高效液相色譜法同時測定趕黃草中槲皮素和山柰酚含量

羅興平，楊玲霞

1.西北民族大學化工學院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省食品藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州 730070

高效液相色譜法同時測定趕黃草中槲皮素和山柰酚含量

羅興平1，楊玲霞2

1.西北民族大學化工學院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省食品藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州 730070

目的 建立高效液相色譜法同時測定趕黃草中槲皮素和山柰酚含量的方法。方法 采用高效液相色譜法，色譜柱為Kromasil C18柱（4.0 mm×250 mm，5.0 μm），流動相為甲醇-0.1％磷酸溶液（50∶50），流速1.0 mL/min，檢測波長360 nm，檢測溫度為室溫。結果 槲皮素、山柰酚分別在0.105 6～2.112 0 μg和0.023 6～0.472 μg范圍內具有良好線性關系，平均回收率分別為98.46％（RSD＝2.29％）和98.17％（RSD＝1.99％）。結論 該法準確、靈敏，可用于趕黃草中槲皮素和山柰酚的含量測定。

趕黃草；槲皮素；山柰酚；高效液相色譜法；含量測定

趕黃草為虎耳草科Saxifragaceae扯根菜屬Penthorum植物扯根菜Penthorum chinense Pursh.的干燥地上部分，始載于明代《救荒本草》，苗族民間歷來作為藥食兩用植物，被譽為“神仙草”。其性溫、味甘、無毒，具有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、退黃、平肝的功效，主要分布于華北、華東、中南及陜西、甘肅、四川和貴州等地[1-2]，近年來逐漸馴化為家種，于四川省瀘州市古藺縣境內大量種植。

目前關于趕黃草的化學、藥理、臨床研究已取得一定進展[3-9]，以其為原料開發的肝蘇片、肝蘇顆粒、肝蘇膠囊已在臨床得到廣泛應用[10-11]，有關趕黃草及其制劑的質量標準評價多為單一的槲皮素、沒食子酸或總黃酮測定[12-15]。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）同時測定趕黃草中槲皮素和山柰酚的含量，為有效控制趕黃草及其制劑的質量，促進其進一步開發應用提供技術支持。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；梅特勒XS205DU電子天平，瑞士Mettler toledo公司；B3200S-T型超聲波清洗器，上海必能信超聲有限公司；MILLI Q超純水系統，美國Millipore公司。

槲皮素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100081-200406）；山柰酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110861-2004050）。趕黃草分別采自四川省古藺縣、四川省成都市新都區、甘肅省康縣、甘肅省天水市，由甘肅省食品藥品檢驗所楊玲霞副主任藥師鑒定為虎耳草科扯根菜屬植物扯根菜Penthorum chinense Pursh.的干燥全草。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

表2　山柰酚加樣回收率試驗

2.10 樣品測定結果

采用本試驗所建立的方法對5批趕黃草樣品中槲皮素和山柰酚含量進行測定，計算含量，結果見表3。

表3　樣品測定結果（mg/g，n＝3）

3 討論

趕黃草作為藥食兩用的藥材資源，自明代《救荒本草》至《全國中草藥匯編》均有收載，以其為原料研究開發的保健食品也因其解酒醒酒、保肝護肝作用日益受到重視。趕黃草野生資源遍及全國24個省市，但目前僅有四川省瀘州市古藺縣境內有大量種植，這一寶貴的自然資源尚未被《中華人民共和國藥典》收載。因此，應用現代科技手段，進一步闡明趕黃草的藥效物質基礎，提高趕黃草的質量標準，促進該藥材的進一步推廣應用具有重要的意義。

趕黃草主要含有槲皮素、山柰酚及其苷等黃酮類化合物。本試驗中曾以甲醇超聲提取后直接進樣測定，結果槲皮素及山柰酚含量低，雜質峰多，分離度差。采用本文方法，以甲醇-25％鹽酸溶液（4∶1）為溶劑加熱回流水解提取，槲皮素和山柰酚含量明顯提高，雜質峰顯著減少，各成分分離度良好。

水解條件的選擇系參考2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）垂盆草項下的含量測定方法，以甲醇-25％鹽酸溶液（4∶1）為溶劑加熱回流水解1 h。曾對提取時間進行考察，采用四川省古藺縣1號樣品分別水解提取30、60、90、120 min，測定槲皮素含量分別為5.09、5.14、5.13、5.15 mg/g，山柰酚含量分別為0.87、0.92、0.93、0.90 mg/g，結果表明水解提取1 h即可提取完全。

[1]王萌,吳霞,江云,等.趕黃草的研究進展[J].食品與藥品,2013,15(3)：202-204.

[2]中國植物志編委會.中國植物志(第二分冊)[M].北京：科學出版社, 1992：2.

[3]馮浩,王智民,董歌揚,等.趕黃草化學成分的研究[J].中國中藥雜志, 2001,26(4)：260-261.

[4]張旭,楊明.趕黃草有效成分的研究[J].成都中醫藥大學學報,2002, 25(4)：46-51.

[5]馮浩,王智民,董歌揚,等.趕黃草化學成分的研究[J].中國中藥雜志, 2001,26(4)：260-261.

[6]付明,魏麟,余娟,等.扯根菜的化學成分研究[J].中國藥學雜志,2013, 48(22)：1911-1944.

[7]趙建勤,楊明,趙連三,等.扯根菜及其系統提取物抗乙型肝炎病毒體外實驗研究[J].中西醫結合肝病雜志,2002,12(1)：26-27.

[8]張中賢,黃劍臻.趕黃草水提取物利膽退黃作用的研究[J].熱帶醫學雜志,2008,8(2)：125-127.

[9]成霈,顧慧瑩,宋敏,等.趕黃草對預防醉酒及解酒效能研究[J].醫藥世界,2006(5)：142-144.

[10]唐榮珍.肝蘇顆粒治療慢性乙型肝炎療效觀察[J].中西醫結合肝病雜志,2001,11(4)：225-226.

[11]賀勁松,鄭穎俊,陳亮,等.肝蘇顆粒治療慢性乙型肝炎肝纖維化的臨床研究[J].中西醫結合肝病雜志,2007,17(3)：136-138.

[12]尚遠宏,劉圓,彭鐮心,等.RP-HPLC測定扯根菜中槲皮素的含量[J].華西藥學雜志,2005,20(6)：559-560.

[13]余聽,朱燁,向芬,等.不同采收期趕黃草中總黃酮的含量測定[J].瀘州醫學院學報,2010,33(4)：370-371.

[14]賀曉華,許龍,杜方麓,等.反相高效液相色譜法測定趕黃草中沒食子酸的含量[J].中南藥學,2008,6(6)：717-719.

[15]徐珽,楊林,唐堯.高效液相色譜法測定肝蘇顆粒中槲皮素的含量[J].中國醫院藥學雜志,2007,27(1)：123-124.

Simultaneous Content Determination of Quercetin and Kaempferol in Penthorum Chinense

Pursh by HPLC

LUO Xing-ping1, YANG Ling-xia2(1. Institute of Chemical Engineering, Northwest University

for Nationalities, Lanzhou 730000, China; 2. Institute for Food and Drug Control of Gansu Province, Lanzhou 730070, China)

Objective To establish an HPLC method for the simultaneous content determination of quercetin and kaempferol in Penthorum Chinense Pursh. Methods The HPLC analysis was carried out on Kromasil C18(250 mm× 4.0 mm, 5.0 μm) with a mixture of methanol-0.1％ phosphate (50:50) as the mobile phase. The determination wavelength was set at 360 nm with the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at room temperature. Results The quercetin and kaempferol showed good linearity in the range of 0.105 6–2.112 0 μg and 0.023 6–0.472 μg respectively. The average recovery rates of quercetin and kaempferol were 98.46％ (RSD=2.29％) and 98.17％ (RSD=1.99％) respectively. Conclusion The method is accurate and sensitive, which can be used for the content determination of quercetin and kaempferol in Penthorum Chinense Pursh.

Penthorum Chinense Pursh; quercetin; kaempferol; HPLC; content determination

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.021

R284.1

A

1005-5304(2016)03-0077-03

中央高校基本科研業務費專項資金項目(zyz2011058)；西北民族大學科研創新團隊計劃（2014年）

（2015-04-09）

（2015-05-06；編輯：陳靜）