔻炮制新工藝的研究、生產(chǎn)及炮制機(jī)理的深入研究提供依據(jù)。去麩皮，放涼，即得。以肉豆蔻總木脂素、揮發(fā)油、脂肪油含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，并計(jì)算綜合評(píng)分。綜合評(píng)分＝40×總木脂素含量÷最大總木脂素含量＋20×最小揮發(fā)油含量÷?lián)]發(fā)油含量＋40×最小脂肪油含量÷脂肪油含量。

表1　L9（34）正交試驗(yàn)因素水平表

2.2 總木脂素含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取去氫二異丁香酚對(duì)照品適量，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成300 μg/mL對(duì)照品溶液。

2.2.2 線性關(guān)系考察 分別精密量取上述對(duì)照品溶液0.05、0.10、0.2、0.3、0.4 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 μg/mL對(duì)照品溶液，以甲醇為空白，于274 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程Y＝0.133 1X－0.011 1（r＝0.999 9）。結(jié)果去氫二異丁香酚在15.0～120.0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3 供試品溶液制備 取各正交試驗(yàn)項(xiàng)下麩煨肉豆蔻片粉末（過(guò)20目篩）0.1 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0 mL置10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液[7]。2.2.4 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，以甲醇為空白，于274 nm處測(cè)定吸光度，重復(fù)操作6次。結(jié)果表明儀器精密度良好，RSD＝1.21％。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一麩煨肉豆蔻片樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法分別制備6份供試品溶液，以甲醇為空白，于274 nm處測(cè)定吸光度，RSD＝2.11％，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一麩煨肉豆蔻片供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h以甲醇為空白，于274 nm處測(cè)定吸光度，RSD＝1.74％，結(jié)果表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批麩煨肉豆蔻片樣品（已知含量為1.206 5％）0.05 g，精密稱定，各6份，分別精密加入去氫二異丁香酚對(duì)照品溶液（濃度為300 μg/mL）2.0 mL，再精密加入甲醇48.0 mL，其余按“2.2.3”項(xiàng)下方法分別制備6份供試品溶液。以甲醇為空白，于274 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2，表明回收率良好。

表2　加樣回收率試驗(yàn)

2.2.8 含量測(cè)定 取各正交試驗(yàn)項(xiàng)下麩煨肉豆蔻片粉末（過(guò)20目篩）0.1 g，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，以甲醇為空白，分別于274 nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算其總木脂素含量。

2.3 揮發(fā)油含量的測(cè)定

取正交試驗(yàn)項(xiàng)下麩煨肉豆蔻片粉末（過(guò)20目篩）18.0 g，精密稱定，按2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部附錄XD中揮發(fā)油測(cè)定法測(cè)定。

2.4 脂肪油含量的測(cè)定

取正交試驗(yàn)項(xiàng)下麩煨肉豆蔻片粉末（過(guò)20目篩）1.0 g，精密稱定，按2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部附錄IX N中脂肪油測(cè)定法測(cè)定。

2.5 正交試驗(yàn)結(jié)果與方差分析

正交試驗(yàn)安排與結(jié)果見表3，方差分析見表4。直觀分析表明，影響麩煨工藝的主要因素依次為A＞C＞B，A因素對(duì)炮制工藝有顯著影響，其他因素影響不顯著。由方差分析可知，A因素對(duì)提取工藝有顯著影響，其他因素影響均不顯著。經(jīng)肉豆蔻片最佳炮制工藝為A2B2C1，即100 g肉豆蔻片加40 g麥麩，110～120 ℃煨制20 min。

2.6 工藝驗(yàn)證及與傳統(tǒng)工藝比較

為保證該工藝的重復(fù)性、穩(wěn)定性，本試驗(yàn)按確定的最佳炮制工藝，進(jìn)行3次工藝驗(yàn)證試驗(yàn)，取肉豆蔻片200 g進(jìn)行炮制，并與肉豆蔻生品及藥典法炮制麩煨肉豆蔻進(jìn)行比較，結(jié)果見表5。結(jié)果表明，該炮制工藝穩(wěn)定、可靠，重復(fù)性好，并在去除脂肪油方面優(yōu)于面煨法。

表3　麩煨肉豆蔻片炮制工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表4　炮制工藝試驗(yàn)結(jié)果方差分析

表5　炮制工藝驗(yàn)證及與傳統(tǒng)工藝比較的測(cè)定結(jié)果

3 討論

本試驗(yàn)曾對(duì)肉豆蔻片的切制工藝進(jìn)行考察，以不易破碎、不出現(xiàn)翹片為準(zhǔn)，確定浸潤(rùn)肉豆蔻時(shí)間為10～12 h、切片厚度為厚片。

本試驗(yàn)以肉豆蔻總木脂素、揮發(fā)油、脂肪油含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。木脂素為肉豆蔻有效成分，其含量越高越好，故將最大木脂素含量設(shè)為40分。揮發(fā)油既是有效成分又是毒性成分，含量不是降得越低越好，故將最小揮發(fā)油含量設(shè)為20分。脂肪油含量則是越低越好，故將最小脂肪油含量設(shè)為40分。

肉豆蔻在存放過(guò)程中易受黃曲霉素污染而發(fā)霉，肉豆蔻切片后麩煨可增加其飲片的穩(wěn)定性，以減少黃曲霉素的污染，有利于保證肉豆蔻飲片的質(zhì)量，便于臨床應(yīng)用。另外，傳統(tǒng)麩煨溫度為150～160 ℃，而切片后麩煨的溫度為110～120 ℃，利于有效成分的穩(wěn)定。

[1]張蕾,徐云峰,沈碩,等.肉豆蔻的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥, 2010,12(6)：16-17.

[2]李飛,楊秀偉,程燕,等.肉豆蔻木脂素的體外代謝初步研究[J].中國(guó)新藥雜志,2008,17(7)：560-561.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：127.

[4]崔學(xué)義,季宇彬.肉豆蔻制工藝研究[J].中國(guó)中藥雜志,1992,17(10)：599-600.

[5]陳之偉.肉豆蔻炮制經(jīng)驗(yàn)介紹[J].中藥通報(bào),1984,9(5)：23-24.

[6]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,1986：394.

[7]袁子民,胡娜,王靜,等.肉豆蔻、麩煨肉豆蔻中總木脂素的含量測(cè)定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(12)：112-113.

Optimization of Bran-roasted Processing Technology of Sliced Myristicae Semen by

Orthogonal Test

YUAN Zi-min1, LIU Huan1, WANG Jing1, JIA Tian-zhu1, CHEN Jian-feng2(1. Liaoning

University of TCM, Dalian 116600, China; 2. Liaoning Chengda Fangyuan Medicine Chained Limited Company, Shenyang 110005, China)

Objective To optimize the processing technology of sliced Myristicae Semen. Methods Roasting temperature, roasting time and the amount of bran were set as factors, and the content of total lignans, volatile oil, fatty oil were set as evaluation indicators. The processing technology of sliced Myristicae Semen was optimized by L9(34) orthogonal test. Results The optimal processing technology was as following: 40 g bran plus 100 g sliced Myristicae Semen, roasting for 20 minutes at 110-120 ℃. Conclusion The process is reasonable and reliable, which can provide references for new processing technology of Myristicae Semen.

sliced Myristicae Semen; bran-roasted; volatile oil; fatty oil; total lignans; orthogonal test

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.020

R283.3

A

1005-5304(2016)03-0074-03

國(guó)家自然科學(xué)基金（81274084）

王靜，E-mail：yuanmengwj@163.com

（2015-04-23）

（2015-05-08；編輯：陳靜）