MIR-499在急性冠脈綜合征患者血清中的表達及與QT離散度的相關性研究

呂晉琳吳新華尹雪艷李利華楊 瑛羅文娟張 雷

（1、大理大學，云南大理671000；2、大理大學附屬醫院，云南大理671000）

論著／冠心病

MIR-499在急性冠脈綜合征患者血清中的表達及與QT離散度的相關性研究

呂晉琳1吳新華2尹雪艷1李利華1楊 瑛2羅文娟2張 雷2

（1、大理大學，云南大理671000；2、大理大學附屬醫院，云南大理671000）

目的 探討急性冠脈綜合征患者外周血微小RNA-499（miR-499）的表達及其與QT離散度(QTd)的關系。方法 2014年5月至2015年4月大理大學附屬醫院心血管內科收治的128例ACS患者血清并收集臨床資料，以48例健康體檢者為對照組。分析miR-499在ACS患者血清中的表達及其與QT離散度的關系。結果 ACS患者miR-499和QTd及校正的QTd（QTcd）值均高于正常對照組，并且miR-499表達的升高和QTd值呈正相關。結論 MiR-499表達在ACS患者血清中上調，并與QTd相關，其可能成為ACS新的潛在診療靶點并為預后評估提供重要的臨床參考價值。

急性冠脈綜合征；microRNA-499；QT離散度

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，As)引起的心腦血管疾病發病率漸呈上升趨勢，已成為危害人類健康的主要殺手[1]。在動脈粥樣硬化性疾病中，急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）是一組由急性心肌缺血引起的綜合征，可能引起惡性心律失常甚至心臟停搏，是臨床常見的急危重癥[2]。QT離散度（QTd）是體表心電圖不同導聯間最長與最短QT間期的差值，反映了心室肌復極的不均一性和電不穩定性。研究發現QTd與冠狀動脈粥樣硬化密切相關，并在預測惡性室性心律失常及猝死中有重要參考價值[3]。MiRNAs是一類內源性、非編碼小RNA序列，miRNA基因先在細胞核內轉錄出初始miRNA，再經Drosha-DGCR8復合物剪切為60-80堿基長度帶有莖-環結構的miRNA，它們主要通過與蛋白編碼基因外顯子區或基因信使RNA（mRNA）的種子序列互補結合，致靶基因降解和/或翻譯抑制[4]。近年來，隨著分子生物學及高通量技術的發展，miRNA在As中的作用逐漸引起人們重視，并發現miR-499在急性心肌梗死患者血漿中表達水平明顯升高[5]。本文旨在進一步研究ACS患者血清miR-499表達水平，探討其與QTd的相互關系，以期為ACS診療提供新的靶點。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2014年5月至2015年4月大理大學附屬醫院心血管內科收治的128例ACS患者，其中急性心肌梗死(AMI)37例，不穩定型心絞痛(UA)91例，所有患者均行冠狀動脈造影檢查，以48例健康體檢者為對照組。排除其他心臟疾病，合并嚴重的肝腎功能不全，其他慢性炎癥，卒中，惡性腫瘤，風濕性疾病，近期應用抑炎癥藥物，所有合并心房顫動、束支傳導阻滯、嚴重電解質紊亂、應用影響心肌復極的藥物以及先天性長QT綜合征的患者。

1.2 研究方法

1.2.1 血樣采集和qRT-PCR ACS患者在發病24h內從前臂靜脈采取空腹血標本，對照組于空腹體檢時采血3ml，肝素鈉抗凝。用EastepTM試劑盒提取血清總RNA。按Hairpin-itTMmiRNA qRT-PCR試劑盒說明書步驟進行qRT-PCR反應。ABI7500實時定量PCR儀測定并用2-ΔΔCt計算其相對表達量。

1.2.2 QTd測算 GEMAC1200心電圖儀記錄患者入院1h內的12導聯心電圖供分析。由同一人測量同期同步12導聯心電圖QT間期，以各導聯QRS波離開等電位線為Q波起點，T波終點判斷：①T波與等電線交點；②T波降支切跡與等電線的交點；③有U波存在時取T波與U波交界的最低點。除外T波、U波分界不清的導聯，各導聯連續測量3個心動周期取其均值，計算公式：QTd=QT（max）-QT（min），為校正心率影響，用Bazett's公式：QTc= QT/(R-R）1/2計算，QTcd=QTc（max）-QTc（min）[6]。

1.3 統計學處理

用SPSS17.0軟件進行統計學分析，計量資料均以均數±標準差（±s）表示，均數比較用t檢驗或單因素方差分析，用線性相關分析QTd與miR-499的關系。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床特征

本研究共納入37例AMI患者，其中男性21例，女性16例。91例UA患者，其中男性62例，女性29例。48例健康體檢者作為對照組，其中男性29例，女性19例。見表1，各組患者性別、年齡及甘油三酯（TG）水平無統計學差異(P>0.05)。與對照組相比，AMI組血糖、收縮壓、舒張壓、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（HDL-C）及低密度脂蛋白（LDL-C），UA組收縮壓、HDL-C及LDL-C水平差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 外周血miR-499的表達水平分析

如圖1所示，AMI及UA患者外周血miR-499水平均較健康對照組(CTL)升高（見圖1）。

圖1

2.3 miR-499與QTd的相關分析

與對照組相比，ACS組QTd及QTcd值均明顯高于升高（詳見表2）。ACS患者MiR-499與QTd值呈顯著正相關（r=0.321，P=0.0046）。

表1 臨床資料分析（±s）

表1 臨床資料分析（±s）

注：與對照組相比*P＜0.05，#P＜0.01。

組別 年齡（歲） 空腹血糖 收縮壓 舒張壓TCTGHDL-CLDL-C（mmol/L） （mm/Hg） （mm/Hg） （mmol/L） （mmol/L） （mmol/L） （mmol/L）研究組AMI69.2±7.97.3±1.4#152±18#93±8*4.72±0.99*1.69±0.721.11±0.27*3.69±0.96*UA67.4±5.84.7±1.1131±13*87±94.06±1.111.80±1.191.32±0.36*2.77±1.1*對照組68.1±5.14.6±0.4122±1478±103.72±0.891.74±0.781.83±0.412.07±0.81

表2 QTd值比較（±s）

表2 QTd值比較（±s）

注：與對照組相比*P＜0.05。

組別ACS組CTL組例數（n）128 48 QTd 58.67±14.31*37.44±9.42 QTcd 61.37±15.17*41.09±8.73

3 討論

ACS是由于動脈粥樣硬化斑塊破裂或糜爛，伴有不同程度血栓形成、血管痙攣及栓塞引起心肌急性缺血所導致的一組綜合征。諸多研究證明缺血、缺氧可引起心肌細胞損傷，導致細胞膜去極化及膜泵能量缺乏，使局部復極不均一性加重，為折返創造了條件，心肌細胞電活動紊亂，容易誘發惡性心律失常，QTd是心肌最早復極與最晚復極的時間差值，是一種簡便、無創地反映心肌復極不均一性和電活動不穩定性的方法。近年的研究發現QTd延長的程度與心血管事件的發生及預后相關[7]。目前關于QTd正常參考值尚無統一標準，一般認為QTd參考范圍為30-50ms[8]。本文中ACS患者QTd及QTcd較對照組明顯延長，并且與miR-499呈正相關。近年來研究發現，miRNAs在調控心血管系統發育和功能上起重要作用，As患者血管中有44中miRNAs上調57種miRNAs下調[9]，并且miRNAs水平的改變與心律失常存在密切關系。研究發現miR-499可能參與了動脈粥樣硬化的進程。MiR-499是心肌特異的微小RNA，參與了心肌肥厚、重構等進程的調節。Corsten等研究發現AMI患者血漿miR-499水平超過不典型胸痛患者約100倍[10]。對小鼠冠狀動脈結扎模擬AMI，結扎后4h和24h miR-499分別增高到103倍和95倍[11]。

本研究表明，與對照組相比miR-499在ACS患者血清中表達增加超過30倍，以其對心肌缺血損傷反應的敏感性及特異性可能成為利于早期及時診斷ACS的生物學標志物及新的治療靶點。同時miR-499與QTd呈正相關，而QTd增加是患者發生惡性心律失常事件的一個危險信號。我們認為可將二者聯合起來，作為一種對ACS患者快捷、安全、簡單、有效的病情及近期預后評估方法。因此，血漿miR-499水平及QTd對臨床醫生識別和篩選高危患者，進行積極的治療和監護，具有重要的臨床實用價值。

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Expression of microRNA-499 in serum of patients with acute coronary syndrome and its correlation with QT dispersion

LYU Jin-lin1,WU Xin-hua2,YIN Xue-yan1,LI Li-hua1,YANG Ying2,LUO Wen-juan2,ZHANG Lei2
(1.Dali University,Dali 671000,China; 2.The Affiliated Hospital of Dali University,Dali 671000,China)

Objective To investigate the expression of microRNA-499(miR-499)in peripheral blood in patients with acute coronary syndrome (ACS)and its correlation with QT dispersion.Methods A total of 128 patients with ACS who were admitted to Department of Cardiology in The Affiliated Hospital of Dali University from May 2014 to April 2015 were enrolled,and serum samples and clinical data were collected.A total of 48 healthy persons who underwent physical examination were enrolled as control group.The expression of miR-499 in serum and its correlation with QT dispersion were analyzed.Results The ACS group had significantly higher serum miR-499 level,QT dispersion,and corrected QT dispersion than the control group,and the expression of miR-499 was positively correlated with QT dispersion.Conclusion The expression of miR-499 is upregulated in serum of patients with ACS and is positively correlated with QT dispersion.Therefore,it may become a new potential target for the diagnosis and treatment of ACS and provide an important reference for prognostic evaluation.

Acute coronary syndrome;microRNA-499;QT dispersion

云南省應用基礎研究計劃項目(編號：2012FD037)

呂晉琳，1982年生，女，云南大理人，博士研究生在讀，主治醫師，主要研究方向為冠心病基礎與臨床方面。